南蛇藤醇提物毒性和安全性实验研究

司艳红 周长香 郭云婷 狄艳琪 杨川峰 姚树桐 桑 慧 张 颖

(1.泰山医学院，山东 泰安 271016； 2.泰安市第一人民医院，山东 泰安 271000)

南蛇藤(CelastrusorbiculatusThunb.)为卫矛科(Celastraceae)南蛇藤属(CelastrusL. )植物，又名过山风、黄藤、降龙草、蔓生落霜红，南蛇风等，蔓草类藤状灌木。始载于清代《植物名实图考》[1]，我国主产东北、华北、华东、华中及四川等省区，广布东亚。其藤茎、根、叶、果实、种子均可入药。该植物中主要含有黄酮、生物碱、强心苷、萜类等化合物且具有多种生物活性，引起人们的广泛注意，并进行了一些化学成分和药理作用的研究。现代药理研究表明南蛇藤具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗生育、昆虫拒食及杀毒等活性[2]，目前多用于治疗风湿性及类风湿性关节炎、血液病及皮肤病，也用作农用杀虫。因不同药理研究所用南蛇藤剂量不同，为保证用药安全，需要对南蛇藤的安全范围加以确定。本研究针对南蛇藤的急性毒性和对小鼠肝脏功能的影响，为安全用药提供了理论基础。

1 材料与方法

1.1实验动物 健康昆明种小鼠128只(SCXK(鲁)2010-0013)，SPF级，雌雄各半，体重(17±22)g，由山东泰邦生物制品有限公司实验动物中心提供。饲养环境：常温分笼饲养，自由饮水。

1.2仪器及材料 电子分析天平(AX-205型，瑞士梅特勒公司)；循环水式多用真空泵(SHB-Ⅲ型，郑州长城科工贸有限公司)；电热恒温水浴锅(HW·SY21-K6型，北京市长风仪器仪表公司)；旋转蒸发仪(PC-510，德国专业仪器制造商授权中国唯一实验仪器维修服务中心)；微量移液器(德国 Eppendorf)；紫外分光光度计(T6新世纪190-110，北京普析通用仪器有限责任公司)；南蛇藤(2011年5月采于泰山，野生，经泰山医学院药学院中药学教授鉴定，常温干燥粉粹至粗粉，备用)；无水乙醇(AR.天津市永大化学试剂有限公司)，谷丙转氨酶试剂盒(20111014，南京建成生物工程研究所)，谷草转氨酶试剂盒(20120312，南京建成生物工程研究所)。

1.3 方法

1.3.1药物的提取 精确称取40℃干燥至恒重的南蛇藤茎50 g，加入95%乙醇(1∶15)[3]，浸泡过夜，回流提取3t(2 h·t-1)，合并滤液浓缩至浸膏，40℃恒温干燥，浓缩得浸膏(11.34 g生药·g-1)，实验前5%羧甲基纤维素钠配制成所需浓度，每只按0.2 ml·(10g)-1·d-1灌胃。

1.3.2小鼠急性毒性预试验 上述小鼠禁食12 h后，分别按5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0、100.0 g·kg-1剂量分组给药，每组4只动物，雌雄各半，共计动物28只，连续灌胃7天，寻找南蛇藤LD100值(100%死亡率)、LD0值(0%死亡率)，以便进行LD50值的正式测定。预试验结果表明：100g·kg-1组小鼠全部死亡，10g·kg-1以下剂量无死亡，80g·kg-1组死亡2只，其它剂量均死亡1只。参照此结果，小鼠灌胃给药最大耐受量(MTD)为10.0 g·kg-1。

1.3.3小鼠灌胃给药LD50试验 取小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组。根据Kaerben的r值计算公式，代入LD100和LD0后，计算得r=1.584，故6组用药量分别为10.0、15.84、25.09、39.74、62.95、99.72 g·kg-1·d-1。每天记录各组动物给药后的症状、死亡数目及死亡时间，持续给药观察21天。

1.3.4南蛇藤对小鼠体重和肝脏毒性的影响 取小鼠40只，雌雄各半，随机分为0.0、2.5、5.0、10.0 g·kg-14个剂量组，禁食12h后灌胃给药，药后动物自由饮水进食，观察小鼠给药后的体征：摄食量、毛发、粪便、瞳孔、呼吸及精神活动等，分别于用药前1 d、用药后7、14、21 d称量小鼠体重。3周末眼眶取血测定血清中ALT和AST水平，实验操作按试剂盒要求进行；观察肝脏形态变化，计算肝脏指数(肝脏指数=肝脏重量(mg)/小鼠体重(g)。

2 结 果

2.1小鼠灌胃给药的半数致死量 南蛇藤灌胃后，高剂量组小鼠活动减少且成群俯卧，死亡时间集中在前8天，其中前8天死亡动物数量占总数的81%，11天后动物无死亡，动物累积死亡情况见图1。根据Kaerber[4]公式LD50=lg-1[Xm-i(ΣP-0.5)+i/4(1-Pm-Pn)计算得到LD50=38.17g·kg-1，95%可信限为38.14～38.19 g·kg-1。实验结果见表1。

表1 南蛇藤醇提物灌胃给药小鼠LD50(n=10)

2.2南蛇藤灌胃给药后小鼠体征的变化 在MTD用药范围内，按0.0、2.5、5.0、10.0 g·kg-1剂量每天给小鼠灌胃1次，用药21d。用药期间，与空白组比较，用药组小鼠精神状态良好，皮毛光滑，正常摄食。粪便、呼吸频率及活动状态均无差别，2周后高剂量组小鼠食欲稍差，用药期间未见动物死亡。喂饲21天后，各组小鼠体重均明显升高。与空白组比较，喂饲14天后，5、10 g·kg-1组小鼠体重明显减轻(P<0.01 orP<0.001)。体重变化见表2。

表2 小鼠体重的变化

注：与对照组比较，*P<0.01,**P<0.001

2.3小鼠肝脏形态及指数变化 取各组小鼠肝脏，肉眼观察发现：4组小鼠肝脏红褐色，形态大体正常，质地柔软，未见结节、包块及囊肿等。比较肝脏指数亦无明显差异(见图2)。结果显示，南蛇藤在小鼠耐受量范围内用药3周后对小鼠肝脏形态学变化几乎无影响。

图2 小鼠肝脏指数测定结果(n=8)

2.4小鼠血清ALT、AST变化 为进一步证实南蛇藤醇提物对小鼠肝功能的影响，小鼠灌胃21天后取血，测定了血清中ALT、AST水平。结果显示，各组小鼠ALT、AST水平均在正常范围内[5]，但与对照组相比，5.0、10.0 g·kg-1组ALT升高显著(P<0.01 orP<0.001)，10.0 g·kg-1组AST明显升高(P<0.01)。

表3 小鼠血清ALT、AST水平变化

注：与对照组比较 ，*P<0.01,**P<0.001。

3 讨 论

实验结果显示，南蛇藤醇提物小鼠灌胃最大耐受量为10.0 g·kg-1。在此范围内用药21d，小鼠生理体征无显著异常，肝脏形态基本无改变，肝功仍然正常。提示此剂量用药安全。但用药14天后，与空白组相比小鼠体重增长缓慢，这可能与南蛇藤致胃肠道反应有关[6]，故用该药物时应注意观察药物对消化功能的影响。

肝损伤的一个重要标志是生化指标的改变，主要包括谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)。ALT升高标志着肝细胞膜的损伤，AST的升高标志着肝细胞线粒体损伤。本研究结果显示，在南蛇藤MTD用药范围内，随用药剂量加大，ALT和AST 均升高，但其升高值均在正常范围。结果提示，南蛇藤在10.0 g·kg-1剂量范围用药安全，对肝脏无损害。

[1] 黄太康.现代本草纲目[M]. 北京:中国医药科技出版社,2001: 1859-1860.

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[3] 吕国红,钟晓凌,张江,等.分光光度法测定枳椇子总黄酮含量的分析[J].食品工业科技,2009,30(12):394-395.

[4] 陈金月,周芳.红花夹竹桃、红花寄生及桑寄生对小鼠的半数致死量测定[J].时珍国医国药,2008,19(10):2418-2419.

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