HPLC测定郁舒颗粒芍药内酯苷和芍药苷的含量

惠婷婷 夏忠庭 张兰兰 周水平 天津中医药大学（天津300193）

郁舒颗粒由白芍、贯叶金丝桃等8味中药组成，具有补益心肾、解郁安神的作用。方中君药为白芍，具有养血调经，敛阴收汗，柔肝止痛，平抑肝阳的功效［1］。现代药理研究表明，白芍中含有多种单萜苷类成分，且这些成分均有药理活性［2］，其中白芍的主要成分芍药内酯苷与芍药苷具有明显的抗抑郁作用［3，4］。本实验采用HPLC法同时测定了郁舒颗粒中的两种主要成分芍药苷和芍药内酯苷，以期为建立该制剂科学合理的质量控制方法提供依据。

1 仪器与试药 Waters e2695型高效液相色谱单元，配Waters 2489型紫外检测器，芍药苷（中国药品生物制品检定所，批号110736－200630）、芍药内酯苷购自天津一方科技有限公司（纯度98.5%，供含量测定使用），郁舒颗粒（批号201109120、批号201110130、批号201109126）天津天士力制药股份有限公司提供，乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB－C18（4.6×250mm，5μm）；流动相采用二元体系，A为乙腈，B为0.1%磷酸溶液，梯度洗脱程序为0～20min，12%A～16%A；20～26min，16%～16%；流速：1mL／min；检测波长：203nm；柱温：30℃。在该色谱条件下，芍药内酯苷、芍药苷与其他成分有较好的分离。

3 方法与结果 3.1 供试品溶液的制备 取郁舒颗粒0.18g，精密称定，于具塞锥形瓶中，精密加50%乙醇25mL，称定重量，超声处理30min，放冷后，再称定重量，用50%乙醇补足失重，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，即得。

3.2 混合对照品溶液的制备 精密称取对照品芍药内酯苷7.50mg，芍药苷9.39mg分别于10mL容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取对照品溶液芍药内酯苷2mL、芍药苷4mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.060mg／mL芍药内酯苷、0.151mg／mL芍药苷混合对照品溶液。

3.3 阴性供试品溶液 取按处方比例及制备工艺制备不含白芍的阴性对照样品，照“3.1”项下操作，同法制成阴性对照溶液。

3.4 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液4，6，8，10，12，15μL，在上述色谱条件下分别进样，测定峰面积，以峰面积积分值（A）为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标进行线性回归，计算芍药内酯苷回归方程：Y＝1193X＋31.584，r＝0.9998，芍药苷的回归方程：Y＝1309.7X＋113.03，r＝0.9993，表明芍药内酯苷和芍药苷分别在0.240～0.900μg，0.601～2.253μg范围内线性关系良好。

3.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，重复进样6次，每次10μL，测定峰面积。计算芍药内酯苷、芍药苷峰面积的 RSD分别为0.97%（n＝6），0.88%（n＝6），表明精密度良好。

3.6 重复性试验 取同一批号样品精密称取6份，按上述方法与条件制备、测定。结果芍药内酯苷和芍药苷峰面积的RSD分别为1.72%，1.78%。结果表明本测定方法重复性良好。

3.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别在配制后0，2，4，6，12，24h各进样10μl，记录色谱图。计算样品中芍药内酯苷、芍药苷峰面积的RSD分别为0.52%（n＝6），0.49%（n＝6），说明该供试品溶液在24h内保持稳定。

3.8 加样回收率试验 取样品6份各90mg，精密称定，分别精密加入一定量的芍药内酯苷、芍药苷混合对照品溶液（含芍药内酯苷0.75mg、芍药苷1.88 mg），制备供试品溶液，测定各成分峰面积，计算回收率。结果芍药内酯苷的平均回收率为101.35%，RSD为2.63%；芍药苷的平均回收率为100.34%，RSD为2.81%。

3.9 样品测定 测定不同生产批号的三批样品，按上述含量测定方法操作，配制样品，测定峰面积，测定含量，结果见表1。

表1 样品含量测定结果（mg·g－1，n＝3）

4 讨 论 4.1 提取溶剂及提取时间的选择本实验考察了95%乙醇、100%甲醇、50%乙醇、50%甲醇及纯水5种溶剂的提取效果，50%乙醇溶液效果最好；进而考察了分别用10mL、25mL、50mL50%乙醇提取的效果，结果表明50%乙醇25mL提取时，样品中待测指标成分已提取较完全，从节省溶剂的角度考虑，选择25mL50%乙醇提取。另外，本实验考察了加热回流提取与超声提取效果，两者相差不大。超声提取处理方法简单、操作简便，固选择超声提取。

4.2 白芍是郁舒颗粒的君药 含有多种单萜苷类成分，且这些成分均有药理活性［2］，其中芍药内酯苷与芍药苷具有明显的抗抑郁作用［3，4］，故测定这两种成分，使其比仅单一测定芍药苷更能有效控制其质量。本实验所建方法简单易行、重现性好，可同时测定芍药苷、芍药内酯苷两种有效成分，为郁舒颗粒的质量控制提供了一种新方法。

［1］Chen L，Qi J，Chang Y，et al.Identification and determination of the major constituents in Traditional Chinese Medicinal formula Danggui－Shaoyao－San by HPLC – DAD –ESI－MS／MS［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical A－nalysis，2009，50（2）：127－137.

［2］李雪晴，王 超，文爱东.HPLC法测定益胃颗粒中芍药苷的含量［J］.陕西中医，2010（06）：737－738.

［3］Mao Q Q，Ip S P，Ko K M，et al.Effects of peony glycosides on mice exposed to chronic unpredictable stress：Further evidence for antidepressant－like activity［J］.Journal of Ethnopharmacology，2009，124（2）：316－320.

［4］崔广智.芍药苷抗抑郁作用的实验研究［J］.现代药物与临床，2009（04）：231－233.