重组人表皮生长因子用于大鼠Ⅲ期压疮模型的实验研究1）

压疮是临床医疗及护理工作的难题之一。据统计，美国每年有超过100万压疮病例，在中国也一直是受到临床工作者普遍关注的医疗及护理问题。一旦发生不仅给病人带来痛苦，而且Ⅲ期压疮常经久不愈，出现严重感染、全身衰竭甚至危及病人生命[1]。压疮的发生除了加重病人的病情和医护人员的工作量，也增加了病人及卫生机构的经济负担，造成医疗资源的浪费。本实验通过在大鼠Ⅲ期压疮模型上使用重组人表皮生长因 子 （recombinant human epidermal growth factor，rhEGF）来观察rhEGF对Ⅲ期压疮溃疡的疗效，为临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康成年SD大鼠32只，雄性，体重200g～300g，购自浙江大学实验动物中心。

1.1.2 试剂与材料 圆片形磁铁（直径25mm，厚3mm）和圆环形铁片（外径25 mm，内径8mm，厚1mm）。经测量磁片表面的磁通量约为1 500高斯。所有铁片在移植前均高压灭菌并温箱（70℃，2h）烤干。磁通量的选择是根据诱导溃疡的流体静力压推导出来的，研究表明，当外加压力超过局部毛细血管的压力12mmHg（1mmHg＝0.133kPa）～32 mmHg时，就可诱导溃疡，而外加压力为50mmHg左右最合适[2]。rhEGF（商品名：金因肽，每支3×104U，深圳市华生元基因工程发展有限公司生产）；灭菌凡士林纱布（华北德威医用敷料有限公司生产，规格10cm×20cm）。

1.2 方法

1.2.1 大鼠Ⅲ期压疮动物模型的建立 健康雄性SD大鼠32只，体重200g～300g，分笼喂养，房间温度保持在24℃左右。湿度保持在50%左右，明暗周期12h，自由饮水和进食，适应性饲养1周。实验前8h禁食和禁水，实验当日称体重，用10%水合氯醛（300mg／kg）腹腔注射麻醉后，在其背部正中线做一深至筋膜的切口，钝性分离，将磁片（直径1 3mm、厚2mm、表面磁通量达1500高斯）植入背部皮下，体外采用磁铁间歇性施加压力。外源磁片与体内移植磁片相互产生吸引，从而对皮肤产生压力，造成局部皮肤缺血，每次缺血2h后，再将外源磁片拿下，让局部血流恢复30min，如此进行一个循环。每只大鼠每日进行3个连续的循环，连续进行4 d。以皮肤变黑、变硬及针刺不出血作为判断Ⅲ期压疮的标准[3]。期间每只大鼠单笼饲养，自由饮水与进食，切口喷洒抗生素溶液预防感染。

1.2.2 实验动物分组 将动物模型随机分为对照组和实验组，每组16只。

1.2.3 治疗方法 两组大鼠单笼喂养，换药时均先用1%碘伏清创，再以无菌生理盐水棉球擦洗创面，实验组用重组人表皮生长因子溶液均匀喷洒创面，每次400U／cm2；对照组用无菌生理盐水均匀喷洒创面，两组均采用灭菌凡士林纱布外敷，外加无菌纱布包扎固定。每天换药1次，观察溃疡面愈合情况。

1.2.4 溃疡愈合时间及愈合率的观察

在压疮成模当天及治疗后的第3天、第7天、第10天、第14天用数码相机拍下缺损，记录愈合时间（每只鼠溃疡面积愈合一半需要的时间）及愈合面积（原始溃疡面积－剩余未愈合的面积），计算溃疡愈合率（溃疡愈合率＝溃疡愈合面积／原溃疡面积）。分别于治疗后的第3天、第7天、第10天、第14天取创缘组织，经10%甲醛固定后进行苏木精伊红（HE）染色，观察创面肉芽组织生长及再上皮化，评价创面愈合效果。

1.2.5 统计学分析 所有实验数据以均数±标准差（±s）表示，采用SPSS11.0软件进行t检验。

2 结果

2.1 创面大体观察和组织学观察 实验组大鼠创面渗出液较少，肉芽组织生长迅速，色泽鲜艳，呈淡红色，切割后出血明显。伤后第3天创面已明显收缩，第14天已基本愈合。对照组创面愈合相对缓慢，肉芽生长相对迟缓，色泽稍暗，伤后第7天仅愈合近半，第14天仍有部分未愈。HE染色切片，实验组创面早中期成纤维细胞、炎症细胞及毛细血管数量明显多于对照组，所有动物创面均未见明显渗出和感染迹象。

2.2 两组创面动态愈合率及愈合时间比较（见表1、表2）

3 讨论

国内外大量研究已经证明，生长因子在细胞增殖、分化、组织修复和溃疡愈合中起着重要作用，而上皮细胞的再生是溃疡创面愈合的基本条件[4－7]。生长因子是一类具有促进细胞增殖分化及伤口血管化等生物活性的多肽或蛋白质，对创伤修复起着重要的调控作用。重组人表皮生长因子是由53个氨基酸组成的相对分子量为6 045的小分子多肽。rhEGF可促进皮肤与黏膜创面组织修复过程中的脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）和羟脯氨酸的合成，加速创面肉芽组织生成和上皮细胞增殖，从而缩短创面的愈合时间。湿性环境愈合理论指出，在敷料与创面之间造成湿润环境可促进伤口愈合。大量研究证实，干燥可加重组织细胞损伤，湿润有利于创面修复[8]。金因肽有rhEGF的活性成分，辅以10%的甘油和甘露醇为保护剂，对创面有较好的湿润作用。凡士林纱布覆盖于创面上，具有抗感染、保湿作用，可延长rhEGF作用时间，减少换药次数。但应注意：创面用碘伏消毒后，须用无菌生理盐水棉球擦洗后再用药，因乙醇、碘酊会使嗜酸粒细胞趋化因子（ECF）变性而活性减低；创面感染时应加用抗生素；对于存在脓液及坏死组织的创面，必须彻底清创，以便使创面与药物很好接触。

表1 两组溃疡创面动态愈合率比较（±s）%

表1 两组溃疡创面动态愈合率比较（±s）%

组别 只数 第3天 第7天 第10天 第14天实验组 16 47.23±28.42 70.16±22.34 82.34±23.41 98.53±12.36对照组 16 33.58±26.36 48.37±26.40 67.76±25.12 88.45±13.26 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表2 两组溃疡创面愈合时间比较（±s） d

表2 两组溃疡创面愈合时间比较（±s） d

组别 只数 愈合时间实验组16 3.52±2.34对照组 16 7.41±3.86注：P＜0.05。

本次实验研究结果表明，rhEGF可促进Ⅲ期压疮溃疡面肉芽组织的形成和再上皮化，明显缩短溃疡愈合时间，加快溃疡面积缩小速度，促进溃疡愈合，从而为今后临床应用rhEGF治疗Ⅲ期压疮提供了实验依据。

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