HPLC法测定五加参蛤蚧精中紫丁香苷含量

李岩岩　王志刚　徐晓婷

（吉林省通化市食品药品检验所，通化134001）

HPLC法测定五加参蛤蚧精中紫丁香苷含量

李岩岩王志刚徐晓婷

（吉林省通化市食品药品检验所，通化134001）

目的建立高效液相色谱法测定五加参蛤蚧精中紫丁香苷含量测定方法。方法色谱柱：依利特C18（4.6×200mm，5μm），流动相：甲醇-水（17∶83），检测波长：257 nm。结果紫丁香苷在0.021μg～0.191μg范围内呈良好线性关系（r＝1.0000），平均加样回收率为98.62%（RSD＝0.54%）。结论本方法结果准确，重复性好，可作为该制剂的质量控制指标。

五加参蛤蚧精；紫丁香苷；HPLC；含量测定

五加参蛤蚧精是由刺五加、蛤蚧、肉苁蓉、人参、人参露组成的中药制剂。具有补肺气、益精血功效，用于元气亏损，肺虚咳嗽，病后衰弱。本研究以主药刺五加中紫丁香苷为检测指标成分。建立了检测五加参蛤蚧精质量的高效液相色谱方法，适用于该品种的质量控制。

1　仪器与试剂

LC-2010AHT型高效液相色谱仪，Lcsolution工作站，紫外检测器。紫丁香苷对照品（中国药品生物制品检验所，批号：111574-200201，规格：供含量测定用）。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：依利特C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（17∶83）；流速0.80ml·min-1；柱温：20℃；检测波长：257nm，理论板数按紫丁香苷峰计算不低于3000。

2.2对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备取本品5支内容物，混匀，精密吸取本品5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4阴性对照溶液的制备按处方取除刺五加外的其余药味，按制备工艺制成缺刺五加的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按照上述色谱条件，分别注入色谱仪测定，结果阴性样品色谱在与紫丁香苷峰相应的保留时间附近无干扰峰检出。

2.5线性关系考察精密称取紫丁香苷对照品适量加甲醇制成每1ml含21.18μg的溶液，分别精密吸取1、3、5、7、9μl测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，见表1。结果表明紫丁香苷在0.0212μg～0.1906μg范围内，呈线性关系。

表1　标准曲线数据

2.6精密度试验精密吸取同一供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，重复6次，测定其色谱峰面积值，结果精密度RSD 0.85%。

2.7稳定性试验取样品溶液于室温下放置，分别在0、2、4、8、12小时进样一次，以峰面积为指标，考察其稳定性，结果RSD为0.85%，表明12小时内供试品溶液中紫丁香苷的含量基本稳定。

2.8重复性试验取同一批样品，依法独立测定6份，结果见表2。结果表明本法具良好的重复性。

表2　重复性试验结果

2.9回收率试验精密吸取已知含量的供试品（吉林一正药业集团有限公司060401，含量为0.042mg·ml-1）6

份，分别精密加入对照品溶液（0.053mg·ml-1）2ml，

依法测定，计算回收率，结果见表3。

2.10样品测定结果及限度测定十三批样品，结果见表4。

表3　回收率试验结果（%）

结果表明本法回收率较好，准确度较高。

表4　十三批样品中紫丁香苷含量测定结果

3　讨论

3.1柱的选择及柱效的考察用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（17∶83）为流动相；检测波长为257nm；柱温20℃。①采用依利特C18（4.6×200 mm，5μm）的柱测定；②采用迪马C18（4.6×250mm，5μm）的柱测定；③采用kromasil C18（4.6×250mm，5μm）的柱测定，采用上述三种柱进行试验，结果见表5。

表5　理论板数表

根据上述三种柱的检测结果，确定本品理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于3000。

3.2测定波长的选择取紫丁香苷对照品的甲醇溶液，经UV-260紫外分光光度计200～400nm范围内测定紫丁香苷在257 nm波长处，有最大吸收，故选择257 nm为本实验的测定波长。

3.3流动相的选择参照有关资料［1］我们对甲醇-水（20∶80）、甲醇-水（19∶81）、甲醇-水（18∶82）、甲醇-水（17∶83）进行优化试验。结果，以甲醇-水（17∶83）为流动相分离效果较好，保留时间适度，因此，确定其为本法的流动相。

3.4提取方法的考察方法一：采用了精密吸取本品5ml，置D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长15cm）上，以甲醇100ml洗脱，收集洗脱液蒸干，残渣加甲醇转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。结果测得的紫丁香苷含量较低，故未采用。方法二：采用了精密吸取本品5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。结果见表6。

表6　提取方法表

因此采用方法二所述的供试品溶液的制备方法。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［S］．2010年版．中国医药科技出版社，2010：1．

Co n t en t De t e r min atio n o f Sy rin gin in Wujias h en Gejiejing b y HPLC

Li Yanyan W ang Zhigang Xu Xiaoting(Tonghua City Institute for D rug Control，Jilin p rovince，Tonghua，134001，China)

ObjectiveTo establish a HPLC method to determine the content of Syringin in WujiashenGejiejing．MethodsA Elite C18 column was used with methanol-water（17：73）as mobile phase，and detected at the UV wavelength of 257 nm．ResultsThe calibration curve was in good linearity over the range of 0.021μg-0.191μg（r＝1.0000）．The average recovery was 98.62%（RSD＝0.54%）．ConclusionsThe method is accurate and reproducible，it can be used for the drug control．

WujiashenGejiejing；Syringin；HPLC；Content determination

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.16.116

1672-2779（2013）-16-0159-02

吴义红

2013-06-28）