反复妊娠丢失与血浆蛋白Z的相关性研究

韩卫华

妊娠丢失包括自发性流产、胚胎停育及胎死宫内，生育期妇女妊娠丢失的发生率为1% ～2%［1］，原因涉及解剖、自身免疫、内分泌及染色体异常等多方面，但仍有30% ～40%［2］的妊娠丢失原因不明。随着分子生物学研究的发展，近年来遗传性或获得性凝血系统异常与妊娠丢失的关系日益相起国内外学者的广泛关注。有学者认为子宫胎盘血栓的形成是妊娠丢失的原因之一，并有研究结果表明血浆蛋白Z水平与血栓形成有密切关系，故本项目旨在通过研究妊娠丢失女性及健康经产妇体内血浆中PZ的含量变化，探讨血浆PZ水平与反复妊娠丢失的相关性［2，3］。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2009年1月至2012年9月在我院妇产科就诊的60名彼此之间没有任何联系的，至少连续两次妊娠丢失及以上非连续妊娠丢失的妇女为研究组，其妊娠丢失一般都发生在妊娠早期大约8～12周，且排除妇科、激素或者染色体原因导致的妊娠丢失，抗磷脂抗体阳性均为阴性。另选60名健康的没有任何妊娠丢失史的经产女性作为对照组。所有研究组及对照组都没有发生过任何动脉或者静脉血栓、均排除糖尿病、高血压、肿瘤或遗传性易栓症等病史者，排除应用避孕药及影响凝血功能药物者。研究组年龄22～38岁，平均年龄(32±6)岁;对照组年龄20～35岁，平均年龄(32±5)岁。2组比较年龄差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 样本的收集与检测

1.2.1 血液标本采集与保存:以上标本严重溶血或是脂血均不能测定。所有处理措施均在告知患者及其家属前提下进行。采血时间据末次妊娠丢失发生时间均大于3个月，采集空腹肘静脉血3 ml，置于枸橼酸钠玻璃抗凝管内，于3 000 r/min离心20 min，分离血浆于－70℃冰箱保存备用，使用前室温溶化，3～4个月内完成批量项目测定。

1.2.2 实验试剂、仪器及设备:血浆蛋白Z(PZ)采用ELISA定量测定，应用购买的上海原叶生化科技有限公司的人蛋白Z(Protein Z)ELISA试剂盒，使用奥林巴斯Au5400全自动生化分析仪进行分析测定;所有操作按照试剂盒说明书由我院生化检验室主管检验师进行。

1.3 统计学分析 应用SPSS 17.0统计软件，计量资料以表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2组年龄差异无统计学意义，研究组血浆PZ含量低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 2组PZ含量的比较n=60，±s

表1 2组PZ含量的比较n=60，±s

注:与研究组比较，*P ＜0.05

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3 讨论

妊娠是育龄女性正常的生理过程，在此过程中全身多系统发生相应的生理性变化以适应机体的改变并为妊娠提供相应的条件。其中血液系统凝血状态的改变是其中很重要的一方面。在正常妊娠过程中，机体的凝血活性增强，凝血因子(如纤维蛋白原、凝血因子7810等)水平增高，而如蛋白C等抗凝因子水平下降从而导致妊娠期血液高凝状态［3］;同时，随着妊娠进展，胎盘纤溶抑制物的增多，纤溶系统的减弱，人们普遍认为这些机制是对防止分娩时大出血的一种保护，但同时也增加了血栓形成的风险，这种血栓形成的倾向是动静脉血栓形成的高危因素，凝血抗凝的失衡易导致微血栓的形成，影响母体－胎儿的血液循环，激活炎性反应，造成血管内皮的损伤，加重的血栓的形成，导致妊娠女性绒毛缺血缺氧，老化，胎盘组织的梗死，子宫胎盘血管纤维素坏死等变化，病理学研究表现为在绒毛滋养层表面有纤维蛋白或纤维蛋白样物质沉积，微血栓的形成，最终可导致子宫胎盘血管从部分到完全的阻塞，最终导致胚胎组织的凋亡，从而引起不良妊娠结局的发生［4，5］，因此，对于一次成功的妊娠来说，良好的母体血液凝血调节功能是非常重要的，当这种平衡紊乱时可导致妊娠丢失的发生。

PZ是Prowse等［6］1977年首次从牛血浆中分离出一种新的维生素K依赖性糖蛋白，属于丝氨酸蛋白抑制物超家族成员，是近些年来发现的一种新型抗凝血辅助因子。人类PZ发挥作用的制约因素就是其与磷脂结合以及解离速度过慢，所以血浆中PZ浓度的小范围变化，就可产生较明显的生理变化，在疾病过程中，检测血浆中PZ的浓度有着实际的意义。

人们最初认为，PZ的生理功能主要是发挥重要的促凝血功能，1995年Kemkes-Matthes等［7］的报道中证明了这一点，并且在此之前的动物试验中，研究发现牛PZ通过它与凝血酶间的反应，刺激磷脂表面和凝血酶间的反应，也揭示了PZ有助于凝血。随着研究的进展，Yin等［8，9］的研究表明认为PZ的生理功能是发挥抗凝血作用。目前，PZ在凝血过程中的促凝与抗凝双重调节作用已得到了广泛认可。

PZ作为在凝血过程中发挥双向调节作用的因子，在凝血过程中发挥一定的调节作用。近年来国内外有关血浆蛋白Z与血栓形成的研究引起了人们的兴趣，Gris等［10］研究发现不明原因的早期流产患者中血浆PZ水平降低会导致胎盘血栓形成的危性增加，从而引起不良妊娠结局的发生(如不明原因的流产，早产，胎膜早破及胎儿宫内生长受限)，他们认为蛋白Z缺乏可导致母体与胎儿之间胎盘血栓形成的危险增加，而国内目前在恶性实体肿瘤、血栓性疾病及脑卒中等方面的研究也提示血浆PZ与血栓形成有一定的关系。

基于血浆PZ复杂的抗凝血和促凝血角色，对于不良妊娠来说，PZ水平的高低作为可能的危险因子已经有过研究。但是得到的结论结果却相互矛盾:有些研究发现低的PZ水平会导致妊娠丢失风险的增加［10，11］，有些研究却表明两者之间根本没有任何关系［12］;基于以上相对矛盾的结论，本文设计一组对照试验研究，用来进一步研究PZ和不明原因的妊娠丢失之间的关系。在本研究中，反复妊娠丢失女性PZ含量低于正常健康经产妇，差异有统计学意义(P＜0.05);故推测血浆PZ水平降低与不明原因的反复妊娠丢失的发生有一定的关系，考虑其机理应与胎儿-胎盘循环中血栓形成后导致绒毛缺血缺氧直至坏死凋亡有关，但仍需进一步病理学研究证实。

由于血栓形成过程相当复杂，血浆 PZ与妊娠丢失的关系还存在争议，本文也仅推测血浆PZ降低可能与不明原因的反复妊娠丢失相关，还有待于进一步的基础及临床研究予以证实。通过进一步的研究，有望通过测定孕前及监测妊娠过程中孕妇PZ含量来预测妊娠结局，以便早期给予干预治疗，降低妊娠丢失的发生率。

1 徐磊，刘睿智.IL-1b、IL-IRA基因多态性与习惯性流产研究进展.中国妇幼保健，2010，25:2011-2012.

2 Rey E，Kahn SR，David M，et al.Thrombophilic disorders and fetal loss:a meta-analysis.Lancet，2003，361:901-908.

3 Bremme KA.Haemostatic changes in pregnancy.Best Pract Res Clin Haematol，2003，16:153-168.

4 Rey E，Kahn SR，David M，et al.Thrombophilic disorders and fetal loss:a metaanalysis.Lancet，2003，361:901-908.

5 Brenner B.Inherited thrombophilia and pregnancy loss.Best Pract Res Clin Haematol，2003，16:311-320.

6 Prowse CV，Esnouf MP.The Isolation of new warfarin-sensitive protein from bovine plasma.Biochem Soc Trans，1977，5:255-256.

7 Kemkes-Matthes B，Matthes KJ.Protein Z deficiency:a new cause of bleeding tendency.Thromb Res，1995，79:49-55.

8 Yin ZE，Huang ZF，Cui J，et al.Proyhrombotie phenotype of protein Z deficiency.Proc Natl Acad Sci USA，2000，97:6734-6738.

9 Kemkes-Matthes R，Neesm，Kuhnel G，et al.Protein Z influences the prothrombotic phenotype in factor V Leiden patients.Throb Res，2002，106:183-185.

10 Gris JC，Queue I，Dechaud H，et al.High frequency of protein Z deficiency in paitienta with unexplained early fetal loss.Blood，2002，99:2606-2608

11 Paidas MJ，Ku DHW，Lee MJ，et al.Protein Z，protein S levels are lower in patients with thrombophilia and subsequentpregnancy complications.J Thromb Haemost，2004，3:497-501.

12 Bretelle F，Arnoux D，Shojai R，et al.Protein Z inpatients with pregnancy complications.Am J Obstet Gynecol，2005，193:1698-1702.