血管性痴呆患者血清可溶性凋亡因子水平及其与糖脂代谢的关系

齐若兵，陈斌华，谭忠林，陈致宇，尹 岩，刘 健，余 震，朱婉儿，夏 泳

血管性痴呆病因的假说有很多种，但是最明确的病因却是脑血管意外。脑血管意外的发生导致脑缺血缺氧低灌注，长期处于缺血性低灌注状态的小动脉使得该部位的神经元坏死，逐渐出现认知功能障碍[1]。早在1999年就有研究报道急性脑卒中损伤中涉及凋亡过程[2]。另有研究报道创伤性脑损伤患者血清中sFasL、sFas均于伤后24 h升高[3-4]。而Fischer等[5]研究发现，不仅脑血管意外可以导致认知功能下降，血管性危险因素也是直接导致认知功能下降的重要原因，如糖代谢紊乱、脂代谢紊乱等。故本研究就可溶性凋亡因子sFas和sFasL在血管性痴呆发生发展中的作用及其与糖脂代谢的关系进一步探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2007年6月—2011年1月杭州市第七人民医院老年门诊和住院的血管性痴呆患者80例(观察组)，均符合国际疾病伤害及死因分类标准第10版血管性痴呆的诊断标准。其中男40例，女40例；年龄65～90岁，平均(75.3±5.9)岁；总病程4个月～5年。服用促智药盐酸多奈哌齐片(安理申)40例，盐酸美金刚片(易倍申)18例，石杉碱甲片15例，1年以上未服用促智药7例。排除标准：(1)伴有严重复合伤或联合伤者；(2)患有自身免疫性疾病、恶性肿瘤者；(3)患有造血系统疾病如贫血、血友病者；(4)伴有严重感染者；(5)手术过程中输血者；(6)有导致认知功能障碍的其他病史；(7)使用过抗精神病药物，包括典型和非典型抗精神病药物；(8)不同意参与该项研究者。

另选取同期本院义诊的社区老年健康志愿者50例(对照组)，其中男25例，女25例；年龄65～79岁，平均(70.6±3.7)岁。简易精神状态量表(MMSE)和日常生活活动能力量表(ADL)评定均无认知功能损害，无脑血管意外、慢性疾病及肿瘤史。两组受检者的性别构成及年龄间有均衡性。

1.2 仪器及试剂 血清sFas、sFasL测定采用Thermo测量仪，试剂盒：Human sAPO-1/sFas酶联免疫吸附测定(ELISA)BMS245(96 tests)和Human sFas Ligand ELISA BMS260/2(96 tests)均为联科生物技术有限公司代理的奥地利产品。

1.3 方法

1.3.1 血样的采集及处理 清晨6时，抽取两组受检者的空腹静脉血2 ml，自凝后分离血清，并冷藏于-20 ℃冰箱中备用。采用双抗体夹心ELISA法检测两组受检者血清sFas、sFasL水平：酶板中与单抗结合，温室孕育2 h，加入生化素抗人sFas或sFasL抗体，经酶联与四甲基联苯胺(TMB)底物结合显色；终止显色后测吸光度(A)值，A值与sFas或sFasL水平呈正比；绘制标准曲线，求得标本中sFas、sFasL水平。同时，另取观察组患者的空腹血液检测血脂〔总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)〕、血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)水平，并测量身高、体质量，计算体质指数(BMI)。

1.3.2 问卷调查 在采集血样的同一天，在统一指导下一次性让两组受检者完成MMSE和缺血指数量表(HACHINSKI)的填写。对文盲或不能自己完成问卷的人，由工作人员口述问卷内容，老人做答后由工作人员代为填写。

(1)MMSE是最具影响的认知缺损筛选工具之一，最初由Folstein于1975年编制。本研究以张氏根据美国一学者在芝加哥唐人街及蔡国钧在上海的预初试验结果修订的版本为主[6]。MMSE评分越低表示认知功能损害越明显。(2)HACHINSKI是1975年由Hachinski制定的血管性痴呆简易检查量表[7]，专门用于血管性痴果的简易检查和鉴别，由13个项目组成。它来源于临床经验，有Hachinski与Rosen两种记分法，本研究采用Hachinski记分法，分数越高表示脑缺血越明显。

2 结果

2.1 两组受检者血清sFas和sFasL水平比较 两组受检者血清sFas、sFasL水平比较，差异均有统计学意义(P<0.01，见表1)。

表1 两组受检者血清sFas、sFasL水平比较

2.2 观察组患者血清sFas、sFasL与智能水平的相关分析 相关分析结果显示，血清sFas水平与患者HACHINSKI评分呈负相关(r=-0.714，P<0.01)，而与BMI、TC、HbA1c、MMSE评分呈正相关(r值分别为0.352、0.472、0.449、0.799，均P<0.01)。血清sFasL水平与患者TG水平呈负相关(r=-0.285，P<0.01)，而与空腹血糖、HbA1c水平呈正相关(r值分别为0.521、0.856，均P<0.01)。此外，血清TC水平与MMSE评分呈正相关(r=0.394，P<0.01)，与HACHINSKI评分呈负相关(r=-0.418，P<0.01)。

3 讨论

Fas/FasL系统包括Fas、FasL及可溶性形式(sFas、sFasL)，属于神经生长因子(NGF)/肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族，其表达主要与细胞的组织学特点及分化程度有关，主要表达于活化的成熟T、B淋巴细胞表面。Fas/FasL作为介导细胞凋亡的重要膜蛋白分子，在正常免疫反应、造血调控、机体细胞数量的恒定与调控、无功能或异常细胞的清除等生理功能以及多种遗传性、获得性疾病的病理机制中具有十分重要的意义。有研究发现细胞凋亡参与了脑出血的继发性损伤，且与病情的严重程度密切相关[8]。Qureshi等[9]在12例脑出血患者血肿标本中也检测到了明显的凋亡细胞。Bennett等[10]研究了慢性脑缺血后神经元损害的机制，发现海马内有神经元凋亡，其数量与大鼠的认知功能障碍相关。Xu等[11]研究也发现慢性脑缺血2周后开始出现细胞凋亡，3周即到达高峰。本研究结果显示，血管性痴呆患者血清sFas、sFasL水平均显著高于健康老年人，与国外研究相符；国内研究认为健康老年人sFasL水平较年轻人降低[12]，也表明血管性痴呆患者外周血清sFas、sFasL可能参与了细胞凋亡的过程。

近年来不仅脑血管意外可导致认知功能下降，而且代谢性因素尤其是血管危险性因素，如糖代谢紊乱、脂代谢紊乱等也会加重认知功能减退[13-14]。从病理生理机制上，高血糖内环境使得体内容易产生自由基，对微血管损伤较明显[15]，尤其对脑白质血管引起缺血、缺氧、变性及脱髓鞘的改变易导致认知功能障碍[16]。Ebady等[17]对60例糖尿病患者进行研究，发现其认知功能较非糖尿病组低。本研究结果显示，血清凋亡促进因子——sFasL与空腹血糖、HbA1c水平呈正相关，说明高血糖内环境可能会促进细胞凋亡，继而引起认知功能障碍。虽然本研究中血管性痴呆患者未合并糖尿病，但是血糖及HbA1c与sFasL有一定相关性，可能在血管性痴呆发病机制上有潜在的联系。此外，本研究发现血管性痴呆患者血清TC水平与MMSE评分呈正相关，与HACHINSKI评分呈负相关。这与Piguet等[18]发现高胆固醇血症可能是延缓痴呆的保护性因素的结论相符。但另有研究发现，中年时期血脂升高是晚年发生认知功能下降的危险因素[19]。当然，对于脑卒中的血管性危险因素如糖尿病、血脂异常等也是血管性痴呆的危险因素也有持不同观点者[20]，故需要进一步论证。总之，对血清sFas、sFasL的监测及血脂、血糖的检测，可能有助于血管性痴呆的早期诊断。

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