单核苷酸多态性与胃癌易感性的相关性研究

邱 钢 朱 畅 刘小春

1.深圳市龙岗区横岗人民医院普外科，广东深圳 518100；2.深圳市人民医院胃肠外科，广东深圳 518020；3.深圳市龙岗区横岗人民医院胃镜室，广东深圳 518100

胃癌是世界上比较常见的恶性肿瘤之一，它的发病率在消化道肿瘤中是最高的。胃癌发生的机制相当复杂，基因突变与基因沉默在其中起到了相当重要的作用。EZH2是果蝇基因增强子的人类同源物，同时也是PcG基因家族的重要成员之一［1］。为此，笔者专门探讨单核苷酸多态性与胃癌易感性的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年5月～2012年5月笔者所在医院收治的242例胃癌患者血样，在手术前均未接受化疗与放疗，其中男142例，女100例，平均年龄（56.0±15.2）岁。344例正常血样对照组均来自同一地区的健康人群，按照年龄（P=0.132）与性别（P=0.742）来匹配，男224例，女120例，平均年龄（50±12）岁。两组年龄与性别比例比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

对两组对象在空腹的条件下采取静脉抽血，血样分别采集5mL，通过TAINGEN公司所提供的DNA提取试剂盒（DP304-03）进行提取，保存于Buffer TE中，同时确保纯化核酸OD260/OD280的值为1.7～1.9，并且基因组的DNA浓度在100～300ng/μL范围内，注射EDTA抗凝剂，存储于-20～-80℃的环境下，直到测序进行。然后对DNA的浓度进行标化，两组患者采取EZH2 rs734004、rs734005、rs2072407、rs6464926、rs12670401多态性测序，运用组织芯片技术与免疫组化检测240例同一来源胃癌组织与30例正常胃黏膜EZH2蛋白表达。

1.3 观察指标

比较胃癌患者EZH2中rs12670401基因型CC与正常血样中rs6464926基因型TT，胃癌患者中的EZH2包含的杂合基因型rs2072407TC、rs734004TC、rs734004CG与正常血液中的杂合基因型rs2072407TC、rs734004TC、rs734004CG两者之间的比例变化，并观察胃癌发生率与风险。

1.4 统计学处理

采用Plink vl1.07对EZH2基因5个SNPs进行MAF、基因HWE平衡和关联性分析，连锁不平衡与单倍型分析采用Haploview 4.2，证明单核甘酸多态性与胃癌易感性的相关性。

2 结果

检测发现EZH2中rs12670401基因型CC与rs6464926基因型TT在胃癌患者中所占的比例较高，EZH2与rs2072404比例增加会严重影响胃癌发生率与风险（P=0.007，OR=1.785，95％CI=1.171～2.724；P=0.012，OR=1.720，95％CI=1.121～2.623）。胃癌患者中的EZH2包含的杂合基因型rs2072407TC、rs734004TC、rs734004CG所占比例低于正常血液对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。所占比例减少时可降低患者胃癌发生率与风险。（P=0.032，OR=0.712，95％CI=0.520～0.975；P=0.033，OR=0.708，95％CI=0.517～0.971；P=0.035，OR=0.712，95％CI=0.517～0.977）。应用连锁不平衡分析LD进一步将上述观察进行证实。胃癌不同组织学类型与不同临床参数间的EZH2免疫组化染色强度差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 EZH2基因单核苷酸多态性与胃癌风险关系

3 讨论

胃癌的发病率极高，是世界上发病率最高的癌症之一，同时，胃癌的发生也是通过多因素，多步骤才形成的，是多种因素综合作用的结果。血小板反应素，即凝血酶敏感蛋白，主要是由一个分子量为450kD的同源三聚体基质糖蛋白组成的，它的分子结构存在多种功能区，能够自行调节不同的细胞粘附、迁移与增殖等［2-3］。单核苷酸多态性是人类基因组中最常见的遗传多态性，是一个可以较好反映个体遗传差异的分子标记，在人类基因组中密度最大、发生频率较高［4-7］。研究调查显示，THBS-1直接或者间接的参与到了血管生成的每个环节之中，可以对内皮细胞的增殖、迁移造成直接抑制作用，同时也可以对其产生促进的作用。许多研究都表明，肿瘤中的THBS-1具有多结构域形态，可以跟数种受体或者是配体进行结合。同时，THBS-1mRNA在胃癌组织中的表达水平是正常组织中的1.5倍，并且mRNA表现水平与淋巴结的转移是密切相关的。因此，以上研究可以证实单核苷酸多态性与胃癌易感性是存在必然的联系，能够为胃癌患者的临床诊断、治疗以及预后评价提供众多的理论基础与实验依据。

本研究通过检测发现EZH2中rs12670401基因型CC与rs6464926基因型TT在胃癌患者中所占的比例较高，EZH2与rs2072404比例增加也会严重影响胃癌的发生率与风险（P=0.007，OR=1.785，95％CI=1.171～2.724；P=0.012，OR=1.720，95％CI=1.121～2.623）。胃癌患者中的EZH2包含的杂合基因rs2072407TC、rs734004TC、rs734004CG所占比例低于正常血液对照组，所占比例减少可降低患者胃癌发生风险。（P=0.032，OR=0.712，95％CI=0.520～0.975；P=0.033，OR=0.708，95％CI=0.517～0.971；P=0.035，OR=0.712，95％CI=0.517～0.977）。应用连锁不平衡分析LD进一步将上述观察进行证实。胃癌不同组织学类型与不同临床参数间的EZH2免疫组化染色强度差异无统计学意义。证明单核甘酸多态性与胃癌易感性具有相关性。

［1］周渊，吴强，刘弋，等.EZH2基因单核苷酸多态性对中国汉族人群散发性胃癌易感性的影响［J］.临床与实验病理学杂志，2011，27（7）：717-721.

［2］洪斌斌.血小板反应素-1、2基因单核苷酸多态性与胃癌遗传易感性的关系［D］.福建医科大学，2010：10-20.

［3］Choi JH，Song YS，Yoon JS，et al.Enhangcer of zeste homolog 2 expression is associated with tumor cell proliferation and metastasis in gastric cancer［J］.APMIS，2010，118（3）：196-202.

［4］孙静哲，胡妮娅，易金萍，等.EGFR基因rs763317多态性与胃癌遗传易感的相关性研究［J］.中华肿瘤防治杂志，2010，17（10）：724-727.

［5］严家芹，李峰，陈壬寅，等.EGFR基因单核苷酸多态性与胃癌的相关性［J］.山东医药，2010，50（7）：18-20.

［6］张丽媛.MMP-2和TIMP-2及其单核苷酸多态性与胃癌的关系［D］.福建医科大学，2011：6-15.

［7］宋朝霞，刘冰，赵佳，等.抑癌基因PTEN单核苷酸多态性与胃癌的关联性分析［J］.吉林大学学报（医学版），2009，35（4）：694-697.