RP－HPLC法测定不同炮制方法中枳壳柚皮苷、新橙皮苷含量

张颖梅，李一珊，黎钰波，林 吉，倪 晨＊

（1.广州王老吉药业股份有限公司，广东 广州510450；2.广州中医药大学，广东 广州510405）

枳壳为芸香科植物酸橙Citrus auranfium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实［1］，具有宽胸理气、行气消涨的功效，为中医临床常用药之一。传统枳壳炮制方法有20 多种［2］，常用的有麸炒、醋制、盐制法等。但是，枳壳炮制品的研究多集中于麸炒枳壳上［3－4］，对其它炮制品研究报道较少，系统研究较少。为此，本文对枳壳原药材及三种炮制品进行对比研究，比较不同方法对枳壳中柚皮苷和新橙皮苷含量的影响。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪（配有SPD－M 20A230V 检测器、CTO－20A 柱 温 箱、DGU－20A5 泵、SIL－20A 自 动 进 样 器、LC－solution色谱工作站）、实验室专用超纯水机（重庆利迪现代水技术设备有限公司）、万分之一电子天平（Sartorius BP110s）、高速中药粉碎机、超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

柚皮苷（批号：110722－200309），中国药品生物制品检定所生产；新橙皮苷（批号：05－1010），上海中药标准化研究中心生产。枳壳饮片（批号：KL100628）经广州中医药大学中药鉴定学教研室黄海波老师鉴定为芸香科植物酸橙（Citrus aurantium L.）。

2 炮制品制备

盐制品［5］：取枳壳300g，加盐水闷12h，干燥，即得。每100g枳壳用食盐1g，水适量。醋制品［2］：取枳壳300g，加入定量的米醋拌匀，闷润至醋被吸尽，置炒制容器内，用文火加热，炒干，取出放凉，即得。每100g 枳壳，用米醋4mL。麸炒制品：取麸皮撒在热锅内，加热至冒烟时，加入300g枳壳，迅速翻动，炒至表面色变深时，取出，筛去麸皮，放凉。每100kg枳壳片用麸皮10kg。

3 方法与结果

3.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C185μm（250mm×4.6mm）；流动相：乙腈－水（磷酸调节pH＝3）（20∶80）等梯度洗脱；检测波长：λ＝283nm；流速：1mL·min－1。

3.2 对照品溶液的制备

分别精密称取柚皮苷对照品和新橙皮苷对照品4mg，用甲醇稀释定容至25mL的容量瓶中，即为160μg·mL－1；从160μg·mL－1溶液中取出7.5mL 定容至10mL，即为120μg·mL－1；依此法分别配成160、120、80、60、40、20、10μg·mL－1不同浓度的混合对照品溶液。

3.3 供试品溶液的制备

精密称取原药材粉末1g及炮制品粉末，炮制品粉末相对于原药材量1g，置于锥形瓶中，加入25mL 甲醇，称定重量，静置1h之后超声提取1h，用甲醇补足重量，摇匀过滤。放冷，取枳壳滤液2mL置25mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，0.45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

3.4 含量测定

用液相高效色谱仪，将上述“3.3”制作的供试品溶液进样10μL，在波长283nm，流速1mL·min－1，流动相为乙腈－水（磷酸调节pH＝3）（20∶80）等梯度洗脱，每样品平行两次，计算其含量，结果见表1，液相图谱见图1－图5。

图1 枳壳混合对照品液相色谱

图2 枳壳原药材液相色谱

图3 麸炒枳壳液相色谱

图4 盐制枳壳液相色谱

图5 醋制枳壳液相色谱

表1 枳壳及其炮制品中柚皮苷和新橙皮苷的含量测定

3.5 线性范围考察

分别吸取“3.2”项下160、120、80、60、40、20、10μg·mL－1不同浓度的混合对照品溶液10μL。注入高效液相色谱仪，按拟定的色谱条件分别测定峰面积，以进样量（μg）对峰面积绘制标准曲线。结果表明，在上述色谱条件下，当柚皮苷的进样量在0.1～1.6μg／mL 范围内时，呈良好线性关系，其标准曲线为y ＝1751495.2292x ＋7934.2971，R2＝0.9997；当新橙皮苷的进样量在0.1～1.6μg／mL范围内时，呈良好线性关系，其标准曲线为y ＝1794005.4612x ＋3925.0300，R2＝0.9999。

3.6 精密度考察

精密吸取160μg·mL－1的混合对照品溶液10μL 连续进样6次，测定柚皮苷和新橙皮苷的峰面积，测得柚皮苷的平均峰面积为2775922，RSD＝0.94%；新橙皮苷的平均峰面积为2810459，RSD＝1.01%，表明仪器精密度良好。

3.7 稳定性考察

精密吸取同一药材供试液10μL，分别于0h，3h，6h，9h，12h，24h进样，测定柚皮苷和新橙皮苷的峰面积，测得柚皮苷的平均峰面积为1134592.5，RSD＝0.89%；新橙皮苷的平均峰面积为645753.8，RSD＝1.62%，表明供试品稳定。

3.8 重复性考察

取枳壳饮片用去离子水浸泡后煎煮，取滤液1mL 6份，置于6个10mL容量瓶中，定容摇匀，分别用微孔滤膜过滤，每份进样体积5μL，测定其柚皮苷、新橙皮苷峰面积，测得柚皮苷的平均峰面积为2063931，含量平均值为1.174μg，相对标准偏差（RSD）为0.495%；新橙皮苷的平均峰面积为1148341，含量平均值为0.638μg，相对标准偏差（RSD）为1.298%。表明本方法重现性良好。

3.9 加样回收试验

按“3.3”方法制备枳壳供试品溶液，取该药材供试品溶液6份，分别精密加入混合标准品适量，测定枳壳药材供试品溶液加混合对照品中柚皮苷和新橙皮苷的峰面积，计算柚皮苷和新橙皮苷的回收率，柚皮苷平均回收率103.20，RSD＝3.42%，新 橙 皮 苷 平 均 回 收 率100.10，RSD＝1.46%，表明该方法具有良好的回收率。

4 讨论

本实验结果表明，盐制枳壳和醋制枳壳可以按此含量测定方法检测其含量，方法操作简便，可作为枳壳及其炮制品的质量控制方法。麸炒枳壳中的柚皮苷和新橙皮苷含量比其它炮制品要高。可能的原因：果瓤柚皮苷等黄酮类化学成分的含量仅为原药材料的一半左右。在枳壳的麸炒过程中，果瓤容易脱落，提高其有效成分的含量。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2010.

［2］ 王孝涛.历代中药炮制法汇典（古代部分）［M］.南昌：江西科学技术出版社，1986：296－297.

［3］ 顾雪竹，毛淑杰，李先端.枳壳生品、炮制品中有效成分分析［J］.中国实验方剂学杂志.2006，25（12）：15－17.

［4］ 马新换，赵艳，郭晓颖.炮制对枳壳质量影响的研究［J］.时珍国医国药，2008，20（18）：1456.

［5］ 中国中医研究院中药研究所，北京药品生物制品鉴定所［M］.中药炮制经验集成.北京：人民卫生出版社，1974.