HPLC法测定地昔尼尔含量及有关物质

李 进，张德臣

(山东静远化学有限公司，济南 250100)

地昔尼尔最早是由瑞士Ciba-Geigy公司(现为诺华公司)在1994年第八届国际农药化学会议披露的新型氰基嘧啶类杀虫剂，商品名为丙虫啶。该产品通过干扰昆虫表皮形成来达到杀虫的目的。地昔尼尔的抗害虫原理，在欧洲专利GB2449746A中有详细阐述。地昔尼尔的起效方式主要是通过喷洒在动物的体表起作用。虽然该药市场占有率很高，但采用HPLC法对其质量进行控制的方法尚无报道。本研究采用HPLC法对其有关物质及含量进行了测定[1]。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪，包括LC-10ATVP泵、SPD-10AVP紫外检测器及LC-solutions色谱工作站;FA2204B电子天平(万分之一);地昔尼尔原料(山东静远化学有限公司，批号:091001、091002、091003);地昔尼尔对照品(百灵威科技有限公司);色谱甲醇(山东禹王实业有限公司化工分公司);双蒸过滤水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 phenomenex luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇 -水(30 ∶70)，流速1.0 mL/min，检测波长269 nm;进样量20 μL，柱温25 ℃。

2.2 检测限及定量限试验 取地昔尼尔对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL约含0.05 mg的溶液，取上述溶液，用流动相作为溶剂，并采用逐级稀释的方法，连续进样，最终信噪比(S/N)约为3的浓度为0.1 μg/mL，信噪比(S/N)约为10的浓度为0.3 μg/mL。因此，本品的检测限约为2 ng，定量限约为6 ng。

2.3 专属性试验 取地昔尼尔原料适量，分别进行酸、碱、氧化、高温、光照破坏试验。试验结果表明:本品在酸性及碱性条件下稳定性较差，高温、光照及氧化条件下稳定性较好，各降解的杂质均能与主峰很好的分离;取流动相进样分析，色谱图如图1所示，由图1可知溶剂不干扰本品有关物质测定，该方法专属性良好。

图1 空白溶剂HPLC图谱

2.4 系统适用性试验 取地昔尼尔原料适量加甲醇溶解并稀释制成每1 mL约含0.1 mg的溶液，作为供试液。取该供试液20 μL进样分析，色谱图如图2所示，由图2可知，本品的理论塔板数为7534，主峰与最邻近杂质峰的分离度为8.838，因此，该方法系统适用性良好。

图2 系统适用性HPLC图谱

2.5 线性试验与范围 取地昔尼尔对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含0.05 mg的溶液，分别取该溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为各浓度供试液。取各供试液进样分析，试验结果如表1所示。用峰面积对浓度进行线性回归，线性回归图及线性回归方程如图3所示。该方法测定本品含量，浓度在1.01～20.16 μg/mL范围内，线性关系良好。

表1 线性试验结果

图3 标准曲线

2.6 重复性试验 取线性试验项下中间浓度的供试液，进样分析，连续进样6次，试验结果如表2所示。试验结果表明，该方法测定本品含量，重复性良好。

2.7 溶液稳定性试验 取地昔尼尔原料适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含0.1 mg的溶液，取1.0 mL加流动相稀释至10 mL，作为供试液。将该供试液在室温下放置8 h，分别在0、1、2、4、6、8 h 时取样20 μL注入液相色谱仪分析，试验结果如表3所示。试验结果表明，本品含量测定供试液，在室温下8 h之内，性质基本稳定。

2.8 中间精密度 取地昔尼尔原料适量，换不同的试验人员对其进行含量测定，试验结果如表4所示。试验结果表明，该方法测定本品含量，中间精密度良好。

表2 重复性试验结果

表3 稳定性试验结果

表4 中间精密度试验结果

2.9 回收率 精密称取地昔尼尔原料约20、25、30 mg各三份，加甲醇溶解并稀释至50 mL，作为供试品贮备液。取地昔尼尔对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照贮备液。精密移取各供试品贮备液1.0 mL至100 mL量瓶中，分别加入对照贮备液0.8、1.0、1.2 mL 各三份，作为80%、100%、120%组供试液;另取地昔尼尔对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含0.1 mg的溶液，取1.0 mL加流动相稀释至10 mL，作为对照品溶液。取各供试液及对照品溶液20 μL进样分析，试验结果如表5所示。试验结果表明，该方法测定本品含量，回收率良好。

表5 回收率试验结果

2.10 耐用性 分别换用不同品牌的色谱柱对本品进行测定，除保留时间略有不同外，测定结果没有显著差异，该方法耐用性良好。

2.11 有关物质测定 取地昔尼尔原料三批样品，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含1.0 mg的溶液，取该溶液1.0 mL，加流动相稀释至10 mL，作为供试液;取该供试液20 μL进样分析，按面积归一法计算本品的有关物质，试验结果如表6所示。

表6 有关物质测定结果

2.12 含量测定 取地昔尼尔原料三批样品，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含0.1 mg的溶液，取该溶液1.0 mL，加流动相稀释至10 mL，作为供试品溶液;取各供试品溶液20 μL注入液相色谱仪分析，记录色谱图如图4所示。另取对照品同法测定，按外标法以峰面积计算本品含量，试验结果如表7所示。

表7 含量测定结果

图4 含量测定HPLC图谱

3 讨论与小结

3.1 波长的选择 地昔尼尔原料在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，扫描结果显示本品的最大吸收波长为269 nm，因此选择该波长作为本品含量测定的检查波长。对于有关物质的测定，采用二极管阵列进行全波长测定后，最终确定选用269 nm作为有关物质的测定波长。

3.2 流动相的选择 地昔尼尔原料的测定，通过调整甲醇与水的比例，比较利弊，选择了甲醇 ∶水(30∶70)，在适当的范围内调整该比例不会对测定结果产生显著的影响[1]。不同比例的流动相测定结果如表8所示。

表8 不同比例流动相对样品含量的测定结果

3.3 等度、梯度对分离的影响 通过采用梯度分离后，本品的杂质数量及分离度与等度洗脱比较，没有显著的差异，因此，选择更为稳定的等度洗脱进行检测。

3.4 柱温对分离的影响 柱温在25～30℃范围内，测定结果不会有显著的变化。不同温度的测定结果如表9所示。

表9 柱温对样品含量测定的影响

3.5 小结 综上所述，该方法适用于地昔尼尔的有关物质及含量测定，各方法学验证结果均符合规定。该方法的建立，以期为地昔尼尔的质量控制及标准建立提供依据。

[1]孙毓庆，胡育筑.液相色谱溶剂系统的选择与优化[M].北京:化学工业出版社，2007:4.