紫外-可见分光光度法测定药用胶囊中的铬含量

肖俊辉，周玉生（1.南华大学附属第二医院药剂科，湖南 衡阳 421001；2.南华大学药物药理研究所，湖南 衡阳 421001）

目前，胶囊已经成为除片剂外的主要口服固体制剂剂型，制备胶囊的主要原料是药用明胶。市场上劣质明胶主要是鞣制过含铬的皮革废料生产的工业明胶[1]，其含有六价铬离子易被人体吸收，从而引起皮肤湿疹、黏膜炎、喘息性气管炎等疾病，对肝脏、肾脏等器官产生危害，破坏血液系统及细胞，导致骨骼方面的疾病发生，且有致癌的隐患，甚至影响人的遗传基因DNA。

2010年3月，我国重新修订了空心胶囊明胶的质量标准，相比2000年版的标准，增加了铬检查，规定铬含量不得大于百万分之二。2010年版《中国药典》（二部）采用原子吸收光谱法测定药用胶囊中铬含量。此法虽具有精确灵敏等优点，但检测时间长、前处理方法复杂[2]、需要大型仪器、不能实现现场检测等缺点，给检测带来诸多不便[3]。为此，笔者利用干法灰化法处理胶囊，采用二苯碳酰二肼显色后以紫外-可见分光光度法测定铬的含量，其使用设备简单、操作方便、结果准确。

1 材料

UV2550紫外-可见分光光度仪、AA6800型原子吸收分光光度仪、AY220型电子分析天平（日本岛津公司）；XT-9900型智能微波消解仪（上海新拓分析仪器科技有限公司）。

铬标准液（济南众标科技有限公司，标准编号:GBWE081001，质量浓度:1.000 mg/ml）；磷酸盐缓冲液、1 mol/L氯化钠溶液、0.5%高锰酸钾溶液、10%尿素溶液、10%亚硝酸钠溶液、0.5%焦磷酸钠溶液、二苯碳酰二肼的丙酮溶液均为试验时自配；所用试剂均为分析纯，试验用水为去离子水。

胶囊来源:市面随机购买10种药品胶囊，清空内容物，用少量水清洗3次，标记为样品1～10，其详情见表1。

表1 胶囊样品详情Tab 1 Details of capsule sample

2 方法与结果

2.1 波长选择

取标准铬溶液适量，加入1 mol/L硫酸10 ml、1 mol/L氯化钠溶液10 ml、去离子水10 ml，过滤加热煮沸，滴加0.5%高锰酸钾至溶液不褪色，加入10%尿素溶液10 ml，剧烈振摇下滴加10%亚硝酸钠溶液至溶液褪色，加0.5%焦磷酸钠溶液2.0 ml、二苯碳酰二肼的丙酮溶液0.5 ml；同时做空白对照。于380～700 nm测其吸光度，结果表明其在540 nm波长处有最大吸收，光谱见图1。

图1 紫外-可见吸收光谱Fig 1 UV-visible absorption spectrum

2.2 线性关系考察

取标准铬溶液0、0.20、0.40、0.60、1.00 ml，分别相当于含铬0、4.0、8.0、12.0、20.0 μg，按“2.1”项下方法于540 nm波长处测其吸光度，以吸光度（y）对质量浓度（x）绘制工作曲线。结果，线性回归方程为y＝0.01833x－0.0022（r＝0.9997），表明铬检测质量浓度线性范围为0.2～1.0 μg/ml。

2.3 溶液稳定性考察

在试验中，笔者发现吸光度随时间延长而增大，15 min后趋于稳定。因此试验必须在定容15 min后开始测定，以保证结果的准确性。精密吸取标准铬溶液1.00 ml，依法配制后于2、4、6、12、24 h内测定含量，结果其RSD为0.64%，表明本试验溶液在24 h内稳定性良好。

2.4 精密度试验

精密吸取标准铬溶液1.00 ml，按“2.1”项下方法重复测定7次，RSD＝0.78%，表明本试验方法精密度良好。

2.5 重复性试验

精密吸取标准铬溶液7份，每份1.00 ml，按“2.1”项下方法测定，结果含量的RSD＝0.94%，表明本试验方法重复性良好。

2.6 回收率试验

在不同胶囊样本中分别加入不同量的铬进行加样回收试验，测得铬的平均回收率为100.03%，RSD＝0.05%，详见表2。

表2 回收率试验结果（n＝5）Tab 2 Results of recovery tests（n＝5）

2.7 共存离子的影响

本试验考察了一些共存离子对方法的影响。结果显示在测定的相对误差小于5%的情况下，500倍的K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Ca2+、Ni2+、Fe2+，200倍的Ba2+、Al3+、Cu2+，100倍的Pb2+均对试验无干扰；10倍的V5+会生成棕黄色络合物，200 mg/L的Mo6+会生成紫红色络合物，其络活物均不稳定，在10 min内消失成无色；Fe3+会生成黄棕色络合物，因此，本试验通过加入焦磷酸钠溶液屏蔽Fe3+排除干扰；Ag+会生成紫红色络合物，因此，本试验通过加入氯化钠溶液沉淀Ag+，排除试验干扰。

2.8 样品中铬含量测定

将样品胶囊剪碎，精密称取样品0.500 g，于坩埚中缓慢加热，碳化后，加浓硝酸数滴，观察到气体停止逸出，放入高温炉中，600℃加热2 h，取出冷却，加入1 mol/L硫酸10 ml、去离子水10 ml，溶解残渣，按“2.1”方法于540 nm波长处测其吸光度，通过线性回归方程测得其中铬含量，结果见表3。

表3 样品胶囊中铬含量测定结果（mg/kg，n＝3）Tab 3 Results of content determination of chromium in the capsule samples（mg/kg，n＝3）

2.9 与原子吸收光谱法测定结果比较

参照2010年版《中国药典》“明胶空心胶囊”[4]项下规定，按程序微波消解样品，采用原子吸收光谱法测定铬含量[5]，并与本试验测定结果比较。结果表明，两种测定方法结果比较无显著差异（n＝10，t＝1.894，P＞0.05）。微波消解样品程序见表4，两种测定方法结果比较见表5。

表4 微波消解程序Tab 4 Working conditions of the microwave

表5 两种方法测定结果比较（mg/kg）Tab 5 Comparison of results between 2 kinds of methods（mg/kg）

3 讨论

周涛[6]报道了胶囊经预处理后加显色剂后与标准铬溶液对照液比较，检测空心胶囊铬限量的方法。该法虽然操作简便，但其检测结果不能定量，而且人为主观因素对结果影响很大，适用范围窄。而本试验检测结果客观准确，能满足不同情况下的定量检测。

本试验采用《食品添加剂》明胶GB6783-1994国家标准[7]中干法灰化法对胶囊样品进行前处理。王彩艳等[8]对干法灰化法与微波消解法的效果进行了比较研究，发现干法灰化法无铬元素丢失、使用仪器简单、处理效果良好，故本试验采用此法进行样品前处理。

综上，本试验操作简便快捷，无需昂贵仪器，精密度、回收率及重复性均较好，结果可靠准确；与《中国药典》规定的原子光谱法测定结果比较，两者无显著性差异，可为胶囊中的铬提供了一种简便有效的含量检测方法。

[1]姚龙坤.药用明胶质量对胶囊安全性的影响[J].明胶科学与技术，2006，26（4）:204.

[2]黄辉，李本涛，邵鸿飞.微波消解-石墨炉原子吸收光谱法测定胶囊中的痕量铬[J].化学分析计量，2011，20（3）:30.

[3]谢秀红，李勇勤.药用明胶硬胶囊壳中重金属含量的研究[J].今日药学，2010，20（1）:28.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:1204-1205.

[5]韩丽琴，董顺福，刘建华.金银花中金属元素与总黄酮含量的测定[J].中国药房，2007，18（33）:2596.

[6]周涛.检测空心胶囊铬限量的简便方法[J].明胶科学与技术，2009，29（3）:139.

[7]国家技术监督局.GB6783-1994中华人民共和国国家标准:食用添加剂明胶[S].1994-01-02.

[8]王彩艳，牛艳.干法灰化法与微波消解法测定枸杞中铬[J].农业机械，2012（3）:126.