乙二胺四乙酸盐对肝素钠抗凝后血小板聚集的影响

王秀媛

(天津市宝坻区中医医院，天津301800)

乙二胺四乙酸盐对肝素钠抗凝后血小板聚集的影响

王秀媛

(天津市宝坻区中医医院，天津301800)

目的探讨乙二胺四乙酸盐(EDTA-K2)对肝素钠抗凝后血小板聚集的影响。方法对38名血小板数量正常的体检者抽取静脉血标本，分别使用EDTA-K2、肝素钠抗凝20min、肝素钠抗凝20min加入EDTA-K2、肝素钠抗凝60min加入EDTA—K2的抗凝标本,进行计数及血涂片瑞氏染色观察。结果肝素钠抗凝静脉血血小板计数结果为(93.7±32.18)×109/L；EDTA-K2抗凝血血小板计数结果为(210±58.39)×109/L。组间差异有统计学意义(t=16.74,P＜0.001)。肝素钠抗凝静脉血静置20 min后加入EDTA-K2抗凝剂结果为(212.05±60.20)×109/L；与EDTA-K2抗凝血结果(210±58.39)×109/L比较，组间差异无统计学意义(t=1.844,P＞0.05)。肝素钠抗凝静脉血静置60min后加入EDTA-K2抗凝剂结果为(56.74±15.33)×109/L，与EDTA-K2抗凝血结果(210±58.39)×109/L比较，组间差异有统计学意义(t=22.88,P＜0.001)。结论EDTA-K2钙离子螯合剂可可逆性地使初发聚集的血小板解聚。

血小板聚集；EDTA-K2；肝素钠；血小板解聚

肝素钠、乙二胺四乙酸盐(EDTA-K2)是我们工作中经常使用的两种不同作用原理的抗凝剂。国际血液学标准化委员会(ICSH)认定EDTA-K2为血液常规分析的抗凝剂。我们在工作中发现用肝素抗凝的血液标本，当用血液细胞分析仪测定血小板数量减少时，在其抗凝标本中加入EDTA-K2后，血小板数量可恢复正常。我们对此进行了分析，试验情况如下。

1 材料与方法

1.1 对象选择健康体检者38例，其中男20例，女18例，全血血小板数量均＞100×109/L。

1.2 主要仪器与试剂XE-2100型血细胞分析仪(日本希森美康株式会社)及其配套试剂；一次性真空抗凝管(肝素钠、EDTA-K2)由浙江康是医疗器械有限公司生产；一次性采血针由浙江康德莱疾疗器械股份有限公司制造；EDTA-K2抗凝杯；瑞氏染液。

1.3 测定方法采集38名血小板数量正常的来我院就诊患者静脉血标本。常规消毒手臂，采肘部静脉血，分别注入含肝素钠抗凝管和含EDTA-K2抗凝管中充分混匀，20 min后用XE-2100型血细胞分析仪测定全血中血小板数量，并进行涂片瑞氏染液观察。然后再将肝素抗凝20min静脉血取40μl加入含有EDTA-K2抗凝杯中，混匀15min后，XE-2100血细胞分析仪测定全血中血小板数量，并进行涂片瑞氏染液观察。将肝素抗凝60min静脉血取40μl加入含有EDTA-K2抗凝杯中，混匀15 min后，XE-2100血细胞分析仪测定全血中血小板数量，并进行涂片瑞氏染液观察。以上标本在测定时均重复3次取其均值。

1.4 统计学分析所有数据采用x±s表示，试验组与对照组间结果的比较采用配对t检验，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 38份分别用肝素钠抗凝静脉血静置20min后计数血小板结果与EDTA-K2抗凝血结果比较：肝素钠抗凝静脉血血小板计数结果为(93.7±32.18)× 109/L；EDTA-K2抗凝血血小板计数结果为(210± 58.39)×109/L。经配对样本t检验分析，组间差异有统计学意义(t=16.74,P＜0.001)。见表1。分别用瑞氏染色涂片观察肝素抗凝静脉血血小板可见轻度聚集；EDTA-K2抗凝血血小板无聚集现象。见图1、图2。

2.2 38份用肝素钠抗凝静脉血静置20min后加入EDTA-K2抗凝杯中静置15min后结果为(212.05± 60.20)×109/L，与EDTA-K2抗凝血结果(210±58.39) ×109/L比较，组间差异无统计学意义(t=1.844,P＞ 0.05)。用瑞氏染色涂片观察血小板无聚集现象。见图3。

图1 EDTA-K2抗凝血瑞氏染色涂片图(×400)

图2 肝素钠抗凝静脉血静置20m in瑞氏染色涂片图(×400)

图3 肝素钠抗凝血静置20分钟后加入EDTA-K2后瑞氏染色涂片图(×400)

2.3 38份用肝素钠抗凝静脉血静置60min后加入EDTA-K2抗凝杯中静置15 min后结果为(56.74± 15.33)×109/L，与EDTA-K2抗凝血结果(210±58.39) ×109/L比较，组间差异有统计学意义(t=22.88,P＜0.001)。用瑞氏染色涂片观察血小板数量减少，偶见聚集血小板，形态不规整。

表1 不同抗凝剂及存放时间血小板计数结果比较(×109/L,x±s)

3 讨论

血小板聚集在血小板之间进行，血小板膜表面受体GPⅡb/Ⅲa、血液中的Fg和Ca2+这三要素缺一不可[1，2]。研究结果显示[3，4]，Ca2+在血小板中的作用是广泛的，也是复杂的，血小板内钙浓度升高，血小板会被激活，内钙升高对血小板变形和分泌有重要作用。血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa是钙离子依赖性二聚体复合物，在血小板变形前，藏于血小板膜内侧，在血小板活化变形后，可暴露于血小板表面。GPⅡb/Ⅲa分子的构象发生改变，暴露出与纤维蛋白原(Fg)的受体与Fg结合，使血小板发生聚集[5-7]。Ca2+在血小板的聚集中起着必要作用。细胞内钙增加的主要来源有：一是细胞外钙进入；二是细胞器(如内质网)内钙的释放；三是细胞膜上结合钙的释放。EDTA-K2抗凝剂因其与钙离子有很强的螯合作用使细胞外钙离子减少，抑制血小板活化和纤维蛋白原(Fg)的受体与Fg结合，从而抑制血小板聚集。

肝素钠既可抑制血小板功能,也可激活血小板。肝素钠可以抑制凝血酶诱导的血小板聚集，但肝素钠也可在无诱导剂的情况下直接激活血小板，并增强ADP诱导血小板聚集[8]。血小板聚集有两种类型：第一相聚集(初级聚集)由外源性致聚剂诱导的聚集反应；第二相聚集(次级聚集)由血小板释放的ADP诱导的聚集[9]。ADP诱导的聚集至少通过两个受体激活血小板[10]。其中ADPP2X1受体途径的受体物质为离子通道,作用机制主要是促进钙离子内流，使血小板内钙浓度升高，血小板被激活。本实验，在血小板初发聚集时将血浆中的钙离子用EDTA-K2螯合后，ADP不能将钙离子转运至细胞内，血小板不能形成第二相聚集。

通过实验EDTA-K2可阻止血小板形成第二相聚集。EDTA-K2可以使肝素钠抗凝的静脉血引起的血小板初级聚集解聚。解聚原因还需要进一步实验和研究。

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Effect of EDTA on platelet aggregation after heparin anticoagulation

WANG Xiuyuan.Clinical Laboratory of Baodi Hospital of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 301800,China.

Platelet aggregation;EDTA-K2;Heparin sodium;Platelet disaggregation

R446.11+1

A

1674-1129(2013)05-0452-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.018

王秀媛，女，1971年7月出生，汉族，毕业于天津医科大学。本科，副主任技师、检验专业，主要研究临床检验诊断学。

Abstrat:ObjectiveTo explore the effectof EDTA-K2on plateletaggregation after heparin anticoagulation.M ethodsUsing 38 volunteers'venous blood as samples,which blood platelet counts were normal.The EDTA-K2and heparin sodium anticoagulant were added into those blood samples for 20minutes;after that,EDTA-K2was added into the heparin sodium anticoagulant in 20 minutes and 60 minutes,respectively;and finally,platelet count and W right-Giemsa stain were conducted for above-mentioned samples.ResultsThe counting result of platelet in heparin anticoagulated blood was(93.7±32.18)×109/L.The counting result of platelet in EDTA-K2anticoagulant blood was(210±58.39)×109/L.There was significant difference between the groups(t=16.74,P＜0.001).The resultof adding EDTA-K2after 20minuteswas(212.05±60.20)×109/L.Compared with the resultof EDTA-K2anticoagulant(210±58.39)×109/L,there was no statistically significant difference between the two groups(t=1.844,P＞0.05).The p latelet result of adding EDTA-K2after 60 minuteswas(56.74±15.33)×109/L.Compared with the result of EDTA-K2anticoagulant(210± 58.39)×109/L,there was significant difference between the groups(t=22.88,P＜0.001).ConclusionCalcium chelator EDTA-K2can reversiblymake the initial gathering blood platelet disaggregating.