玉米与连钱草套种对连钱草品质的影响

吴芝园 刘竞天 陆海峰 朱 缨 魏 楠

玉米与连钱草套种对连钱草品质的影响

吴芝园 刘竞天 陆海峰 朱 缨 魏 楠

（江苏省苏州卫生职业技术学院检验药学系，苏州215009）

目的 通过检测单作、套种两种培育模式连钱草药材中总黄酮成分含量，来分析连钱草套种玉米的可行性。方法 分光光度法。结果 单作、与玉米套种两种培育方式收获的连钱草中的总黄酮含量，无显著差别，而无论是单作还是与套种玉米七月采收连钱草的总黄酮含量，明显高于十一月收获的连钱草，说明单作与套种玉米方式对连钱草药材品质有效成分的影响不明显、而采收时间对连钱草的总黄酮含量影响较大。结论 连钱草套种玉米的方式增加土地利用率，且不会明显降低连钱草的有效成分，可以提高种植的经济回报率。

连钱草；分光光度法；总黄酮；套种

连钱草，为唇形科植物活血丹Glechoma longituba（Nakai）Kupr.干燥地上部分入药，为《中国药典》2010版一部收载品种。功效利湿通淋，清热解毒，散瘀消肿，临床主要用于热淋，石淋湿热黄疸，疮痈肿痛，跌打损伤。活血丹茎叶含有的化学成分主要有萜类、黄酮类、挥发油类以及有机酸类和甾体类。现代药理研究其作用具有多样性，主要有利尿作用、利胆作用、溶解结石作用，降血糖作用。抑菌实验表明，连钱草对金黄色葡萄球菌极度敏感，对痢疾杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌中度敏感。

活血丹除西北部分地区外，我国大部分地区有分布，尤以江苏产量大，质量优，为江苏道地药材，故称“江苏金钱草”。其虽在全国大部分地区都有分布，然其储量远远不够资源开发的需要，且由于采集量大，野生资源已不断减少。

本实验通过单作、与玉米套种两种培育方式采收的连钱草中总黄酮的含量的对比，来评价两种种植方式对连钱草品质的影响。

1 实验的前期供试连钱草的培育及准备工作

本实验选中盱眙县王店乡的栽培连钱草作为引种样本，移植到本院药用植物院中，经过初步改进种植条件，成活。

对实验进行规划，在植物园中丈量选择相聚30米，两块样田，经过测量其面积为500cm×300cm，其中一块样田，依照株间距约80cm，行间距120cm，种植连钱草，4月末移种玉米，当年收获玉米，当年7、11月采收连钱草。另外一块样田，自始至终单作连钱草，也是当年7、11月采收连钱草，将两块样田的连钱草，分别晒干，准备鉴定其中的总黄酮成分。

2 供试连钱草中总黄酮的含量的对比

2.1 材料

2.1.1 仪器 UV-2450PC紫外可见分光光度计（日本岛津）；CQ250超声波清洗仪（上海超声波仪器厂）。

2.1.2 试药 芦丁对照品（南京春秋生物有限公司，批号：RU20121202A）；亚硝酸钠（分析纯，中国天津巴斯夫化工有限公司，批号2008年6月03号）；三氯化铝（分析纯，天津大茂化学试剂厂，批号2008年5月06日）；氢氧化钠（分析纯，无锡市展望化工试剂有限公司，批号08012105）

2.2 方法

2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取120℃常压干燥至恒重的芦丁对照品0.0118g，置于100ml容量瓶中，用60ml 60%乙醇超声溶解（容量瓶密塞），放冷，用60%乙醇定容，得到0.11mg·ml-1芦丁对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的配制 精密称取经干燥的连钱草（单作和套种）粉末约0.5g，置100ml具塞容器中，精密加60ml 60%乙醇，密塞，称重，超声提取30min。放冷，密塞，再称重，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液即得供试品溶液。

3 结果与讨论

3.1 测定波长的选择 精密称取芦丁对照品5mg，置于25ml容量瓶中，加60%乙醇约15ml，超声使其溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，得芦丁标准溶液（0. 2mg·ml-1）。精密吸取芦丁标准溶液8ml，置于25mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min，加三氯化铝试液1ml，摇匀，放置6min，再加5%的氢氧化钠10ml，加水至刻度，摇匀，于波长200～800nm范围内扫描，发现在508nm处有一最大吸收峰。精密称取2g连钱草粗粉，置于具塞锥形瓶中，加50ml 60%乙醇，超声50min，过滤，取续滤液，不显色，直接于波长200～800nm范围内扫描；再取续滤液1ml，照对照品芦丁一样显色后，于波长200～800nm范围内扫描，发现在501nm处有一最大吸收峰。见图1。

3.2 标准曲线 精密量取芦丁对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0ml，置于10ml容量瓶中，分别加入60%乙醇使成7ml，精密加入5%亚硝酸钠0.3ml，摇匀，放置6min；精密加入10%三氯化铝0.3ml，摇匀，放置6min；加入1mol／L的氢氧化钠2ml，用60%乙醇

定容，摇匀，以不加芦丁对照品溶液其他同法操作得到的溶液作为空白对照，在502nm处测定吸光度。求得回归方程为：C（mg／ml）＝0.076235A＋0.001682（r＝0.9996，n＝6）；芦丁对照品在0.01～0.07mg／ml范围内呈良好的线性关系。

图1 芦丁和连钱草的吸收图谱

3.3 精密度实验 取芦丁对照品溶液适量，配成高、中、低三个浓度，每个浓度3份，分别显色后测定吸收度。结果表明，测定方法的精密度良好，见表1。

表1 连钱草中总黄酮含量测定的精密度实验结果（%）

3.4 稳定性实验 取对照品溶液3.0ml，进行显色，每隔5min测定一次吸收度，共测定至40min，计算总黄酮的平均含量为0.0289mg·ml-1，RSD＝0.95%（n＝9），结果表明显色后的溶液在40min内稳定。

3.5 重复性试验 取受试的单作连钱草粉末5份，每份约0.5g，精密称定，按“2.2供试品溶液配制”项下的方法提取。精密量取供试品溶液0.5ml，显色后测定吸收度，测得总黄酮的平均含量为57.76mg·g-1，RSD＝0.68%（n＝5），结果表明该方法重复性良好。

3.6 加样回收率实验 取3份已知总黄酮含量的连钱草粉末（单作）约0.1g，加入芦丁对照品适量，精密称定，按“2.2供试品溶液配制”项下的方法提取。精密量取供试品溶液1ml，按“3.2”项下方法测定总黄酮的含量，结果见表2。实验结果表明，该测定方法准确性高。

表2 连钱草中总黄酮含量测定加样回收率试验结果（n，%）

3.7 单种和套种连钱草中总黄酮含量测定 各取单作、套种玉米的连钱草约0.5g，按“2.2供试品溶液配制”项下的方法提取。精密吸取供试品溶液0.5ml，按“3.2”项下方法测定不同产地连钱草中总黄酮的含量，结果见表3。

表3 单种和套种连钱草中总黄酮含量测定试验结果（n，%）

从表3可知，相同采收季节的连钱草，单作、与玉米套种两种培育方式收获的连钱草中的总黄酮含量，无显著差别，而无论是单作还是与套种玉米7月采收连钱草的总黄酮含量，明显高于11月收获的连钱草，说明单作与套种玉米方式对连钱草药材品质有效成分的影响不明显、而采收时间对连钱草的总黄酮含量影响较大。连钱草套种玉米的方式增加土地利用率，且不会明显降低连钱草的有效成分，可以提高种植的经济回报率。我们可以充分开发利用套种的方式增加土地利用率，提高经济效益。

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10.3969／j.issn.1672-2779.2013.21.106

1672-2779（2013）-21-0146-02

吴义红

2013-08-15）