维甲类X受体和基质金属蛋白酶-2在结直肠癌组织中的表达

周艳红 (唐山职业技术学院基础医学部，河北 唐山 063000)

维甲类X受体(RXRs)是核激素受体超家族成员之一〔1〕，也是目前研究最为透彻的核受体亚家族，RXRs在多种肿瘤组织中均有表达改变。基质金属蛋白酶(MMPs)是含有9种酶蛋白分子的家族，可以导致基质膜和细胞间质成分破坏与降解，在恶性肿瘤的侵袭与转移中发挥重要作用。MMP-2是其中的一种，目前国内外对MMP-2在恶性肿瘤浸润和转移过程中的作用研究较多〔2〕，对于恶性肿瘤的演变过程中MMP-2的表达状况和所起作用研究尚未深入。本实验通过检测正常结直肠黏膜、良性病变、结直肠癌等组织中RXRα和MMP-2的表达状况，探讨它们与结直肠癌发生、发展的关系，为结直肠癌的诊断和治疗提供新的实验依据和参考指标。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取唐山市协和医院2005～2007年间资料齐全的结直肠癌标本存档蜡块53例，良性腺瘤标本31例;正常人黏膜组织37例;年龄41～75岁，平均56岁;以上标本均经病理证实。所有患者术前均未进行放疗、化疗或激素治疗。结直肠癌临床分期采用TNM方案。Ⅰ期+Ⅱ期22例，Ⅲ期+Ⅳ期31例。淋巴结转移阳性33例，淋巴结转移阴性20例。

1.2 试剂 兔抗人RXRα多克隆抗体和兔抗人MMP-2多克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司;二步法免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组织化学检测 采用二步法免疫组化检测系统进行染色。一抗选用兔抗人RXRα多克隆抗体(稀释度1∶100)和兔抗人MMP-2多克隆抗体(稀释度1∶100)。用已知的结直肠癌阳性组织切片做阳性对照，用PBS代替一抗作空白对照，具体实验步骤参照北京中杉二步法免疫组化试剂盒说明书进行。

1.4 结果判定 RXRα阳性染色主要集中于细胞核，呈棕黄色颗粒;MMP-2阳性表达部位主要在细胞质中，呈棕黄色。采用阳性细胞百分比法进行半定量分析：计数100个细胞呈现的阳性细胞数，结合显色强弱分别为：阴性(-)不显色，弱阳性(+)＜25%，中度阳性(⧺)26% ～50%，强阳性(⧻)＞50%。

1.5 统计学方法 采用SPSS13.0软件处理，样本均数的比较采用方差分析，计数资料采用χ2检验。

2 结果

2.1 RXRα和MMP-2在不同组织中的表达及相关性 如表1所示，与正常黏膜和良性腺瘤组比较，结直肠癌组RXRα表达率呈下降趋势，结直肠癌组MMP-2表达率呈上升趋势，差异均有显著性(P＜0.05)。

2.2 RXRα和MMP-2表达与临床病理特征之间的关系 结直肠癌组织RXRα低表达和MMP-2高表达，与淋巴结转移和临床病理分期有关(P＜0.05)，与肿瘤分化程度无关，见表2。

表1 RXRα和MMP-2在不同结直肠组织的阳性表达率〔%(n/n)〕

表2 RXRα和MMP-2阳性表达与结直肠癌临床病理参数的关系〔%(n/n)〕

2.3 RXRα和MMP-2的表达相关性 对RXRα和MMP-2在各组间的蛋白表达量进行相关性分析，结果显示，在结直肠癌中RXRα和MMP-2蛋白表达量呈负相关(r=-0.586，P＜0.05)。研究资料表明，MMP-2蛋白在结直肠癌癌变中起上调作用，而RXRα蛋白起下调作用，RXRα蛋白在结直肠癌癌变中的调节作用有待于进一步研究。

3 讨论

RXRs在多种肿瘤组织中均有表达改变，它在调控细胞分化和诱导细胞凋亡中发挥重要的转录调节作用。Brabender等〔3〕检测食管癌和Barrett食管患者组织中RXRα mRNA情况，发现癌组织中RXRα mRNA的表达显著下降，在有广泛淋巴结转移的患者中表达更低，术后生存时间更短，RXRα mRNA表达下降与食管癌发生、转移及不良预后有关。RXRs受体表达部位与肿瘤的恶性程度也有一定联系〔4〕。本实验结果显示在结直肠癌中RXRα的阳性表达率低于良性腺瘤组及正常黏膜组，而且RXRα的表达与淋巴结转移和临床分期相关，与肿瘤分化程度无相关性，提示RXRα有望作为判定结直肠癌分化程度、病理分期的一种新的参考指标，予以进一步的研究。

MMPs在肿瘤或间质细胞中的过表达和癌症的演变进展之间存在一定的因果关系。国内研究发现MMP-2在多种肿瘤组织中(如肺癌、胃癌、食管癌、卵巢上皮癌、宫颈癌等)表达水平均显著高于相应正常黏膜组织，同时发现MMP-2水平与肿瘤分期及远处转移密切相关，提示MMPs与肿瘤进展相关，并指出了为肿瘤干预治疗而对MMPs进行研究的重要性〔5～9〕。国外学者Roeb等〔10〕在对20例结肠癌、10例直肠癌患者进行研究时发现，结肠组织中MMP-2及MMP-9在肿瘤组织中水平均显著高于相应正常黏膜组织，以MMP-9升高明显;而在直肠肿瘤中，仅MMP-2水平显著增高。

本研究的结果表明，MMP-2的表达从正常黏膜组织到结直肠癌有逐渐增加的趋势，而且MMP-2与肿瘤大小和淋巴结转移等病理参数之间有相关性，这一结果表明，MMP-2在结直肠癌前病变向癌转变的过程中具有重要意义，在癌变发生之后，它与肿瘤分化程度无相关性。

RXRα与MMP-2在各种结直肠癌组织中明显负相关性，提示RXRα和MMP-2与结直肠癌的发生、发展密切相关。

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2 马 莉，张桂华，戚 凤.基质金属蛋白酶-2与肿瘤关系的研究进展〔J〕.现代医药卫生，2009;25(10)：1524-5.

3 Brabender J，Lord RV，Metzger R，et al.Role of retinoid X receptor mRNA expression in Barrett's esophagus〔J〕.J Gastrointest Surg，2004;8(4)：413-22.

4 Buentig N，Stoerkel S，Richter E，et al.Predictive impact of retinoid X receptor alpha expression in renal cell carcinoma〔J〕.Cancer Biother Radiopharm，2004;19(3)：331-42.

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8 高义军，韩 萍，戴 琪，等.MMP-2在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义〔J〕. 西部医学，2010;22(11)：2000-2.

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10 Roeb E，Dietrich CG，Winograd R，et al.Activity and cellular origin of gelatinases in patients with colon and rectal carcinoma〔J〕.Cancer，2001;92：2680-91.