HPLC测定小儿麻甘泡腾片黄芩苷含量

罗亚

(湘潭职业技术学院 湖南湘潭 411101)

小儿麻甘泡腾片由小儿麻甘颗粒改剂型而来,由麻黄、黄芩、紫苏子、甘草、桑白皮、苦杏仁、地骨皮、石膏8位中药及乳糖、甜菊苷、酒石酸、碳酸氢钠等辅料加工制成,具有平喘止咳、利咽祛痰。用于小儿肺炎喘咳,咽喉炎症。方中各药都采用水提醇沉工艺,为了有效控制小儿麻甘泡腾片的质量,保证临床疗效,作者参照《中国药典》2005年版一部黄芩项下,采用HPLC法对小儿麻甘泡腾片中黄芩的主要成份黄芩苷进行含量测定研究,本方法简便,快捷、准确、重复性好,能有效控制小儿麻甘泡腾片的质量。

1 仪器与试药

岛津LC-10A型高效液相色谱仪(SPD-10AVP检测器LC-10AVP泵);C18色谱柱(Polaris 250×4.6mm,5μm,瓦里安公司);甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其它试剂均为分析纯;黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号为110715-200514),小儿麻甘泡腾片自制。

图1 小儿麻甘泡腾片HPLC图

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Polaris C18色谱柱(4.6×250mm,5μm),流动相甲醇－水－磷 酸(47∶53∶0.2),流 速1.0mL·min-1,柱温为室温,检测波长280nm,进样量10L。在上述色谱条件下,黄芩苷峰和样品中其它组的峰可达基线分离,且与其它相邻峰分离度>1.5,按黄芩苷峰计算,理论板数在2500以上,阴性对照无干扰,对照品、供试品、阴性样品、黄芩苷色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1毫升含15μg的溶液,即得。

2.3 线性关系考察

精密吸取浓度为14.8μg/mL的黄芩苷对照品溶液2.5、5、10、15、20μL注入液相色谱仪,测定其峰面积积分值,以进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:y=45871x-23921,r＝0.9995。结果表明,黄芩苷在0.037～0.296μg范围内具有良好的线性关系。

2.4 供试品溶液的制备

取本品10片,研细,取约0.25g,精密称定,加70%乙醇40mL,加热回流1h,放冷,滤过,滤液置100mL量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取1mL,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。

2.5 阴性溶液的制备

取除黄芩外的其余处方量药物,按制备工艺方法制备缺黄芩的阴性样品,按上述供试品溶液制备方法制成缺黄芩苷的阴性溶液。

表1 黄芩苷加样回收率

2.6 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液10μL,重复进样5次,测定黄芩苷峰面积,RSD1.4%。

2.7 稳定性试验

分别精密吸取同一供试品溶液10μL,于0、4、8、12、16、20h进样,RSD1.6%。

2.8 重复性试验

取同一批号样品5份,按上述含量测定项下的条件,依法测定,计算,结果RSD0.4%。

2.9 加样回收率试验

取已知含量为0.60%(批号:100301)的样品约0.12g,共5份,精密称定,分别精密加入黄芩苷对照品溶液(0.0148µg/mL)50mL,即0.74mg,按上述含量测定项下的方法测定含量,计算回收率,结果表明,本方法加样回收率好。结果见表1。

2.10 样品测定

取3批样品(100301,100302,100303),按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,按2.1色谱条件进行含量测定,计算含量,结果3批小儿麻甘泡腾片黄芩苷的含量分别为每片6.01,6.15,5.98mg,RSD分别为0.57%,0.74%,0.45%。

3 讨论

3.1 供试品溶液的制备

参照《中国药典》2005年版一部药材黄芩中黄芩苷含量测定的方法,对样品提取方法进行了考察,方法1:样品加70%乙醇40mL超声提取40min;方法2:样品加70%乙醇40mL加热回流提取30min;方法3:样品加70%乙醇40mL加热回流提取60min。试验结果表明,3种方法制成的供试品溶液进样,均基线平稳,分离度好。但方法3黄芩苷提取较完全,故选择方法3进行供试品溶液的制备。

3.2 样品中黄芩苷含量限度的确定

小儿麻甘泡腾片样品中黄芩苷含量测定结果平均为6.05mg/片,每片含生药2.28g.根据中国药典2005年版一部黄芩药材中黄芩苷含量限度(9.0%),黄芩水提醇沉后入药,转移率约为40%,成品转移率,按70%计算,制定每片含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计,不得少于4.0mg。

[1] 中国药典.一部.2005:211.