P-选择素和p16基因在乳腺癌中的表达及意义

张占东

·论著·

P-选择素和p16基因在乳腺癌中的表达及意义

张占东

目的探讨P-选择素和p16基因在乳腺癌组织中的蛋白表达及其与侵袭转移和TNM分期的关系。方法采用免疫组化方法(S-P法)检测52例乳腺癌组织P-选择素和p16基因蛋白表达。结果乳腺癌组织P-选择素蛋白表达阳性率明显增高，而正常乳腺组织中未见阳性表达(P＜0.01);乳腺癌组织p16基因蛋白表达阳性率明显低于正常乳腺组织(P＜0.01)。乳腺癌组织P-选择素和p16基因蛋白表达均与淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.05或＜0.01)。乳腺癌组织P-选择素和p16基因蛋白表达呈显著负相关(r=－0.72，P＜0.01)。结论P-选择素和p16基因蛋白表达与乳腺癌的发生发展、侵袭转移和TNM分期密切相关，二者表达的联合检测对评估乳腺癌淋巴结转移程度和TNM分期可能有一定价值。

P-选择素;p16;乳腺癌

乳腺癌是发达国家女性最常见的恶性肿瘤，国内的发病率也呈逐年上升趋势。传统的一些预后因素如腋窝淋巴结转移情况、肿瘤大小、临床分期以及组织学类型、分级等在判断其预后方而虽有意义，但存在着一定的局限性。P-选择素是一种黏附分子受体，由Johnmaton等［1］首先在激活的血小板膜上发现，其可介导癌细胞与内皮细胞、血小板的黏附，在肿瘤的发生发展和转移中起重要作用。多肿瘤抑癌基因p16定位于9p21区域由三个外显子和两个内含子组成编码相对分子量16 000蛋白质，即p16蛋白。P16蛋白的表达不但与多种恶性肿瘤的发生密切相关，而且可能与恶性肿瘤晚期的生物学行为及预后有关［2］。联合检测P-选择素和p16在乳腺癌中的表达，国内外罕见报道。为此我们采用免疫组化方法检测二者在乳腺癌中的表达，并结合临床进行分析探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择于2006年10月至2011年9月在我院行乳腺癌根治术并经病理证实的乳腺癌标本52例，均为女性，年龄32～76岁，平均年龄54岁。标本均经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋。此外，选取同期22例正常乳腺组织作为对照组。

1.2 试剂与方法 P-选择素和即用型兔抗人p16蛋白抗体均为美国Santa-Cruz公司产品。S-P试剂盒为美国Zymed公司产品。操作步骤按说明书进行。

2 结果

2.1 2组P-选择素和p16的阳性表达比较 在乳腺癌组中P-选择素阳性染色率为65.4%(34/52)，对照组未见阳性染色，2组差异有统计学意义(P＜0.01);乳腺癌组织中p16阳性表达率为53.8%(28/52)，对照组为81.8%(18/22)，2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 乳腺癌P-选择素与淋巴结转移和TNM分期的关系 P-选择素表达在乳腺癌肿瘤＞5 cm组、有淋巴结转移组和TNM分期Ⅲ、Ⅳ期组均分别明显高于乳腺癌肿瘤≤5 cm组、无淋巴结转移组和TNM分期Ⅰ、Ⅱ期组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 乳腺癌P-选择素与淋巴结转移和TNM分期的关系

2.3 乳腺癌p16表达与淋巴结转移和TNM分期的关系 无淋巴结转移组和TNM分期Ⅰ/Ⅱ期组明显高于有淋巴结转移组和TNM分期Ⅲ/Ⅳ期组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 乳腺癌p16表达与淋巴结转移和TNM分期的关系

2.4 乳腺癌P-选择素和p16表达的相关性 乳腺癌P-选择素和p16表达呈负相关(r=－0.72，P＜0.01)。

3 讨论

P-选择素是选择素家族的重要成员，Johnmaton等［1］首次报道了胰腺癌肿瘤细胞株有P-选择素的表达。其在肿瘤转移中的具有双重作用。一方面，直接介导肿瘤细胞与血管内皮细胞的黏附。Pottratz等［3］研究表明，内皮细胞P-选择素的表达的提高可以增强小细胞肺癌细胞与激活的内皮细胞之间的黏附。另一方面，P-选择素与整合素协同介导激活的血小板与肿瘤细胞的结合。Borsig等［4］的实验发现，血小板通过P-选择素与某些人的癌细胞系发生黏附，在体内抑制这种相互作用会减弱肿瘤的转移。本研究显示，乳腺癌P-选择素表达水平明显高于正常乳腺组织，提示其在乳腺癌的发生过程中可能起重要作用。正常乳腺组织未见P-选择素阳性表达，这可能由于在正常条件下内皮细胞未受刺激和激活。还有，P-选择素表达在乳腺癌肿瘤＞5 cm组、淋巴结转移阳性组和TNM分期Ⅲ、Ⅳ期组均分别明显高于其对应组，提示高表达的P-选择素通过介导内皮细胞、血小板与癌细胞黏附，参与了乳腺癌浸润转移过程，亦说明P-选择素阳性表达的乳腺癌易于浸润转移。总之，P-选择素与乳腺癌的原发肿物大小、淋巴结转移和TNM分期密切相关。

P16作为一种多种肿瘤抑制基因是1992年Traris在研究黑色素瘤的细胞周期依赖激酶(CDKs)和相应周期蛋白结合的蛋白时发现的p16蛋白可直接与细胞周期素D(cyclinD)竞争性结合细胞周期素依赖激酶CDK4和CDK6的结合，阻止细胞从G1期进入S期，抑制细胞无限增殖，防止癌变［5－7］。因此，当p16基因缺失、突变而失活时使p16蛋白表达缺失时抑制肿瘤增生的能力降低，导致细胞异常生长。其表达与多种肿瘤的转移潜能密切负相关，突变后其抑制肿瘤的能力丧失。本研究发现其乳腺癌组织表达阳性率明显低于正常乳腺组织，提示p16抑制基因的丧失或突变使其抑制肿瘤的能力丧失，可引起细胞癌变的发生。本研究还发现p16表达阳性率在乳腺癌有淋巴结转移组和TNM分期III、IV期组均分别明显低于其对应组，表明抑癌基因p16与乳腺癌的淋巴结转移和TNM分期密切相关。

通过本研究还显示乳腺癌P-选择素和p16表达呈显著负相关(r=－0.72，P＜0.01)，我们认为P-选择素可能影响乳腺癌组织中抑癌基因p16的表达促进肿瘤转移，而抑癌基因p16也可能通过影响乳腺癌组织中P-选择素的表达抑制肿瘤转移，P-选择素高表达和抑癌基因p16低表达共同提示乳腺癌侵袭转移的可能性，二者的联合检测对评估乳腺癌淋巴结转移程度和TNM分期可能有一定价值。

1 Johnmaton GI，Cook RG，McEver PR，et al.Cloning of GMP-140，a granulemembrane protein of platelets and endothelium sequence of similamity to proteins involved in cell adhesion an infammation.Cdll，1989，56: 1033-1044.

2 Mc Carty QJ，Mousa SA，Bray PF，et al.Immobilized platelets support human colon carcinoma cell tethering，rolling and firm adhesion under dynamic flow conditions.Blood，2000，96:1789-1797.

3 Pottratz ST，Hall TD，Scribbner WM，et al.P-selectin mediated attachment of small cell lung carcinoma to endothelium cells.Am J Physiol，1996，217:1918-1923.

4 Borsig L，Wong R，Feramisco J，et al.Heparin and cancer revisited:mechanistic connections involving platelets，P-selectin，carcinoma mucins and tumor metastasis.Proc Natl Acad Sci USA，2001，98:3352-3357.

5 郭洪斌，张培，王斌，等.p16蛋白、CerbB 2在乳腺癌中表达的意义.中国老年学杂志，2005，25:718-719.

6 曾谷清，周秀田，程爱兰，等.p16蛋白和VEGF在乳腺癌组织中的表达及相关性研究.肿瘤防治研究，2004，31:257-260.

7 卫生部医政司.中国常见恶性肿瘤诊治规范(乳腺癌).北京:北京医科大学与中国协和医科大学联合出版，1991.53-56.

R 737.9

A

1002－7386(2012)17－2582－02

10.3969/j.issn.1002－7386.2012.17.008

063000 河北省唐山市妇幼保健院普外科

1.3 判定标准 P-选择素表达以整张切片中阳性(棕黄色)染色血管≥5条为阳性。p16以肿瘤细胞浆或细胞膜呈棕黄色为阳性表达。根据肿瘤细胞阳性数进行判断，采用高倍视野随机记数500个肿瘤细胞中的阳性细胞所占比例，分为4级，阳性细胞数＜5%为阴(－);阳性细胞数占6%～25%为轻度阳性(+);阳性细胞数占26%～50%为中度阳性(++);≥51%以上为强阳性(+++)。

1.4 统计学分析 计数资料比较采用χ2检验，相关性采用Spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2012－04－17)