大黄饮片在不同溶剂提取中蒽醌成分的含量分析

刁发铭，王 磊

（广东省中医院，广东 广州510120）

药典所载大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum.palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum off icinale Baill.）的干燥根及根茎，具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经、利湿退黄之功效［1］，为临床上用量较大的中药，其有效成分为蒽醌类化合物［2－4］。本文对大黄不同溶剂提取时4种主要蒽醌成分的含量变化进行研究，为大黄提取工艺提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695高效液相色谱仪；Agilent C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；CP225D 型十万分之一电子天平（德国Sartorius）。

1.2 试药与试剂

对照品芦荟大黄素（批号110795－200504）、大黄酸（批号0757－200206）、大黄素（1109056－200110）和大黄素甲醚（110758－201013），购自中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈、乙醇均为市售分析纯试剂；色谱级甲醇、乙腈购自德国Merck 公司；双蒸水由广东省中医院制剂科提供。

1.3 药材

大黄符合2010版中国药典一部规定蓼科植物药用大黄（Rheum off icinale Baill.）的干燥根及根茎，购自广东省康美药材公司，且经广东省中医院董玉珍主任中药师鉴定。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：A 为甲醇，B为0.5%磷酸水溶液，C为乙腈，洗脱梯度：0～5min（9%A，80%B，11%C），5～20min（9%～8%A，80%～72%B，11%～20%C），20～35min（8%～7%A，72%～60%B，20%～33%C），35～50min（7%～5%A，60%～50%B，33%～45%C），50～60min（5%～4%A，50%～36%B，45%～60%C），60～80min（4%～0%A，36%～9%B，60%～91%C）；流速：1mL·min－1；检测波长：280nm；柱温：25℃，进样量：5μL。

2.2 混合对照品溶液的制备

精密称取对照品芦荟大黄素0.97mg、大黄酸1.08mg、大黄素甲醚1.60mg 和大黄素0.97mg，混合后加双蒸水2mL后用甲醇溶解并定容至10mL 量瓶中，得对照品混合储备液。精密吸取混合储备液5mL，加入1mL 双蒸水后再用甲醇稀释并定容至10mL量瓶中，得对照品混合溶液。

2.3 供试品溶液的制备

将大黄饮片粉碎，过60目筛，备用。分别精密称取6份大黄粉末约0.4g，分别置于6个具塞锥形瓶中，分别精密加入40mL的水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、95%乙醇，称定其重量，加热回流1h，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀滤过，取滤液1mL 加20%的甲醇（甲醇：水＝80∶20）定溶到10mL，用0.45μm 微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。每份样品溶液，平行操作2份。

2.4 专属性试验

将样品溶液和空白双蒸水甲醇溶液按“2.1”项下色谱条件检测，比较两者的色谱图，结果表明经本方法处理后，煎液中的杂质不干扰蒽醌类物质的测定，且空白无干扰，色谱见图1。4种蒽醌类成分达到基线分离，且峰形良好。

图1 大黄（A）、空白（B）色谱

2.5 线性关系考察

依次精密吸取对照品 混合溶 液4.0、2.0、1.0、0.5、0.2mL，用20%甲醇依次稀释并定容至10mL 量瓶中，制成系列浓度梯度的混合标准工作溶液，0.45μm 的微孔滤膜过滤后直接进样，按“2.1”项下色谱条件进行HPLC 检测分析。以4种成分峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，得不同对照品的UPLC 回归方程、相关系数、线性范围见表1。

表1 4种待测蒽醌组分的回归方程、相关系数和线性关系

2.6 精密度试验

吸取混合对照品溶液2mL 配成10mL 的溶液，连续进样3次，结果各蒽醌峰面积的RSD 均小于4.0%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取大黄粉末3份，按“2.3”的水回流提取方法制备供试品，接着按“2.1”项下色谱条件进行HPLC检测分析，连续3次，结果各蒽醌峰面积的RSD均小于5.0%，表明该方法重复性良好。

2.8 稳定性试验

取40%乙醇提取液的供试品溶液，室温下，分别于0、4、8、12、16、20、24h进行检测，结果各蒽醌峰面积的RSD 均小于6.0%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.9 样品测定

取制备供试品溶液，每份样品按“2.1”项下色谱条件进行HPLC 检测分析。结果见表2。

表5 不同溶剂提取时大黄中蒽醌的提取率 （%）

3 讨论

本实验对不同提取溶剂中大黄的4个蒽醌类有效成分进行了含量分析，结果显示大黄酸、大黄素和大黄素甲醚在60%的乙醇作为溶剂时的提取率最高，芦荟大黄素在水及不同浓度的乙醇中的提取率无规律性变化，4个蒽醌类有效成分在水中的提取率最低。采用HPLC法分离测定了大黄中4 个蒽醌类有效成分，方法简便快速，分离效果好，重现性好。样品前处理简单易行，为大黄及含大黄的制剂提供了简单可靠有效的检测手段，为含大黄的中药复方的配伍研究奠定了基础。

［1］ 邵明立，马晓伟，吴浈，等.中华人民共和国药典一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：22.

［2］ 徐庆，覃永俊，苏小建，等.掌叶大黄化学成分研究［J］.中草药，2009，40（4）：533－536.

［3］ 郑俊华，果德安.大黄的现代研究［M］.北京：北京大学医学部出版社，2007.

［4］ 李晓红，李蒙，陶艳蓉.大黄酸及其衍生物药理作用研究新进展［J］.现代药物与临床，2010，25（6）：417－421.