中药添加剂对断奶仔猪免疫力及抗寄生虫感染的影响

俞向前，万世平，顾武军，杨晓峰，刘耀芳，朱建国，王卫国，叶承荣

(1.上海市浦东新区动物疫病预防控制中心，上海 201202;2.上海市南汇长桥猪场，上海 201314;3.上海交通大学，上海 200240;4.上海市浦东新区农业服务中心，上海 201201)

在现行生猪养殖模式下，仔猪的断奶向低龄化发展，断奶应激产生的各种问题越来越突出，断奶仔猪的饲养管理、环境控制、疾病预防与控制成为整个生猪养殖过程中最关键的环节。当前，断奶仔猪主要采用抗生素类药物及化学药物进行疾病的预防与控制，然而其日益暴露的不同程度的药物残留危害促使人们转而求助于毒副作用小、无残留且不易诱生耐药性的中药制剂。复方中药制剂富含多种活性成分，兼有药物和营养双重作用，具有提高仔猪采食量、促进生长、增强免疫、降低腹泻率、促进消化器官发育、提高酶活性及改善动物产品品质的作用[1-2]。本试验根据断奶仔猪的饲养管理、环境控制、疾病预防与控制的实际需要，以益气健脾、滋补肝肾、消积杀虫为组方原则，将党参、茯苓、山药、黄芪、莲子、薏仁等21味中药，经提纯加工后再按一定比例添加到断奶仔猪的基础日粮中，研究复方中药制剂对断奶仔猪免疫机能及抗寄生虫感染的影响，为中药制剂在断奶仔猪生产中的应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 复方中药添加剂 中药添加剂其组分和重量份数为:党参60份、茯芩60份、山药60份、黄芪60份、莲子20份、炒薏仁20份、苍术20份、陈皮20份、何首乌60份、莬丝子20份、女贞子20份、旱莲草20份、桔梗10份、焦神曲60份、白扁豆15份、贯众20份、炒槟榔20份、南瓜子40份、蒲公英60份、马齿苋60份、甘草12份等。各单味中药均购自上海人和堂医药公司，粉碎研磨后按照基础日粮的1.5%混匀添加，按疗程服用，连续饲喂1周，停3 d，再服，30 d为1个疗程。

1.1.2 主要试剂 血清免疫球蛋白试剂(批号:[2008]3402801)为德灵公司进口原装试剂;肝素钠、RMPI-1640培养液、96孔平底细胞培养板、Hank’s液、PHA、MTT、DMSO 溶液购自上海前尘生物技术有限公司。猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒(ELISA)(批号:20110622)、猪瘟病毒抗体检测试剂盒(ELISA)(批号:20110623)均系龙岩蚨瑞生物科技有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 动物试验设计 试验在浦东新场养猪场进行，起止时间为2011年4-6月。试验动物为同一保育舍的健康断乳仔猪，出生日龄差不超过4 d，平均为30～35日龄，初始体重相近，组间差异不显著。将试验猪随机分成2组，对照组30头，饲喂基础日粮;试验组30头，饲喂基础日粮+1.5%中药添加剂。疫苗注射时间:试验前一周注射蓝耳病疫苗，试验前一周猪瘟一免，试验1周后猪瘟疫苗二免，5周后猪瘟疫苗三免，两组注射疫苗条件完全一致。猪舍、饲养条件、卫生环境、饲料品质及其他饲养管理等均相同，自由采食和饮水。

1.2.2 血液样品处理 分别在用药1个疗程和2个疗程后，清晨空腹，从两组活体前腔静脉采血，每组随机15头。每头猪无菌采集10 mL血液，分装在3个离心管中，其中2管静置1 h后，3000 r/min离心，取上清保存备用，1管(加1%肝素钠抗凝)立即送实验室测定。

1.2.3 淋巴细胞转化率的测定 采用比色法(MTT法)检测淋巴细胞转化功能，具体操作方法参照文献[3]进行。按下列公式计算淋巴细胞转化率:淋巴细胞转化率(%)=(试验组OD值一对照组OD值)/对照组OD值×100%。

1.2.4 猪瘟及蓝耳病抗体水平的测定 取用药1个疗程和2个疗程后制备的血清，分别用猪瘟抗体ELISA检测方法测定猪瘟抗体水平以及蓝耳病抗体ELISA检测方法测定蓝耳病抗体水平。具体检测方法按试剂盒说明书进行。用酶标仪在450 nm波长处读取吸光值(OD)，根据检测试剂盒说明书，样品OD值≥0.5，且其OD值与阴性对照OD值比值超过2倍者，为合格。

1.2.5 中药添加剂对猪肠道寄生虫虫卵的抑制试验 用药1个疗程和2个疗程后，试验组与对照组各采集5份新鲜粪便，每份取10 g置于50 mL小烧杯中，加入10 mL PBS，待粪便泡松软后用玻璃棒充分搅碎搅匀，利用尼龙筛收集虫卵并将虫卵收集于干净的小烧杯中，在显微镜下进行寄生虫虫卵计数。按以下公式计算减卵率(EPG为平均每克粪便中所荷虫卵数):

1.2.6 试验数据处理 采用统计学软件SPASS 17.0对试验数据进行处理，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验。P＜0.05为差异，有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 中药添加剂对断奶仔猪淋巴细胞转化率的影响 由实验结果可见，2个疗程后，试验组比对照组的淋巴细胞转化率显著提高(P＜0.05)。结果表明，中药添加剂可显著改善断奶仔猪的淋巴细胞转化率，能显著提高机体的细胞免疫功能。

2.2 中药添加剂对猪瘟抗体水平的影响 由表1可见，试验前对照组和试验组两组猪的猪瘟抗体合格率差异不显著(P＞0.05);1个疗程后，试验组合格率与对照组差异不显著(P＞0.05);2个疗程后，试验组合格率比对照组提高了17%，差异显著(P＜0.05)。

表1 中药添加剂对猪瘟抗体水平的影响

2.3 中药添加剂对猪蓝耳病抗体水平的影响 由表2可见，试验前对照组和试验组两组猪蓝耳病抗体合格率无差异(P＞0.05)，抗体水平基本一致;1个疗程后，试验组合格率比对照组提高了3%(P＞0.05);2个疗程后，试验组合格率比对照组提高了19%，差异显著(P＜0.05)。

表2 中药添加剂对猪蓝耳病抗体水平的影响

2.4 中药添加剂对猪肠道寄生虫虫卵的抑制效果由表3可知，用药1个疗程后，试验组的减卵率为1%，与对照组结果进行方差分析，差异不显著(P＞0.05);用药2个疗程后，试验组的减卵率为47%，与对照组结果进行方差分析，差异显著(P＜0.05)。

表3 中药添加剂对猪肠道寄生虫虫卵的影响

3 讨论

淋巴细胞与机体的免疫有极密切的关系，可分为T淋巴细胞和B淋巴细胞，B细胞可转变为浆细胞，抗体主要是由浆细胞合成并分泌到血浆中的。T细胞本身虽不直接产生抗体，但它可与B细胞合作产生抗体。T细胞是进行细胞免疫应答的主要功能细胞，是衡量淋巴细胞在外来因子刺激下增殖程度的一个重要指标。T细胞在接触抗原前是静止的，一旦受到抗原刺激，即会产生免疫应答反应。T淋巴细胞是体内主要的免疫活性细胞，在胸腺中发育成熟以后经血液、淋巴循环运行定居于外周免疫器官，发挥免疫细胞的功能，以PHA作为促分裂因子来检测淋巴细胞的转化功能，其转化率的高低常作为衡量机体免疫水平的指标，T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率越高，意味着淋巴细胞在外来因子的刺激下增殖反应越强，机体的细胞免疫能力越强[4-5]。本试验淋巴细胞转化率的测定结果显示中药添加剂使用2个疗程后，可显著改善断奶仔猪的淋巴细胞转化率(P＜0.05)，能显著提高机体的细胞免疫功能。

马玉芳等[6]在基础日粮中添加2种不同精制的中药饲料添加剂，发现中药添加剂能改善断奶仔猪生长性能，并能促进免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)、补体(C3、C4)和白细胞介素-2的生成，增强机体免疫功能[7]。本试验免疫力影响结果显示1个疗程后，试验组的猪瘟和蓝耳病抗体检测合格率比对照组均提高了3%(P＞0.05)，2个疗程后试验组合格率比对照组分别提高了17%(P＜0.05)和19%(P＜0.05)，充分说明本中药添加剂能提高断奶仔猪免疫力。

中药不仅可以直接通过其药理作用对肠道内寄生虫产生作用，抑制病原寄生虫的发育，还可通过其综合作用对寄生虫产生驱虫效果，调节机体的免疫功能，产生非特异性免疫，增强其抗病能力，配以致泻药，排出虫体，再配以健脾胃药调理脾胃，从而达到消除病原及其对组织细胞的损伤，恢复机体的正常生理功能[8]。本试验中粪便虫卵计数结果显示，用药1个疗程后试验组的减卵率为1%(P＞0.05)，用药2个疗程后试验组的减卵率为47%(P＜0.05)，说明本研究应用的中草药添加剂具有一定的抑制寄生虫虫卵的作用。

[1]陈 静，朴钟云，刘显军.关于我国中草药饲料添加剂安全性的评价与建议[J].中国畜牧杂志，2011，47(16):1-5.

[2]杨希国，张秀英.中草药对畜禽免疫药理作用的研究进展[J].中国兽药杂志，2003，37(9):51-54.

[3]樊春波，张又荣，吴建华，等.一种复方中草药添加剂对断奶仔猪免疫机能的影响[J].中国兽药杂志，2010，44(3):24-27.

[4]殷 超，陈 亮，王 勇，等.复方中药制剂对仔猪免疫机能及消化酶活性的影响[J].畜牧与兽医，2010，42(11):56-59.

[5]何正义，李福宝，吴翠娟，等.中药制剂对猪T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率的影响[J].动物医学进展，2008，29(12):20-22.

[6]马玉芳，刘建成，黄一帆，等.中药饲料添加剂对仔猪生长性能和免疫功能的影响[J].福建农林大学学报(自然科学版)，2003，32(4):496-499.

[7]张 鑫，王爱国，姜天团，等.中草药添加剂及不同饲料状态对早期断奶仔猪生产性能的影响[J].2010，46(23):60-63.

[8]张志远，汪德刚，韩 立.中药抗动物寄生虫病的研究进展[J].河南畜牧兽医，2001，21(8):10-11.