高效液相色谱法测定小儿清热口服液中绿原酸的含量

王新晓 卢建峰 河南省叶县中医院（河南叶县467200）

小儿清热口服液是本院主任中医师宋耀民近65年行医之验方，为医院制剂室生产的院内制剂，由金银花、青蒿、薄荷、连翘、冰片5味药材组成。临床上对小儿高热效果明显，为了控制其质量，本文采用了高效液相色谱法对绿原酸进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药 采用美国Waters510高效液相谱泵；Waters490E检测仪；Waters745数据处理机。绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号110753－200608。各种药材均经漯河市药检所中药鉴定专家吕斌教授鉴定。所用试剂均为分析纯。

2 绿原酸的含量测定 2.1色谱条件 YWGC18柱（4.0mm×150mm，10μm）；流动相甲醇－水－四氢呋喃－冰醋酸（2.5：97：5：1.5）；流速1.5mm·min－1；检测波长327nm；灵敏度0.05AUFS；纸速0.1mm·min－1。

2.2 绿原酸对照品溶液的配制 精密称取绿原酸对照品10.1mg，置10mL容量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得Ⅰ号液。精密量取Ⅰ号液1mL置10mL容量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得Ⅱ号液。

2.3 供试样品液的配制 精密量取样品试液1mL，置50mL容量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.4 阴性液的配制 取除金银花外的其余药材，按制剂工艺制成阴性样品，并按样品供试液方法制成阴性药液，再精密量取阴性药液1mL，置50mL容量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.5 药材液的配制 精密称取药材0.15g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀即得。

2.6 标准曲线的绘制 精密量取绿原酸对照品Ⅱ号溶液2、4、5、6、8μl进样测定，以绿原酸进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘图。其回归方程为：Y＝781483.90，X－15316.87，r＝0.9999，绿原酸标准品在0.201～0.807μg与峰面积有良好的线性关系。

2.7 精密度试验 按照测定方法重复进样5次，绿原酸峰面积积分值相对标准偏差RSD＝1.33%。

2.8 重现性试验 按照测定方法重复测定5份样品，绿原酸含量的相对标准偏差RSD＝0.4%

表1 小儿清热口服液中绿原酸的回收率测定结果

2.9 加样回收率试验 精密量取5份样品（批号：110618）各0.5mL，置50mL容量瓶中，精密吸取各样品液，分别精密加入绿原酸对照品Ⅱ号溶液0.90、1.09、1.00、1.04、1.00mL，用50%甲醇定容至刻度，摇匀即得。按上述色谱条件测定，以下式计算回收率，结果如表1结果表明，本方法具有良好的回收率。

2.10 样品测定 精密量取样品液10μL进样，依照上述色谱条件进行含量测定，结果见表2。

表2 绿原酸含量测定结果

3 结 论 3.1 绿原酸的HPLC的含量测定中曾用甲醇－水－乙腈－冰醋酸（3∶97∶12∶3）为流动相

但在测定过程中发现样品分离不好，绿原酸峰拖尾现象比较严重，故调整流动相中各组分比例，把乙腈改为四氢呋喃，分离效果良好。

3.2 试验中绿原酸的含量测定方法结果较好，与其它成分均可基线分离。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：205－206.

［2］韩长柏，王静竹.黄栀花口服液质量标准研究［J］.中药新药与临床药理，1996，（7）4：34.

［3］康庭国.中成药薄层色谱鉴别［M］.北京：人民卫生出版社，1995：142.

［4］孙 莹，吕 洁.药物分析［M］.北京：人民卫生出版社，2010：81－85.