小儿支原体肺炎190例肺炎支原体DNA与超敏C反应蛋白检测及其应用价值

湖北省咸宁市中心医院儿科（咸宁437100）

罗剑红

急性呼吸道感染是全世界儿童最常见的疾病之一，肺炎是发展中国家儿童死亡的首要原因，而肺炎支原体（Mycoplas ma pneu moniae，MP）是小儿时期感染性肺炎的重要病原体之一。肺炎支原体感染常年发病，最常见累及呼吸道，但是也可以使中枢神经系统受累，病情重，如不及时治疗，预后差。肺炎支原体临床表现缺乏特异性，常有误诊。我院于2007年1月至2009年3月对190例支原体肺炎（MPP）患儿进行肺炎支原体DNA（MP-DNA）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）检测，同时与81例健康儿童进行hs-CRP检测对比，现将结果分析报告如下。

资料与方法

1 研究对象 本组选择在我科住院治疗并诊断为MPP者190例，其中男113例，女77例，年龄1月至12岁，所有患儿均符合国家卫生部小儿支原体肺炎诊断标准［1］。任意抽取81例健康儿童作为对照组，其中男49例，女32例，年龄2月至13岁。两组在年龄、性别构成上经统计学处理无显著性差异（P＞0.05），具有可以比性。

2 MP-DNA检测 患儿入院当日或次日以无菌咽拭子擦拭咽后壁，避免触碰舌面及口唇，于盛有1 ml生理盐水EP管搅动并挤压管壁尽力挤干。咽拭液装冰盒送至-80oC冰箱保存，留做PCR。应用美国Stratagene公司生产的Mx3005P型荧光定量PCR仪检测 MP-DNA浓度，＞1.00×103copies／mL为阳性，试剂盒由深圳匹基生物有限公司生产。

3 hs-CRP检测 190例MPP患儿和81例健康对照儿童均静脉采血2 ml置于干燥促凝试管内送检，采用日本Oly mpus3700全自动生化分析仪和日本电化生研株式会社提供的hs-CRP试剂进行检测，正常值范围为0～3 mg／L。

4 统计学处理 本组数据均采用SPSS11.0软件系统进行处理，以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为有显著性差异，P＜0.01为有极显著性差异。

结 果

1 MP-DNA的检测结果 见表1。A组91例，MP-DNA浓度为1.00×103～1.00×104；B组69例，MP-DNA浓度为1.00×104～1.00×105；C组30例，MP-DNA浓度＞1.00×105；MP-DNA浓度在1.00×103～1.00×104者最多，而 MP-DNA浓度＞1.00×105者最少。

表1 190例支原体肺炎患儿MP-DNA浓度

2 hs-CRP的检测结果 见表2。hs-CRP浓度及增高率均以C组最高，分别达到47.2±18.2 mg／L和100%。与对照组比较，A、B、C三组的增高hs-CRP浓度和增高率均有极显著性差异（P＜0.01）。

表2 不同MP-DNA浓度组患儿与对照组hs-CRP检测增高例数、浓度和增高率

讨 论

MPP是儿童和青少年时期常见的肺炎之一，由MP感染引起，约有10%～20%的肺炎病例由肺炎支原体引起，且近年有逐渐增多的趋势［2］。其临床常累及呼吸道，出现持续性咳嗽、咽炎和气管支气管炎，表现无特异性，早期快速诊断困难。目前，MPP诊断的新指标层出不穷，但是尚无标准的诊断方法。MP是呼吸道感染常见的致病菌，是介于细菌和病毒之间的能独立生活的病原微生物中最小者。传统的肺炎支原体分离培养及抗体测定费时、繁琐、培养阳性率低，不利于肺炎支原体感染的早期快速诊断［3］。采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术检测痰、血标本可快速、敏感、准确地定量检测标本中 MP-DNA，可了解MP在患儿体内感染和复制情况［4］。文献报道，肺炎支原体PCR拷贝数越大，越能支持MP感染的诊断，并常提示病情越重［5］。

C-反应蛋白在1930年由Tillet和Francis发现，他们观察到一些急性病人的血清能和肺炎链球菌的荚膜C-多糖物质起沉淀反应，1941年证实血清中造成沉淀反应的是一种蛋白质，称之为C-反应蛋白（CRP）。人CRP的基因序列在1985年被查明，属于五球体蛋白Oligo meric钙结合蛋白，分子量约120k D，由5个（每个含206个氨基酸）相同单体以共价键结合为环状五球体。CRP为急性时相反应蛋白之一，由肝脏合成，在炎症或急性组织损伤6～8h内开始升高，24～48h达到高峰，比正常值高几百倍甚至上千倍。经积极、合理治疗后，3～7d迅速降至正常，CRP的水平与组织损伤后修复的程度有密切关系，因此CRP可作为感染性疾病诊断及疗效判断的指标［6］。临床实验室常规测定CRP的浓度值是应用于检测组织损伤和急性炎症，检测的范围一般为5～200 mg／L，传统的分析方法缺乏足够的敏感性。近年来采用乳胶增强免疫比浊法技术大大提高了分析灵敏度，能应用于全自动生化分析仪，检测低限为0.10 mg／L，在低浓度CRP（如0.15～10 mg／L）测定范围内有很高的准确度。用这种高灵敏度方法测定的CRP称为高敏感或超敏感CRP，简称超敏CRP（hs-CRP）。hs-CRP并不是一种新的CRP，而是根据测定方法更敏感命名。

健康人血浆中hs-CRP含量甚微（＜10 mg／L），而在炎症或急性组织损伤后，hs CRP合成则在4～6h内迅速增加，36～50h达到高峰，峰值可为正常值的100～1000倍，其半衰期较短4～6 h。而且hs-CRP的水平与组织损伤后修复的程度有密切关系，也不受性别、年龄、贫血、高球蛋白血症等因素的影响。即使患儿机体反应低下，常规检查（如WBC）正常时，hs-CRP亦可呈阳性，并随着感染的加重而升高，因此它优于其他急性期的反应物质［7］。Hs-CRP的检测对于临床上白细胞不高或免疫功能低下的肺炎患者其诊断价值更高，尤其是小儿和老年人。小儿支原体肺炎急性期血清hs-CRP升高，且出现时间明显比支原体抗体要早，恢复期逐渐下降。虽然hs-CRP升高水平与感染程度并不一定成比例，但微量hs-CRP水平的升高，也可与较严重的临床情况相联系［8］。这些研究说明，超敏C反应蛋白可以作为鉴别感染严重程度的指标。

在本研究中，MP-DNA拷贝数越高组，hs-CRP浓度越高，＞3 mg／L者越多，呈正相关。说明hs-CRP可以作为肺炎支原体肺炎的一个病情评估指标，而且具有灵敏性高的特点。联合肺炎支原体DNA和超敏C反应蛋白的检测，可以早期较为正确地诊断及评估小儿肺炎支原体肺炎，为治疗提供帮助。

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［4］吴宏图，单春明，周杨杨.MP-DNA荧光定量聚合酶链反应检测在儿童肺炎支原体肺炎中的诊断价值［J］.陕西医学杂志，2011，40（1）：50-52.

［5］Dorigo-Zets ma JW，Zaat SA，Vriesema AJ，etal.Demonstration by a nested PCR for Mycoplas ma pneu moniae that M.Pneu moniae load in the throat is higher in patients hosp italised for M.Pneu moniae infection than in non-hospitalised subjects［J］.J Med Microbiol，1999，48（12）：1115-1122.

［6］Jaye DL，Waites KB.Clinical app lications of C-reactive protein in pediatrics［J］.Pediatr Infect Dis，1997，16（8）：735-747.

［7］Sorensen MG，Henriksen K，Schaller S，etal.Biochemical mar kers in preclinical models of osteoporosis［J］.Biomar kers，2007，12（2）：266-286.

［8］Pizzini C，Mussap M，Plebani M，etal.C-reactive protein and serum amyloid a protein in neonatal infections［J］.Scand J Infect Dis，2000，32（2）：229-235.