Notch-1和Survivin在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

史永亮

甲状腺癌是最常见的内分泌器官恶性肿瘤之一，好发于中青年女性，其病理类型以乳头状癌为主，具有恶性程度高、预后差的特点，然而其病变机制目前尚不明确。众多研究证实，恶性肿瘤发生发展的重要原因是肿瘤细胞的过度增殖和凋亡受抑。Notch-1和Survivin是调控细胞增殖、分化和凋亡的重要蛋白［1，2］。本研究采用免疫组织化学SP法观察甲状腺乳头状癌组织Notch-1和Survivin的表达及二者的相关性，并分析其临床意义，探讨Notch-1和Survivin在疾病发生发展中的作用，为疾病诊治提供理依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2010年1月至2011年10月手术切除的甲状腺乳头状癌组织蜡块标本80例，经病理确诊均为乳头状癌(甲状腺乳头状癌组)。其中男10例，女70例;年龄28～56岁，中位年龄41.5岁;所有患者术前均未接受放疗、化疗及内分泌治疗。TNM临床分期:Ⅰ+Ⅱ期58例，Ⅲ+Ⅳ期22例。80例甲状腺乳头状癌中有颈淋巴结转移者34例，无颈淋巴结转移者46例。同时选取我院甲状腺腺瘤70例(甲状腺腺瘤组)和门诊健康志愿者50例为对照组。3组性别比、年龄等一般资料差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 主要试剂 羊抗人Notch-1单克隆抗体、兔抗人 Survivin多克隆抗体为Santa Cruz公司产品。免疫组化SP试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司产品。

1.3 方法 采用免疫组织化学SP法检测Notch-1和Survivin的表达，严格按照试剂盒说明书操作，用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。判定标准:细胞质(核)内检出棕黄色颗粒，400倍镜下随机选取5个视野计数200个细胞，着色细胞数≥10%为阳性，＜10%即为阴性。

1.4 统计学分析 应用SPSS 10.0统计软件，计数资料采用χ2检验，相关性比较采用Spearman等级相关性分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Notch-1和Survivin在不同甲状腺组织中的表达 Notch-1在甲状腺乳头状癌组的阳性表达率为22.5%(18/80)，显著低于甲状腺腺瘤组织78.6%(55/70)和对照组88.0%(44/50)的阳性表达率，差异有统计学意义(P＜0.05);Survivin在甲状腺乳头状癌组的阳性表达率为70.0%(56/80)，显著高于甲状腺腺瘤组织12.9%(9/70)和对照组织0(0/50)的阳性表达率，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 Notch-1和Survivin在甲状腺乳头状癌组织表达的相关性80例甲状腺乳头状癌组织中，Notch-1和Survivin的表达呈负相关(r= －0.512，P＜0.01)。见表 1。

2.3 Notch-1和Survivin表达与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系 Notch-1和Survivin表达与患者年龄、性别、肿瘤大小无关(P＞0.05)，而与临床分期和淋巴结转移密切相关，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 Notch-1和Survivin表达与甲状腺乳头状癌临床病理特征关系例(%)

3 讨论

Notch-1基因最早是在果蝇中发现，之后在哺乳动物中也发现其表达。Notch-1信号通路不仅广泛参与细胞的分化、发育、增殖和凋亡，现证实也和恶性肿瘤的发生密切相关，但其作用存在复杂性。有研究发现Notch-1基因在胰腺癌、卵巢癌、宫颈癌等恶性肿瘤中高表达，在前列腺癌、甲状腺髓样癌中低表达。有学者总结得到的结论是，Notch-1基因在肿瘤中的作用与不同的细胞种类和细胞内环境有关。杨晶金等［3］采用Real Time-PCR技术和免疫组化技术分别检测甲状腺乳头状癌组织Notch-1 mRNA和蛋白的表达水平，结果显示Notch-1 mRNA表达水平为对照组的0.2228±0.1202，Notch-1蛋白的阳性表达率为20%。我们的免疫组化结果显示，Notch-1蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率为22.5%，与对照甲状腺组织相比，表达水平显著降低。

恶性肿瘤的发生发展与细胞凋亡过程失调密切相关。Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAP)的重要成员，是目前已知最强的凋亡抑制因子，也是肿瘤标志物方面研究的热点。Survivin在正常成熟组织中不表达，在乳腺癌、大肠癌、肺癌等多种恶性肿瘤中异常高表达，发挥抗凋亡和促进肿瘤细胞增殖的作用［2］。刘钢等［4］采用免疫组化法检测不同人群组织 Survivin蛋白的表达情况，研究发现甲状腺癌组织Survivin表达水平显著高于甲状腺腺瘤及癌旁正常组织，呈过表达状态。赵海宝［5］同样发现Survivin在甲状腺乳头状癌组织中表达增高，且其高表达与病理分期和淋巴结转移状况有关。本实验结果显示，甲状腺乳头状癌组织Survivin的阳性表达率为70.0%，显著高于甲状腺腺瘤组织和正常甲状腺组织，且其表达与甲状腺乳头状癌临床分期和淋巴结转移密切相关，提示Survivin表达与疾病进展、转移及预后有关，与上述文献［5］报道一致。目前研究认为Survivin抗凋亡的主要机制是阻断了caspase-3和caspase-7的激活，后二者是细胞凋亡途径的关键激酶，Survivin与之结合后直接造成激酶的失活，从而使凋亡进程受抑［6，7］。

本研究结果显示，Notch-1和Survivin与肿瘤临床分期和淋巴结转移密切相关，且二者表达呈显著负相关(r=－0.512，P＜0.01)，提示Notch-1和Survivin共同参与了肿瘤的侵袭转移过程。最新研究显示，Notch-1信号通过抑制核转录因子NF-κB的活化调控一些下游基因的表达，从而抑制细胞增殖和促进凋亡进程［8］。由于Survivin基因的转录和表达依赖于NF-κB的活化，因此有可能Notch-1信号对Survivin基因的表达存在负向调控。这与我们的实验结果一致:即甲状腺乳头状癌组织中Notch-1基因低表达和 Survivin基因高表达，但肿瘤细胞内Notch-1和Survivin基因之间的具体调控机制尚有待深入研究。

1 Leong KG，Karsan A.Recent insights into the role of Notch signaling in tumorigenesis.Blood，2006，107:2223-2233.

2 孟予城，陈洪杰，杨树森，等.Survivin、XIAP在甲状腺乳头状癌组织中表达的研究.河北医药，2011，33:661-663.

3 杨晶金，姚军，沈峰清，等.Notch信号通路与甲状腺乳头状癌的关系.中国细胞生物学学报，2012，34:120-126.

4 刘钢，史火喜，袁又能，等.凋亡抑制基因Survivin在甲状腺癌组织中的表达及意义.中华临床医师杂志，2011，5:840-843.

5 赵海宝.Cyclin和Survivin蛋白凋亡抑制基因Survivin在甲状腺癌组织中的表达及意义.山西医科大学学报，2011，42:989-992.

6 Ulukus EC，Kargi HA，Sis B，et al.expressionin non-small-cell lung carcinomas:correlation with apoptosis and other apoptosis-related proteins，clinicopathologic prognostic factors and prognosis.Appl Immunohistochem Mol Morpho，2007，15:31-37.

7 Xu JH，Wang AX，Huang HZ，et al.Survivin shRNA induces caspase-3-dependent apoptosis and enhances cisplatin sensitivity in squamous cell carcinoma of the tongue.Oncol Res，2010，18:377-385.

8 金晓燕，梁勇，陈佳玉，等.Notch在甲状腺乳头状癌中的表达及意义关系.中国卫生检验杂志，2011，21:1-3.