覆盆子提取物祛黄褐斑作用研究

徐冰 张聪恪 王海玉 张炎 李立 陈东方

覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的果实，属药食两用。作为中药具有益肾助阳，固精缩尿的功效。现代药理研究表明，覆盆子具有免疫增强、抗衰老、抗诱变等多种作用［1～3］。覆盆子提取物鞣花酸是其功效成分，鞣花酸具有美白、抗紫外线、促进弹性纤维生成的综合祛斑效果，是皮肤科医学公认可使用的有效美白成分之一。本试验中的受试物是由覆盆子提取物、维生素C和维生素E为原料制成的保健食品。在动物毒性试验已证明其是安全、无毒副作用的前提下，我们对覆盆子祛黄褐斑作用进行了人体试食试验研究。

1 材料与方法

1.1 样品 受试样品由北京某生物科技发展有限公司提供。人群推荐量为2.08 g/d(0.52 g/片，2片/次，2次/d)。

1.2 受试者选择

1.2.1 纳入标准 经体检符合下列条件的自愿受试者。面部淡褐色至深褐色，界限清楚的斑片，通常对称性分布，无炎性表现及鳞屑;无明显自觉症状;主要发生在青春期后，女性多发;病情有一定的季节性，夏重冬轻;无明显内分泌疾病，并排出其他疾病引起的色素沉着。

1.2.2 排除标准 年龄在18岁以下或65岁以上者，妊娠或哺乳期妇女，过敏体质及对本保健食品过敏者;合并有心肝肾和造血系统等严重原发性疾病，精神病患者;嗜酒者或吸烟者;短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者;未按规定服用受试物，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。

1.3 试验设计及分组 采用自身和组间两种对照设计。按受试者的黄褐斑颜色、面积情况随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如户外活动情况、年龄等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。

1.4 样品的剂量和使用方法 试食组服用覆盆子提取物，2片/次，2次/d，服用量为2.08 g/d，连续30 d。对照组采用空白对照。受试者在试食期间停止使用有关养颜祛斑的药物或其他保健品及化妆品。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。

1.5 仪器与试剂 意大利Autolab型全自动生化分析仪、日本CA-500型血球计数仪、美国BM-200尿十项分析仪、美国TH600型X透视仪、美国MAC5000型心电图仪、Syneogy型B超诊断仪。中国科学院地理研究所设计研制，测绘出版社1992年出版《实用标准色卡》(第一版)，生化试剂盒全部由中生公司提供。

1.6 观察指标

1.6.1 安全性指标 包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等一般状况;血、尿、便常规检查;肝、肾功能等生化指标检查;胸透、心电图、腹部B超检查(仅试验前检查一次)

1.6.2 功效性指标 ①颜面部黄褐斑面积大小检测:用标尺测量受试前后整个颜面部黄褐斑的面积(mm2)。②颜面部黄褐斑颜色深浅检测:按照中国科学院地理研究所设计研制，测绘出版社1992年出版的《实用标准色卡》(第一版)中的棕色(Y+M+Bk即黄+品红+黑的叠色)色卡为黄褐斑深浅的判断标准:I度(15、20、5)，II度(30、40、10)，Ⅲ度(40、60、15)。

1.7 数据处理和结果判定

1.7.1 数据处理 对试食前后黄褐斑颜色积分和面积变化进行统计，同时计算有效率。色卡Ⅰ度、Ⅱ度和Ⅲ度分别计分为1分、2分和3分。结果用均值±标准差表示。计量资料用t检验，有效率用χ2检验。

1.7.2 功效判定标准 有效:黄褐斑颜色下降Ⅰ度，面积减少大于10%，且不产生新的黄褐斑。无效:黄褐斑颜色及面积无明显变化。

1.7.3 结果判定 试食组黄褐斑面积平均减少，且≥10%，颜色积分明显下降，自身前后比较及与对照组比较，差别均有显著性，且不产生新的黄褐斑，判定该受试样品具有祛黄褐斑功能。

2 结果

2.1 分组及入选情况 受试者108例，随机分为试食组和对照组，每组各54例，均为女性。其中试食组试食结束时有2例未按规定服用受试物，2例未在规定时间复查;对照组有4例未复查。试食组与对照组各有4例被排除，有效病例共100例，每组50例，病例脱失率均为7.41%。试食组年龄最小30岁，最大65岁，平均(49.80±8.59)岁;对照组年龄27～60岁，平均(48.92±9.42)岁。

2.2 功效观察

2.2.1 黄褐斑颜色深浅变化，见表1。

表1 试食前后黄褐斑颜色深浅度变化()

表1 试食前后黄褐斑颜色深浅度变化()

注:＊＊自身比较P＜0.01，##组间比较P＜0.01

组别 例数 试食前 试食后 差值试食组 50 2.44±0.41 2.24±0.35＊＊## 0.20±0.34##对照组50 2.48±0.36 2.47±0.37 0.01±0.12

2.2.2 黄褐斑面积大小变化，见表2。

表2 试食前后黄褐斑面积大小变化()

表2 试食前后黄褐斑面积大小变化()

注:*自身比较P＜0.05，##组间比较P＜0.01

组别 例数 试食前(mm2) 试食后(mm2) 差值(mm2) 减少百分比(%)试食组 50 5387±2196 4387±1703*##50 5584±1883 5406±1861 177±486 2.89±9.34 1000±840 17.14±10.52对照组

2.2.3 功效判定，见表3。

表3 试食前后功效判定结果(例，%)

由表1、2、3可见，试食组试食后黄褐斑颜色变浅，黄褐斑面积减少，自身比较及与对照组相比差异均有显著性;试食组有效率与对照组比较差异有显著性。

2.3 安全性观察 试食组和对照组受试对象在试验前、后的精神状况、睡眠、饮食、大小便等情况无明显改变。试验过程中所有受试对象均未见不良反应及过敏反应。服用覆盆子提取物1个月，受试者肝功能、肾功能、血液生化等多项安全性指标均未见明显变化。腹部B超、心电图、X线胸部透视试食前试食组和对照组均未见明显异常。

3 讨论

黄褐斑是常见的色素代谢异常性疾病，多发于中青年女性。其产生是由于皮肤表皮基层的黑色素细胞生成的黑色素过多造成。研究发现，酪氨酸酶在黑素合成中起到关键作用［4］。人体内的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下转化为多巴、多巴醌、多巴色素等，最终转变为色素颗粒。在皮肤黄褐斑发生部位，酪氨酸酶活性增强，黑色素细胞活性增强，色素的产生与排泄失去了平衡，最终黑色素过剩聚集表皮细胞内，形成黄褐斑。

覆盆子的功效成分鞣花酸，能降低酪氨酸酶和过氧化氢酶的活性，从而减少黑色素细胞的代谢强度，减少黑色素的生成，而达到祛斑作用。鞣花酸在整个紫外线区域均有较强的吸收作用，可以通过吸收紫外线起防晒或清除自由基的作用。有报道，口服鞣花酸纯品4周后可使受试者皮肤色素沉着得到明显改善，紫外线照射引起的红斑受到抑制［5］。此外，覆盆子含有丰富的类黄酮素和维生素C，能有效抑制黑色素的形成，不但对肌肤有活化和修复功效，还具有美白作用。

覆盆子提取物的人体试食观察结果显示，试食组按要求服用30 d后，黄褐斑面积减少(1000±840)mm2(自身前后比较P＜0.05)，面积减少百分比为(17.14±10.52)%;颜色积分下降(0.20±0.34)分(自身前后比较P＜0.01);且未产生新的黄褐斑。试食组有效34例，有效率68.00%。试食组试食后黄褐斑面积及颜色积分与对照组比较，差异均有显著性(P＜0.01)。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中祛黄褐斑功能判定标准，可以认定该保健食品有祛黄褐斑的作用。

［1］陈坤华，方军，宫斌，等.覆盆子提取成分促进淋巴细胞增殖作用及与环核苷酸的关系.上海免疫学杂志，1995，15(5):302-304.

［2］朱树森，张炳烈，李文彬，等.覆盆子对衰老模型小鼠脑功能的影响.中医药学报，1998，26(4):42-43.

［3］付德润，钟承民，郭伟，等.覆盆子抗诱变作用的实验研究.中国全科医学杂志，1998，1(1):35-37.

［4］García-Molina F，Fenoll LG，Morote JC，et al.Opposite effects of peroxidase in the initial stages of tyrosinase-catalysed melanin biosynthesis.J Biochem Cell Biol，2005，37(6):1179-1196.

［5］Kouichi KASAI，Mineka YOSHIMURA，Takuro KOGA，et al.Effects of oral administration of ellagic acid-rich pomegranate extract on ultraviolet-induced pigmentation in the human skin.J Nutr Sci Vitaminol，2006，52(5):383-388.