液基夹层集菌技术检测痰标本中抗酸杆菌对诊断肺结核的应用价值

熊国亮

(江西省胸科医院,江西南昌330006)

液基夹层集菌技术检测痰标本中抗酸杆菌对诊断肺结核的应用价值

熊国亮

(江西省胸科医院,江西南昌330006)

目的评价液基夹层集菌技术检测抗酸杆菌对肺结核诊断的应用价值。方法对134例肺结核病人晨痰标本同时进行液基夹层集菌技术与直接痰涂片进行镜检检测抗酸杆菌，比较两种方法的阳性检出率。选取10份抗酸杆菌阳性痰标本，将处理后的消化痰液接种到罗氏培养基，37℃培养，来评价液基夹层集菌技术的安全性。结果液基夹层集菌技术和直接痰涂片检测抗酸杆菌的阳性率分别为28.4%(38/134)和16.4%(22/134)，检测结果差异有统计学意义。安全性试验发现经消化液处理的痰标本，培养8周后未见分枝杆菌生长。结论液基夹层集菌技术提高了肺结核病人痰标本的阳性检出率，且操作简单、安全性高，是一种很有推广价值的检测方法。

肺结核；结核分枝杆菌；痰；集菌技术

结核病仍是严重威胁人类健康的重大慢性传染病，现在每年有300万人死于结核病，结核病在全球仍呈上升趋势。结核病人的细菌学检查，是发现传染源的主要途径和手段，传统的结核病诊断直接涂片阳性率低，结核菌培养阳性率相对高些但培养时间需要4～8周，难以用于指导临床和治疗[1-4]。近年来，一种基于液基薄层技术的结核诊断新技术—液基夹层集菌制片技术逐步发展起来，本文应用该技术对临床肺结核病人痰标本中的抗酸杆菌进行了检测，并评价其对肺结核诊断的应用价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源134例肺结核病人均是2010年10月至2012年5月在江西省胸科医院结核内科住院的病人，其中男89例、女45例平均年龄46.7岁。所有病例的诊断依据为细菌学、病理学、免疫学、胸部X线、生化等指标，入选病例符合《结核病诊断指南》对肺结核的诊断标准。嘱病人留取晨痰3.0～5.0ml。

1.2 试剂和仪器液基夹层杯抗酸染色液试剂盒、夹层杯、消化液、TQ-12自动离心涂片机、KP-1快速干片机均为湖南天骑公司提供。

1.3 直接痰涂片法接《中国结核病防治规划---痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[5]进行涂片、染色、镜检和记录结果。

1.4 液基夹层集菌技术(1)标本处理：将直接痰涂片镜检后所剩余痰液，加2倍体积消化液、置室温约30min，其间摇动数次，待消化完全，用一次性塑料吸样管移取消化好的痰液3.0 m l于夹层杯内，放入TQ-12自动离心涂片机中4000r/min，离心8 min，倾去上清液、沥干，将夹层杯放入KP-1快速干片机内烘干固定。(2)染色镜检：在夹层杯中进行抗酸染色完毕，自然干燥或烘干后，用专用取片针顶出夹层片，使涂菌面向下，置载玻片(已滴加中性树胶)，用镊子轻压，防止气泡，油镜检查。

1.5 液基夹层集菌技术安全性试验取直接痰涂片阳性的消化完全痰标本(消化时间15～20min)接种到罗氏培养基斜面上(覆盖整个斜面)，进行37℃培养，然后观察分枝杆菌在培养基上生长情况。

1.6 统计学方法采用卡方检验对液基夹层集菌技术与直接痰涂片镜检法检出的阳性率进行比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 134例痰标本用两种方法进行抗酸杆菌检测结果液基夹层集菌技术阳性38例，阳性率28.4%；直接痰涂片镜检法阳性22例，阳性率16.4%。比较两种方法的阳性检出率，差异有统计学意义(χ2=66.5,P＜0.01)，见表1。

表1 液基夹层集菌技术与直接痰涂片镜检法检出结果比较

2.2 10份直接痰涂片阳性的痰标本经完全消化后培养结果接种到罗氏培养基上，37℃，培养8周后均未见分枝杆菌的生长。

3 讨论

液基夹层集菌技术是一种新型的集菌技术，与直接涂片法相比本质上是一样的，该技术的创新主要体现在离心集菌、消化液处理痰标本方面，其主要特点是：一彻底消化了痰液、细胞，完全释放出分枝杆菌；二是灭活了分枝杆菌，保障后期操作的生物安全，然后通过加热、高速离心，将释放出来已灭活的分枝杆菌集聚到彭氏夹层杯底部的基片上，再进行染色镜检[6]。

本研究中液基夹层集菌技术对134例痰标本的阳性检出率为28.4%，而直接涂片法阳性率为16.4%，比较两种方法的阳性检出率，差异有统计学意义(χ2=66.5,P＜0.01)。直接涂片法中的22例阳性标本在液基夹层集菌技术全为阳性；直接涂片法中的112例阴性标本在液基夹层集菌技术检测到16例标本阳性，该16例阳性菌量有15例为1+，1例为2+，均没有查出3+或以上菌含量，说明直接涂片法对菌量少的标本存在漏检情况。

消化处理液的主要成分为含氯消毒剂，其作用主要为消化痰液，释放分枝杆菌，本方法检测时，除消化外的其他步骤均在生物安全柜外进行，故消化液的性能直接影响方法的安全性，本研究按照本实验室分枝杆菌培养的液化时间将10例涂片阳性的痰标本接种到罗氏培养基上，培养8周后均未见分枝杆菌的生长，说明后期整个操作流程可以满足生物安全的要求。

综上所述，液基夹层集菌技术提高了肺结核病人痰标本的阳性检出率，且操作简单、安全性高，是一种很有推广价值的检测方法。

[1]王苏民.结核病及其实验技术的现状与展望[J].中华检验医学杂志,2001,24(1):71-72.

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[6]宋红焕,季明,唐国锋,等.液基夹层杯技术用于基层实验室结核病诊断的可行性研究[J].中国防痨杂志,2012,34(7):441-444.

App lication value of liquid-based interlayer vessel technique in detection of acid-fast bacilli in the diagnosis of M ycobac-terium tuberculosis

XIONG Guoliang.Jiangxi Provincial Chest Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo explore the value of detecting acid-fast bacilliby liquid-based interlayer vessel technique in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.MethodsA total of 134 cases ofmorning sputum specimens from pulmonary tuberculosis patientswere detected by liquid-based interlayer vessel technique and direct smearmethod simultaneously.The positive rates of the twomethodswere compared.Ten acid-fast bacilli positive sputa were treated with digestion liquid,then the digestive sputa were inoculated at Roche medium and cultured at 37℃.The security of liquid-based interlayer vessel technique was evaluated by preparing the growth ofmycobacteria.ResultsThe positive rates of detecting acid-fastbacilli by using liquid-based interlayer vessel technique and direct smearmethod were 28.4%and 16.4%,respectively.There was significant diference between the two methods(P＜0.05).The sputum samples treated with the digestive liquid were not found the growth ofmycobacteria after 8 weeks’culture.ConclusionThemethod of liquid-based interlayer vessel technique can improve the positive detection rate in TB patients.It is a simple and safemethod,and has extension value.

Pulmonary tuberculosis;Mycobacterium tuberculosis;Sputum;Liquid-based interlayer vessel technique

R446.5,R521,R446.19,R378.91+1

A

1674-1129(2013)05-0412-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.002

江西省卫生厅科技项目(编号：20091266)

熊国亮，男，1964年10月生，主任技师，主要从事结核病的细菌、免疫、分子生物学工作。