1619例尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒基因型检测及分析

胡小平，王勇强，叶蓉，于波，钟绮丽，王燕

（北京大学深圳医院，深圳518036）

文献报道尖锐湿疣（condyloma acuminatum,CA）患者人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）感染型别有地区性差异[1]，并且HPV感染的型别与其生物学行为和临床复发相关。为了解深圳地区HPV感染基因型别分布情况，本研究回顾性分析了我院2年来尖锐湿疣病例HPV基因型检测的情况，结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 所有患者均来自我院皮肤科门诊2010年3月—2012年3月确诊的HPV阳性的CA患者，共1 619例，其中男741例，年龄16～72岁，平均（31.2±8.2）岁；女878例，年龄 16～74 岁，平均（30.5±7.8）岁。调查表记录患者一般资料、皮损分布、病程和既往治疗等情况。所有患者均根据病史，临床表现和皮损脱落细胞HPV检测确诊。

1.2 采样方法 棉拭子除去皮损表面过多分泌物，以专用脱落细胞采集器对皮损进行采集脱落上皮细胞样本，做好样本标记。保存在2～8℃冰箱，7 d内检测。

1.3 检测方法 使用人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒中聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）体外扩增和脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid,DNA）反向点杂交相结合的DNA芯片技术（亚能生物技术有限公司生产）。其检测原理为：利用HPV的基因特点设计特异引物，可以扩增出包含23种HPV基因型的目标片段，再将扩增产物与固定在模条上的包括18种高危型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4） 和 5 种低危型（HPV6、11、42、43、44）在内的分型探针进行杂交，依据杂交信号的有无来判断是否有这些HPV基因型的存在。所有操作过程严格按照说明书进行。

1.4 结果判定 阳性质控（positive control,PC）为显色质控点。除PC位点外，根据模条上各检测位点有无信号，判断是否感染了相应的HPV基因型（包括单一感染和混合感染），见图1。

1.5 统计学处理 对所有数据采用SPSS13.0统计软件包进行分析。计数资料的比较采用卡方检验，检验标准为P<0.05。

2 结果

2.1 1 619例尖锐湿疣患者HPV基因型检测结果和分布 23种HPV基因型均能检出，其中单一HPV感染1 035例，占63.9%；多重感染584例，占比36.1%。低危型阳性率为68.6%（1 112/1 619），高危型阳性率为57.3%（929/1 619）。各型HPV感染中，前7位的型别比例分别为：6型：35.8%；11型：25.1%；43型：14.8%；16型：14.5%；52型：10.1%；58型：8.3%；18型：5.7%。见图1和表1。

2.2 HPV感染性别分组比较 男性患者感染HPV高危型阳性率为26.0%（422/1 619）；女性患者感染HPV高危型阳性率为31.3%（507/1 619）。男、女性HPV高危型基因型以16、52、58型为主。男女性高危型HPV感染阳性率差异有统计学意义（χ2=7.77，P<0.01）。

2.3 多重感染病例分布情况 多重感染表现为2～9种HPV混合感染，二重感染为主。组合方式多样，呈现以低-高危型、低-低危型和高-高危型三种不同形式存在，主要以低-高危型感染为主。按型别排序前几位分别是 6/11、11/43、43/16，43/58等。高危型以混合感染为主，占多重感染89.7%（524/584）。男、女性多重感染分组比较，差异有统计学意义（χ2=27.19，P<0.001）。见表 2。

表1 1619例尖锐湿疣患者HPV基因型检测结果例

表2 HPV多重感染病例分布情况例

3 讨论

尖锐湿疣发病率高，对患者的身心健康影响巨大。其组织中的HPV型别多达上百种，根据生物学行为不同，分为低危型和高危型[2]。高危型和宫颈癌相关[3]。本研究中所用试剂盒能够检测出23种高低危型HPV基因型，涵盖了主要流行型别。结果显示，所有23种型别均在患者中分布，其中包括1例少见型HPV感染：人乳头瘤病毒MM4型（human papilloma MM4，HPVMM4）。高危型阳性率为57.3%，高于国内文献报道，和国外文献报道相近，表明深圳地区高危型检出比例明显上升[4-5]，提示对高危型感染患者应长期随访，预防宫颈癌的发生。低危型阳性率为68.6%，常见为HPV6和11型。常见高危型型别是 HPV16、52、58、18等，这和 2007年文献报道深圳女性CA患者HPV基因型分布相似[6]，但HPV52和58型比例明显高于 18型，又与文献报道有差异，原因可能为所观察的病例数不同，本研究大样本的数据可能更说明本地区HPV基因型的流行情况，和其他地区流行数据不同体现了HPV基因型地区分布的差异[7]，本地区HPV基因型的表现更复杂，可能与深圳人口密度高，流动性大有关。本研究中，HPV多重感染表现为2～9种HPV基因型组合，占36%，以二重感染表现为主。其中1名16岁女性患者表现特殊，感染了HPV16，18，31，33，35，52，68，11，42 等 9 种型别，无细胞和体液免疫缺陷，亦未发现伴随其他基础疾病。目前未见类似文献报道，其多重感染的原因值得深入研究。

对HPV感染性别分组比较显示，男性以HPV6、11、43型等低危型感染为主，女性以HPV16、52、58型等高危型感染为主，这与国内肖克林等[8]报道一致，女性更容易感染高危型HPV，而且女性多重感染比例明显高于男性。HPV多重感染中，高危型HPV以混合感染为主（89.7%）。有研究发现混合感染在一定程度上对宫颈病变及宫颈癌的发展起促进作用[9]，这值得引起我们的重视。而女性对高危型HPV的易感性，提示男女性别感染的差异性。目前HPV疫苗主要针对HPV16和18型感染，而本研究中HPV52和58型感染所占比例明显上升，提示在今后HPV疫苗开发中还应该注意对HPV52和58型感染的防治。

对HPV感染年龄分组比较显示，女性小于30岁组更易感染高危型HPV。这种HPV感染年龄组的差异，是否与女性不同年龄段的性活跃程度所产生的影响有关，需要更进一步的研究才能证实。由于高危型HPV感染和宫颈癌发病密切相关，且其潜伏感染10余年左右可能致癌[2，10]，那么本研究结果提示女性高发宫颈癌的年龄段可能为30～45岁之间，提示此年龄段宫颈癌筛查的重要性。

本研究通过对尖锐湿疣组织HPV型别的检测，反映出目前深圳地区尖锐湿疣患者HPV感染的分子流行病学特点，对于判断尖锐湿疣患者的预后、指导医生对高危型和多重感染患者的监测、减低宫颈癌的发生和特异性疫苗的研制具有重要的临床意义。

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