评价血清中结核杆菌特异性蛋白抗体对诊断肺结核的应用价值

张慧慧，熊国亮

(江西省胸科医院，江西南昌330006)

评价血清中结核杆菌特异性蛋白抗体对诊断肺结核的应用价值

张慧慧，熊国亮

(江西省胸科医院，江西南昌330006)

目的评价结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测对肺结核诊断的应用价值。方法对370例活动性肺结核患者、42例非结核性肺部疾病患者和30例健康献血员进行血清结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测，同时对全部肺结核和非结核性肺部疾病患者进行痰抗酸杆菌涂片和培养。结果370例临床诊断的活动性肺结核患者，结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测阳性284例，阳性率76.8%；42例非结核性肺部疾病患者，假阳性4例，假阳性率9.5%；30例健康献血员对照组，假阳性1例，假阳性率3.3%。检测菌阳肺结核的敏感性为81.4%，,菌阴肺结核的敏感性为72.9%；阳性检出率76.8%远高于细菌学的阳性检出率45.1%，χ2=77.72，P＜0.05,具有统计学意义。结论结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测对肺结核的诊断具有较好的敏感性和特异性。

结核分枝杆菌；抗体；诊断

结核病是一种严重危害健康的慢性传染病。对肺结核做出快速准确的诊断一直是临床工作中的一个难点。虽然细菌学诊断是结核病诊断的“金标准”，但存在痰涂片抗酸染色检测阳性率低，结核分枝杆菌培养时间长的缺点。因此寻找快速准确而简便的诊断方法具有积极意义[1]。本文采用一种特异的结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(TB secreted acid phosphatase,TB-SA)蛋白[2]作为抗原对活动性肺结核和非结核性肺部疾病患者血清标本抗体进行了检测，并评价其对活动性肺结核临床诊断的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料370例活动性肺结核病人均是2012年6月至2013年5月在我院结核内科住院的患者，其中男240例、女130例平均年龄44.7岁。42例非结核性肺部疾病病人均是2012年6月至2013年5月在我院呼吸科、肿瘤科住院患者(16例COPD、13例急性支气管炎患者、3例哮喘、10例肺癌患者)其中男28例、女14例，平均年龄66.8岁。30例健康献血员由江西省血液中心提供。全部病例的诊断依据为细菌学、病理学、细胞学、胸部X线、生化等指标来确诊。入选病例均留取晨痰和血清为检测标本；健康献血员只留取血清标本。

1.2 主要仪器和试剂(1)Exl800酶标仪由美国宝特公司提供。(2)酶联免疫法检测TB-SA抗体试剂由成都永安制药有限公司提供，批号：20120502,20130104。

1.3 血清TB-SA抗体检测(1)样本稀释：取样本稀释应用液450μl加待检血清50μl，充分混匀。(2)加样：将所需数量的板条固定于板架，各孔分别加入100μl待测稀释样本，每次实验设空白对照、阴性对照、临界对照、阳性对照，分别加入样本稀释应用液、阴性、临界、阳性对照各50μl，震荡，封板，37℃温育10min，弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，洗板5次，拍干。(3)加酶：每孔加入酶标记液50μl，震荡，封板，37℃温育10min，弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，洗板5次，拍干。(4)显色读值：每孔加入显色剂A、B液各50μl，混匀，封板，置37℃避光显色10min，每孔加终止液50μl，混匀，用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值。(5)结果判断：阳性判断标准为(样本OD值) /(临界对照品OD值)≥1.2，阴性判断标准为(样本OD值)/(临界对照品OD值)≤0.8，灰区样本重复实验，若仍落在灰区范围内则报告阴性。

1.4 痰抗酸杆菌涂片染色、结核分枝杆菌培养及分枝杆菌菌种鉴定操作方法参见《结核病诊断实验室检测规程》[3]。

1.5 统计学处理对试验数据按χ2进行分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 370例活动性肺结核病患者中菌阳(涂阳或培阳)167例，菌阴203例。血清TB-SA抗体检测菌阳肺结核的敏感性为81.4%(136/167)；菌阴肺结核的敏感性为72.9%(148/203)；诊断活动性肺结核的总敏感性为76.8%(284/370)；特异性为93.1%(67/72)。见表1。

表1 血清TB-SA抗体检测结果分析

2.2 TB-SA抗体检测与细菌学检测结果比较在370例肺结核患者中，TB-SA抗体检测阳性检出率为76.8%(284/370)，远高于细菌学阳性检出率45.1%(167/370)，χ2=77.72，P＜0.05,具有统计学意义。详见表2。

表2 370例活动性肺结核患者TB-SA抗体检测与细菌学检测结果比较

3 讨论

目前，国内外学者把寻找特异性高的结核分枝杆抗原作为免疫诊断研究的基础，结核分枝杆菌主要分泌蛋白所具有的特异免疫原性，使其成为结核病血清学诊断的重中之重。研究最多的包括分泌蛋白38KD、ESAT-6、CFP10、MPT63、MPT64和MPT53等[4，5]。但这些蛋白存在灵敏度低或者特异性不高的缺点，导致结核抗体的检测在临床上存在较高的假阴性或假阳性现象。本文采用TBSA作为抗原，由于TB-SA蛋白仅存在于致病性结核分枝杆菌中，在其他微生物(包括非致病的分枝杆菌)中均不存在，TB-SA是一种特异性分泌性蛋白，容易被机体免疫系统识别而产生特异性抗体[2]，因此，检测TB-SA血清特异性抗体敏感性、特异性可以得到很好的保证。

本实验活动性肺结核TB-SA抗体检测的敏感性为76.8%，特异性为93.1%均高于毕爱笑等人[6]的报道。对菌阴肺结核患者TB-SA抗体检测敏感性为72.9%，具有较高的诊断价值。

42例非结核呼吸疾病患者TB-SA检测的阳性率为9.5%，在30例健康献血员TB-SA检测的阳性率为3.3%，全国有近半的人口感染了结核菌，不排除受试者感染结核杆菌引起血液中结核抗体存在的可能，也可能由于非结核呼吸系统患者机体免疫应答紊乱。

总之，酶联免疫法检测结核TB-SA抗体操作简便，快速，价格低廉，灵敏，适合各级医院，可以作为一种快速准确诊断肺结核的方法，值得在临床上推广应用。

[1]Furin JJ,Johnson JL.Recent advances in the diagnosis and management of tuberculosis[J].Curr Opin Pulm Med,2005,11(3):189-194.

[2]Saleh MT,Belisle JT.Secretion of an acid phosphatase(SapM)by mycobacterium tuberculosis that is similar to eukaryotic acid phosplatase[J].JBacteriol,2000,182(23):6850-6853.

[3]中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程[M].北京:中国教育文化出版社,2006.

[4]kulshrestha A,Gupta A,Verma N,et al.Expression and purification of recombinant antigens of Mycobacterium tuberculosis for app lication in serodiagnosis[J].Protein Expr Purif,2005,44(1):75-85.

[5]Hoff ST,Abebe M,Ravn P,et al.Evaluation of Mycobacterium tuberculosis-specific antibody responses in populations with different levels of exposure from Tanzania,Ethiopia,Brazil,and Dermark[J]. Clin Infect Dis,2007,45(5):575-582.

[6]毕爱笑,金文国,丁元生,等.TB-SA结核抗体检测的临床应用评价[J].同济大学学报(医学版),2008,29(2):86-88.

Clinical significance of serum tuberculosis specific antigen(TB-SA)antibody in the diagnosis of pulmonary tuberculosis

ZHANG Huihui,XIONG Guoliang.Jiangxi Provincial Chest Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo evaluate the significance of detecting serum tuberculosis specific antigen(TB-SA)antibody in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.M ethodsTB-SA antibody in the serum samp les from 370 cases of active pulmonary tuberculosis,42 caseswith non-tuberculosis pulmonary disease and 30 healthy volunteerswere detected using enzyme-linked immunosorbentassay(ELISA).ResultsTwo hundred and eighty-four outof 370 active pulmonary tuberculosis patients had positive results of TB-SA antibody tested by using ELISA,the positive rate was 76.8%,4 of 42 patientswith other pulmonary diseases and 1 of 30 healthy people had false positive results,the false postive rateswere 9.5%and 3.3%,respectively.The sensitivity of TB-SA antibody in diagnosis of bacteriological positive and negative pulmonary tuberculosis patients were 81.4%and 72.9%,respectively. With a total sensitivity of 76.8%,the positive rate of TB-SA detection in the diagnosis of tuberculosis was 76.8%,which was far higher than thatof 45.1%by using bacteriological examination.The difference between twomethods had statistical significance(P＜0.05).ConclusionDetection of Mycobacterium tuberculosis specific antibody has better sensitivity and specificity in diagnosis of tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis;Antibodies;Diagnosis

R446.62,R521,R378.91+

A

1674-1129(2013)05-0419-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.005

江西省卫生厅科技资助项目(编号：20053180)

张慧慧，女，1965年生，本科，副高。

熊国亮，男，1964年生，主任技师，主要从事结核病细菌学、免疫学、分子生物学工作。