细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术在胸腹水细胞病理学诊断中的应用价值

黄金长，张功亮，郭广秀，王建，彭芳，陈青

(赣州市人民医院病理科，江西赣州341000)

细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术在胸腹水细胞病理学诊断中的应用价值

黄金长，张功亮，郭广秀，王建，彭芳，陈青

(赣州市人民医院病理科，江西赣州341000)

目的探讨细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术在胸腹水细胞病理诊断中的意义。方法收集有异型细胞及癌细胞的浆膜腔积液50例，进行离心涂片、细胞块切片HE染色，并进行CK、CK7、CK20、CDX-2、MC、Calretinin、Vimentin、TTF-1、CA125等免疫细胞化学染色，选择性标记。结果常规细胞涂片厚，背景不清晰；离心沉渣包埋切片细胞多而集中，背景清晰，染色鲜艳，并有一定的组织结构，免疫细胞化学染色效果较好，阳性定位准确，可靠性高。结论细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术，能提高胸腹水肿瘤细胞的检出率，对肿瘤的诊断、鉴别诊断及细胞来源有重要的价值。

胸腹水，细胞块，石蜡包埋，免疫细胞化学染色

脱落细胞病检是目前各级医院病理科的一个工作重点及发展方向，其中胸腹水细胞学检查在制片及诊断技术上都存在很大困难[1]。对临床送检的胸腹水，国内大部分医院采用直接离心涂片法来做出诊断。但在实际应用中，我们发现直接涂片法存在涂片厚，细胞重叠，结构不清，细胞量少而阳性检出率低等缺点[2，3]，很难鉴别肿瘤细胞及增生的间皮细胞，并且不能判断瘤细胞的起源。通过对胸腹水离心涂片、细胞块石蜡包埋切片及免疫细胞化学染色技术的结合，能提高胸腹水肿瘤细胞的检出率，对肿瘤的诊断、鉴别诊断及细胞来源有重要的意义。

1 材料与方法

1.1 样本收集我院临床科室送检的胸腹水共50例。其中胸水36例，腹水14例。男性20例，女性30例。年龄在35～81岁。临床明确有器官占位15例，胸腹水原因待查22例。

1.2 试剂所有的免疫组化试剂、即用型试剂盒及DAB显色剂均购于福州迈新生物技术有限公司，按说明书进行实验步骤操作。

1.3 方法(1)收集患者胸腹水，取50～300ml进行离心(2000r/min,10min)；(2)离心后弃去上清液，取少量沉淀做细胞涂片；(3)在沉淀中加入消化液体至30ml，震荡2min后离心(2000r/min,10min)；(4)离心后弃去上清液，加入10%福尔马林液体50ml，震荡5～10min后离心(2000r/min,10min)；(5)离心后静置2～3h，弃去福尔马林液体，将沉淀用纸包裹进行脱水；(6)常规石蜡包埋、切片，苏木精-伊红染色，中性树胶封固；(7)用CK(pan)、CK7、CK20、CDX-2、Calretinin、MC等抗体进行免疫细胞化学染色，胸水加做TTF-1、腹水加做CA125，以试剂盒中提供的对照作为阴阳性对照，DAB显色。

2 结果

检测结果均由高年资的病理医师阅片并复习临床资料，诊断腺癌26例，鳞癌2例，非肿瘤性增生的间皮细胞22例(结果见表1)。与常规的涂片法相比较，该法制作的切片[苏木精-伊红染色]色彩鲜艳，背景清晰，收集到的细胞比常规涂片多，并且有一定的组织结构(图1)。根据不同的抗体，所表达的阳性部位与组织学相同，阳性颗粒呈棕黄色(图2)。

图1 腹水细胞块石蜡包埋，H-E染色，背景清晰，染色鲜艳，并有一定的组织结构(×100)

图2 免疫细胞化学染色(CK7)，阳性颗粒位于细胞浆内，呈棕黄色SP法(×100)

表1 50例胸腹水常规涂片及细胞块石蜡包埋切片结果比较(n，%)

3 讨论

胸腹水细胞学检查为病理科日常工作，但部分胸腹水受其它因素的影响，对作出正确的诊断带来一定的困难，如炎性胸腹水增生或退变的间皮细胞与某些恶性细胞尤其是腺癌细胞在形态上易于混淆[4]；细胞涂片诊断恶性胸腹水，因涂片厚，常有大量红细胞、炎性渗出物及黏液，细胞结构重叠，背景不清晰，其敏感度只有50%～78%[5]；细胞块石蜡包埋切片法收集的有核细胞多，细胞结构清晰，与常规涂片法相结合，大大提高了细胞学的阳性检出率[2]；同时，用细胞块做免疫细胞化学染色，能做连续切片，可以多种抗体组合运用或对某一特定细胞的比较观察，以满足诊断的需要及对其组织来源进行判别；如Calretinin、Vimentin、MC阳性多提示为增生的间皮细胞，CK7、TTF-1阳性多提示肿瘤细胞来源于肺，CK7、CA125阳性多提示肿瘤细胞来源于卵巢，CDX2、CK20阳性提示肿瘤细胞来源于胃肠道；但要说明的是，抗体的组织特异性并非绝对，多种抗体联合进行免疫细胞化学染色并设立对照有助于克服某些抗体表达意义不明确造成的困惑[6]。

[1]陈建华,陈中,丁博.血浆凝固法胸腹水细胞块技术的临床应用[J].实验与检验医学,2012,30(4):412-413.

[2]郭智俊,彭桂香,潘乃梁.胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片法与常规涂片法的对比[J].临床与实验病理学杂志,2002,18(4):437.

[3]李琳,胡海,黄晓楠.胸腹水沉淀物制片方法介绍[J].诊断病理学杂志,2003,10(1):50.

[4]肖同浩,陈寿松,熊丽萍,等.提高胸腹水肿瘤细胞检出率的方法探讨[J].临床军医杂志,2009,37(2):277-278.

[5]Queiroz C,Barral-Netto M,Bacchi CE.Characterizing subopulations of neoplastic cells in serous effusions.The role of immunocytochemistry[J].Acta Cytol,2001,45(1):18-22.

[6]毛瑛玉,杨敏,刘冬戈,等.细胞块切片免疫细胞化学染色在浆膜腔积液细胞学诊断中的应用[J].中华病理学杂志,2009,38(8):547-550.

R446.8，R392.11

A

1674-1129(2013)05-0489-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.035