动态监测诱导痰嗜酸性粒细胞对评价哮喘气道炎症的临床意义

赵 璇 王晓东

（山东省平度市人民医院 山东 平度 266700）

支气管哮喘的基本病理特征是气道炎症反应，它与病情恶化、气道结构重建密切相关［1］。有研究表明，EOS在哮喘气道炎症反应中起重要作用。EOS炎症程度可作为一个独立的指标来诊断哮喘和衡量哮喘病情［2］；ECP是EOS激活后释放的一种毒性蛋白，是EOS活化的标志，也是造成哮喘气道炎症的重要介质，可直接反映气道炎症状态［3］。为提高临床对哮喘的诊断及预后分析，我们于2004年12月至2008年12月对98例住院患者（哮喘急性发作组36例；哮喘治疗缓解组32例；健康对照组30例）采用诱导痰的方法，并进行动态监测诱导痰细胞学分类及ECP测定，旨在探讨其与气道炎症反应状态的关联，并评价其在哮喘诊断和预后分析的价值。

1 研究对象和实验方法

1.1 研究对象：研究对象均来自本院2004年12月至2008年12月期间住院病例：（1）哮喘的诊断标准及病情严重程度的分度均按中华医学会呼吸病学分会1997年修定的“支气管哮喘防治指南”［4］的标准进行；哮喘急性发作组36例，男20例，女16例，年龄22～82岁，平均（52±15）岁；哮喘治疗缓解组32例：男15例，女17例，年龄32～75岁，平均（53±12）岁，均为哮喘治疗后随访症状体征消失，并维持4周以上；（2）健康对照组30名：男15例，女15例，年龄28～64岁，平均（49±16）岁，为健康志愿的非吸烟者，无过敏史、无呼吸道疾病史，做痰诱导前1个月内无呼吸道感染。各组在年龄分布和性别组成上无显著性差异（P＞0.05）。

1.2 实验方法

1.2.1 痰液诱导及处理：哮喘患者（发作组和缓解组）诱导痰液前均吸入支气管舒张剂喘乐宁200μg，以预防哮喘发作；采用Brightling等［5］报道的方法：用3%高渗盐水超声雾化吸入15～20min，用力咳痰至培养皿，向痰液内加入4倍体积的0.1%的二硫苏糖醇，涡旋震荡10min；再加入等量的磷酸盐缓冲液震荡5min，2 000r／min离心10min；上清液分装，－70℃冻存待检。沉淀用磷酸盐缓冲液悬浮，用锥虫蓝拒染法鉴定细胞活力，＞50%为合格痰。制作细胞涂片，苏木精－伊红染色，光镜下进行细胞学分类。

1.2.2 诱导痰ECP测定：ECP检测采用荧光酶免疫法，按照ECP荧光酶免疫试剂盒的步骤，采用Pharmacia CAP变应原检测系统（瑞典，灵敏度2μg／L，测定范围2～200μg／L）检测。

1.2.3 统计分析方法：数据输入SPSS12.0统计软件包进行统计分析，数值以±s表示，多组间的比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用最小显著差异法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 实验结果

如（表1）所示，哮喘急性发作组EOS数量、ECP测定值明显高于哮喘治疗缓解组、健康对照组（P＜0.01）；健康对照组EOS、Neu数量、ECP测定值明显低于哮喘急性发作组、哮喘治疗缓解组（P＜0.01）；哮喘治疗缓解组EOS数量、ECP测定值明显低于哮喘急性发作组，但明显高于健康对照组（P＜0.05），哮喘治疗缓解组与哮喘急性发作组Neu数量无明显差异性。

3 讨论

近年，人们已经逐步认识到哮喘是一种包括嗜酸粒细胞、肥大细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞等炎症细胞浸润的慢性炎症性疾病，多种炎症细胞在气道浸润和聚集，相互作用，可以分泌50多种炎症介质和25种以上细胞因子，与炎症细胞相互作用构成复杂的网络，使气道反应性增高，气道收缩，黏液分泌增加，血管渗出增多。气道炎症最终导致气道壁组织结构破坏增厚、基底胶原沉积、平滑肌增生肥大、分泌物闭塞气道等病理改变。哮喘患者病情恶化可能是由于气道炎症加重所至。目前临床上主要以肺功能、患者的症状来间接评价气道炎症的轻重，这些间接方式的主要缺点是与气道炎症的相关性差。纤支镜检查证实，很多以肺功能和临床症状来指导治疗的哮喘患者其气道炎症持续存在。

表1 诱导痰细胞组成及ECP含量

诱导痰最早用于肺癌的诊断，20世纪90年代初，Pin等把诱导痰引入哮喘患者气道炎症评价；近十年来，随着诱导痰技术的改进和检测方法的完善，除细胞总数和淋巴细胞分类的重复性较差外，嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等细胞分类和上清液液相成分具有良好的重复性，使其成为一种无创评价气道炎症的重要方法。嗜酸性粒细胞在哮喘发病机制中有着重要地位。嗜酸性粒细胞是一种毒性细胞，可以通过释放胞质中的主要碱基蛋白（MBP）、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）、嗜酸性粒细胞衍生性神经毒素（EDN）等毒性颗粒蛋白损伤靶器官；这些颗粒蛋白是造成哮喘特征性表现的主要原因之一。其中，ECP是嗜酸性粒细胞活化后产生的主要毒性蛋白，能介导气道上皮和细胞破坏，诱导肥大细胞释放组胺等，造成气道炎症，在嗜酸性粒细胞性炎症中起到重要作用。

长期治疗方案应以气道炎症是否抑制为指导原则，根据气道的炎症轻重及时调整药物剂量，使气道炎症得到有效控制的同时尽量减少药物的用量。因此，临床上连续监测患者诱导痰EOS和ECP的变化，有助于预测哮喘病情的波动情况，对于需要长期治疗的慢性支气管哮喘患者，针对病情制订相应的治疗方案，具有一定的临床参考价值。

［1］British Thoracic Society.The British guidelines on asthma management.Thorax，1997，52：S1－S21

［2］Rosi E，Ronchi MC，Grazzini M，et al.Sputum analysis，bronchial hyperresponsivness，and airway function in asthma：Results of a factor analysis.J allergy Clin Immunol，1999，103：232－237

［3］傅蓉，陈光瑾，马瑞琴，等.哮喘患者血清嗜酸性细胞阳离子蛋白及白细胞介素－2受体观察.中华结核和呼吸杂志，1999，22：211－212

［4］中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南（支气管哮喘的定义、诊断、治疗、疗效判断标准及教育和管理方案）.中华结核和呼吸杂志，1997，20：261－267

［5］Brightling CE，Ward R，Goh KL，et al.Eosinophilic bronchitis is an important cause of chronic cough［J］.Am J Respir Crit Care Med，1999，160（2）：406－410