凉血活血方有效组分对脓毒症大鼠肠道血液循环及氧供的影响

王宇歆，周 静，杜 凡，李东华，刘洪斌

根据中药配伍的相须相使原则，我们将大血藤、牡丹皮、赤芍及延胡索组方为凉血活血方，在临床上用于腹腔感染性疾病的瘀滞期治疗已使用30余年，疗效确切。本实验对该方有效组分对肠道局部血流量、微循环及组织氧供的影响进行了研究。

1 材料和方法

1.1 动物 选用体质量250～300g的健康Wistar大鼠24只，雌雄各半，由中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心提供，SCXK（津）2005-0001。适应实验环境1周，房间温度保持在20～25℃。

1.2 中药方剂及制备 凉血活血方有效组分应用大孔树脂分离提取方法制备，由大血藤有效组分［1］、牡丹皮有效组分［2］、赤芍有效组分［3］、延胡索有效组分［4］组成，药物剂量配比为2∶1∶1∶1。制成浓度生药4g/mL的组分，分装、灭菌处理后置于4℃冰箱。有效组分含量见表1。

表1 凉血活血方有效组分组中各有效组分含量（mg/mL）

1.3 仪器 16通道生理信号记录仪（MP150，美国BIOPAC公司），激光多普勒血流模块（LDF100C，美国BIOPAC公司），激光多普勒微循环血流探头（TSD146，美国BIOPAC公司）；脉冲多普勒血管血流模块及内径0.8mm探头（100-202-20型，美国TRITON公司）；组织氧测定仪及针式探头（OXYMICRO，美国WPI公司）。

1.4 分组与给药方法 Wistar大鼠采用随机数字表方法分成假手术组、模型组、凉血活血有效组分组（组分组）共3组，每组8只，各组均于造模前30min灌胃给药1次，造模后连续观察3d，灌胃给药2次/d，假手术组和模型组给予生理盐水6mL/kg，组分组给予凉血活血组分剂6mL/kg。

1.5 造模方法 本实验采用大鼠盲肠结扎打孔模型（cecal ligation and punch，CLP）［5］。大鼠以10％水合氯醛（3mL/kg体质量）腹腔注射麻醉，腹壁安尔碘消毒，下腹部正中切口，长约2cm。轻缓提出盲肠，在距盲肠游离末端2cm处用1号丝线结扎。在盲肠末端用国产18号针头穿孔，挤压结扎盲肠，挤出0.5g左右肠内容物。还纳肠管后分2层关腹。假手术对照组仅游离盲肠，不做CLP，其他过程相同。麻醉清醒后继续正常喂养，观察时间为3d。

1.6 检测方法与指标 于术后3d，以10％水合氯醛3mL/kg腹腔麻醉。无菌条件下，经腹部正中切口进入腹腔，先于右肾内侧处分离大鼠肠系膜上动脉，应用脉冲多普勒血管血流模块测定大鼠肠系膜上动脉血流流速，单位cm/s。探头与动脉走行方向垂直。在距离回盲部5cm处寻找回肠对系膜缘无血管区，应用激光多普勒微循环血流模块测定小肠浆膜微循环血液灌流量。将微循环血流探头轻轻置于所测部位，注意不要使待测部位受压，以微循环血液灌注量（BPU）为单位进行测定（BPU=单位体积内移动的红细胞数×红细胞移动的平均速度）［6］。最后将组织氧针式探头放置于小肠黏膜下层，并通过组织氧测定仪与电脑相连，待读数稳定后测定小肠黏膜下层组织氧饱和度。手术操作宜轻柔以减少对肠管的刺激，操作完毕回纳肠管，以无菌生理盐水纱布敷盖，保持局部湿度和温度。

2 结果

2.1 对肠系膜上动脉血流的影响 假手术组大鼠肠系膜上动脉血流流速为（1.21±0.19）cm/s。与假手术组比较，模型组血流流速下降，但无统计学差异，而组分组血流流速上升显著（P＜0.01）。见表2。

表2 CLP术后3d大鼠肠系膜血流流速的比较（cm/s±s）

表2 CLP术后3d大鼠肠系膜血流流速的比较（cm/s±s）

注：与假手术组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.01

分组假手术组模型组组分组n8 8 8血管血流1.21±0.19 0.98±0.18 1.87±0.29a、b

2.2 对小肠组织微循环的影响 假手术组大鼠小肠组织微循环血流量为（166.91±20.23）BPU。与假手术对照组比较，组分组微循环血流量有明显增加（P＜0.01）。与模型组相比，组分组血流也有明显上升（P＜0.01）。见表3。

表3 CLP术后3d大鼠肠组织微循环血流量的比较（BPU±s）

表3 CLP术后3d大鼠肠组织微循环血流量的比较（BPU±s）

注：与假手术组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.01

分组假手术对照组模型对照组组分组n8 8 8微循环血流量166.91±20.23 190.28±30.93 316.13±41.31a、b

2.3 对小肠组织氧饱和度的影响 假手术组大鼠小肠组织氧饱和度为（23.53±1.35）饱和度％。与假手术组比较，模型组组织氧饱和度下降（P＜0.05），组分组与假手术组比较无差异（P＞0.05）。与模型组比较，组分组组织氧饱和度有明显增加（P＜0.01）。见表4。

3 讨论

“有效组分”是近年来化学领域研究中医药派生出来的一个新的概念，主要是指在中药复方或单味药材中具有相似化学性质的一大类化合物。现有的研究也表明，开展中药复方有效组分的研究，有望阐明复方作用的物质基础，科学地揭示复方作用的机制，研制易被接受的新型有效组分中药［7］。本研究提取了凉血活血方中针对血热症的凉血组分绿原酸、丹皮酚，及针对血瘀证的活血组分总苷、多糖。有研究证实，绿原酸有抗菌解毒的生理作用［8］，丹皮酚可抑制血小板聚集防止血栓形成［9］，总苷类特别是芍药苷具有抗缺血及抑制血小板聚集的作用［10］，而多糖类能够改善腹腔脏器血液循环，并有抗炎、调节免疫及代谢功能等多方面作用［11］。目前这些组分对于脓毒症肠道血流的影响未见报道，因此本实验就凉血活血组分剂对CLP模型大鼠肠道局部血流等的变化进行了研究。

表4 CLP术后3d大鼠小肠组织氧饱和度的影响（饱和度％±s）

表4 CLP术后3d大鼠小肠组织氧饱和度的影响（饱和度％±s）

注：与假手术组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.01

分组假手术组模型组组分组n8 8 8小肠组织氧饱和度23.53±1.35 18.9±1.31a 24.49±1.29b

肠道是腹腔感染所致损伤最早受累的器官之一，机体在正常情况下，循环血流的30％流经胃肠道，在应激状态下胃肠道最早发生缺血缺氧，又最迟得到恢复［12］。由于肠道血液动力学自动调节机制的存在，组织血流降低不一定减少组织氧供，而血流增加时也不一定增加组织氧供［13-14］。因此，本实验研究选择肠系膜血管血流量、回肠肠组织微循环血流量及肠组织氧饱和度三个指标，分别从肠道局部血流量、微循环血流量及器官组织氧供三个方面，对凉血活血组分剂的活血作用进行检测。而肠组织氧含量的测定，对明确肠组织保护作用具有特别重要的意义。结果显示，与假手术对照组比较，术后3天模型组的肠系膜血管血流量下降，这与CLP术后大鼠整体血流动力学结果一致［15-16］。但微循环血流量略高于假手术对照组，我们考虑这与大鼠的应激状态有关，进一步观察发现肠黏膜组织氧饱和度仍然下降，说明其微循环血流量增加是无效的。而凉血活血方组分组从肠系膜血管血流量、肠组织微循环血流量到黏膜组织氧饱和度均升高，因此，凉血活血有效组分方在整体、器官和组织细胞水平，均促进了肠道血流的改善。

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