高彬
(重庆市涪陵区马武镇畜牧兽医站,重庆涪陵 408107)
当前生猪养殖业对猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等病毒病的防疫十分重视,反而对猪链球菌病疏于防范,就临床而言,猪链球菌病在各种猪场传染病中占很大比例,特别是气候湿热的季节是猪链球病传染高发季节。近期本地部分生猪养殖场有部分生猪出现了发热,关节肿胀,败血症和神经症状为特征的急性传染病,对病料进行实验室诊断确定此次疫情的病原为链球菌。
猪链球菌镜检呈圆形或椭圆形,常多个集聚呈链状排列,链长短不一,革兰氏染色阳性。链球菌细胞壁内含多种氨基酸糖,根据其特异性抗原的不同共有19个血清型。引起猪链球菌的病原C群的兽疫链球菌占绝大多数,此次未能对分离的链球菌进行血清型鉴定。猪链球菌病根据临床表现可分为四种类型:败血症型、脑膜脑炎型、关节炎型、化脓性淋巴结炎(淋巴结脓肿)型。
临床可见部分患病猪关节肿胀,体温升高,不食或厌食。对出现病变严重的病猪进行解剖后发现,病猪浆膜出现浆液性炎症变化,心包积液增多;肾脏红肿;脾脏肿大呈暗红,包膜有纤维素沉着;淋巴结红肿;肝脏肿大;关节腔内滑液增多,严重者关节软骨坏死,关节周围组织有多发性化脓灶。
(一)病料 采集五个猪场的病猪组织样品。
(二)培养基 普通琼脂平板、鲜血琼脂平板、麦康凯琼酯平板等。
(三)试验药敏试纸 青霉素、土霉素、洁霉素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、头孢菌素。
(四)试验动物 健康小白鼠(30~35 g)10只。
(五)病原分离 无菌采取病猪的肝、肺、脾、肾、脑和关节液,对该病料无菌触片革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性双球菌或短链状球菌,然后接种于鲜血琼脂平板。37℃需氧培养24 h后,挑取可疑菌落革兰氏染色镜检,同样可见一些革兰氏阳性双球菌或短链状球菌,挑取单个菌落再接种鲜血琼脂平板,纯化后放置4℃,冷藏备用。
(六)生化试验 取上述分离菌血清肉汤培养物,分别接种于蔗糖、山梨醇、葡萄糖、甘露糖、乳糖、马尿酸钠及淀粉培养基,37℃培养24 h后,观察其对糖的利用情况,全部重复三次,并记录结果见表1。
(七) 动物感染试验 将分离菌株24 h血斜面用灭菌的生理盐水适当稀释,配成悬浊液,腹腔注射5只健康小白鼠,接种量0.3 ml/只,另外5只作对照,注射同剂量的生理盐水,观察结果。
(八) 药敏试验 采用纸片扩散法,用无菌棉签蘸取分离菌的血清肉汤培养物,均匀涂布于鲜血琼脂平板,在琼脂平放上向一个方向均匀涂布然后将平板每转动60度涂布一次,共涂三次最后沿平板边缘涂布一圈;加盖后放置5 min,待平板稍干后,用无菌镊子将各种药敏纸片分别平贴在培养基表面,并轻压使其紧贴平板表面,每个平板贴4张药敏纸片,两纸片相距25 mm,纸片与平板边缘不小于15 mm,贴好纸片的平板于37度培养24 h,观察结果。结果按抑菌圈直径大小和各抗菌药的具体标准,评定为高度敏感、中度敏感或耐药。结果评定参照表2。
(九)试验结果
1.病料中链球菌检出及分离结果将病料和病料培养物涂片革兰氏染色后镜检,发现4个养猪场的疑似病料中含有大量的革兰氏阳性单在、呈双或链状排列的球菌。
2.培养特性 37℃培养24 h后,所采的病料在鲜血琼脂平板pH=9.6肉汤上形成大量圆形、不透明、表面光滑、隆起的灰白色直径为1~2 μm的小菌落,菌落周围形成2~4 mm宽、界限分明、完全透明、无色的β-溶血环。在普通平板和麦康凯培养基上单个菌落均表现生长贫瘠。10%鸡血清肉汤中培养48 h后,可见管底形成絮状沉淀,上液澄清,无菌膜和菌环。
3.生化试验结果见表1。
4.动物感染试验。结果小白鼠注射病原菌的第四天开始死亡,死亡的小白鼠皮肤发绀,剖检肝、脾、肺、心出血,呈败血症,剖检发现注射部位有直径0.9~1.1 cm的脓肿,浓汁呈黄绿色。而对照组作的均未见死亡,从死亡的小白鼠的肝脏、重新分离到革兰氏阳性单在、呈双或链状排列的球菌。试验表明,分离的菌株对小白鼠有致病性。
5.药敏纸片试验结果见表2。药敏纸片试验结果表明敏感的药物依次是:头孢菌素、环丙沙星;中度敏感的依次是:青霉素和卡那霉素;而对土霉素、链霉素、庆大霉素具有抗药性。
(一)治疗 根据药敏试验结果,选择高敏药物治疗。对淋巴结脓肿,待脓肿成熟后,及时切开,排除脓汁,用3%双氧水,或0.1%高锰酸钾液冲洗后,涂以碘酊。环丙沙星治疗猪链球菌病时每千克体重用2.5~10 mg,每12 h注射1次,连用3 d,能迅速改善症状,疗效明显优于青霉素。对败血症型及脑膜脑炎型,应早期大剂量使用抗生素,青霉素(每头40万~100万单位,每天肌注2次;革庆增安注射液,每千克体重0.1 ml,肌肉注射,每日2次,也有很好的疗效。为了巩固疗效,应连续用药5 d以上。在治疗过程中有明显发热症状的,用解热镇痛剂,体质虚弱的,注射维生素C。全群口服抗生素,每吨饲料加阿莫西林200 g或土霉素500 g,连用7 d以防继发感染。
表1 分离链球菌的生化试验鉴定结果
表2 药敏试验结果
(二)预防 清除传染源,病猪隔离治疗,带菌母猪尽可能淘汰。污染的用具和环境用菌毒敌彻底消毒。猪圈和饲槽上的尖锐物体,如钉头、铁片、碎玻璃、尖石头等能引起外伤的物体,一律清除。新生的仔猪,应立即无菌结扎脐带,并用碘酊消毒。药物预防,猪场发生本病后,可用药物预防,以控制本病的发生。每吨饲料中加入四环素125 g,连喂4~6周。
1.小白鼠注射病原菌的第四天开始死亡,死亡后,小白鼠皮肤发绀,剖检肝、脾、肺、心出血,呈败血症,剖检发现注射部位有直径0.9~1.1 cm的脓肿,浓汁呈黄绿色。而对照组均未见死亡,从死亡小白鼠的肝脏、重新分离到革兰氏阳性单在、呈双或链状排列的球菌。试验表明,分离的菌株对小白鼠有致病性。
2.培养菌敏感的药物试验依次是:头孢菌素、环丙沙星;中度敏感的依次是:青霉素和卡那霉素;而对土霉素、链霉素、庆大霉素具有抗药性。为此临床用药提供了科学依据。本病初期用青霉素治疗,效果不理想,可能是对青霉素已产生了耐药性。
3.从症状上看,本病极易与由致病性大肠杆菌引起的猪水肿病相混淆,应严格注意区别。本次疫情急发暴发性猪链球菌病,但由于实验条件有限,具体分属哪一血清型,还需进一步分离鉴定。
4.本病的发病率和死亡率都相当高,对养猪业危害相当大,必须引起高度重视。同时,建议在疫区使用猪链球菌疫苗(ST171)对仔猪进行免疫接种。
(略)