唐山地区汉族人群IL-6－572C/G和TNF-α－238A/A基因多态性与脑梗死的关系

刘东芳 张宝琴 张振宇 陈 晖 赵亚婷 张成侠 陈乃耀 王大力 冯志刚 刘艳芬 訾建杰

(河北省唐山市人民医院血液科，河北 唐山 063000)

近年来，脑梗死的发病率有逐年增高的趋势，且发病年龄趋向年轻化，有研究认为是遗传因素和环境因素共同作用的结果〔1〕。白介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α是介导体内炎症反应的重要因子，发挥重要的抗炎作用〔2〕;而IL-6和TNF-α基因位点的多态性可能与脑梗死的发生有相关性。本文拟探讨唐山地区汉族人群中IL-6和TNF-α基因型的分布特点及其与脑梗死的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 随机选取2010年1月至2012年1月我院收治的唐山地区汉族脑梗死患者70例，男44例，女26例，平均年龄(47.33±8.5)岁;符合1995年中华医学会第四届脑血管病会议修订的各类脑血管疾病诊断标准，并经头颅CT检测确诊。排除外伤性、血液性、药物、肿瘤及脑血管畸形等引起的脑梗死，患者无合并心、肝、肾等脏器疾病，无精神性疾病，意识清楚。另选取我院同期门诊体检的健康人群80例为对照组，男56例，女24例;平均年龄(44.93±7.1)岁;两组一般资料比较无统计学差异(P＞0.05)。

1.2 IL-6和TNF-α基因型的检测 抽取肘静脉血5 ml，加入抗凝剂，加入氯仿及无水乙醇提取DNA，采用PCR和限制性片段长度多态性分析IL-6－572C/G和TNF-α－238A/A的基因型，PCR 扩增体系：DNA 模板 1 μl，Taq DNA 聚合酶 1 μl，MgCl22.5 μl，dNTPs 2 μl，上、下游引物各 1 μl，10 倍缓冲液 2.5 μl，补DEPC水收至总体积25 μl。PCR反应程序：预变性94℃5 min;变性：95℃ 35 s，退火温度 54℃，72℃ 35 s，35 个循环;延伸：75℃ 10 min。PCR产物的限制性酶切反应体系为：PCR扩增产物10 μl，10 倍缓冲液 2 μl，限制性内切酶 0.5 μl，补 DEPC收至总体积20 μl，混匀后置37℃水浴箱中消化过夜。PAGE凝胶电泳检测：取酶切产物10 μl与1 μl 10倍上样缓冲液混匀，100 V稳定电压电泳30 min，置凝胶成像系统(UVP，美国)观察拍照。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件行χ2检验。

2 结果

2.1 PCR及酶切产物电泳结果 IL-6基因－572C/G PCR产物长度为195 bp，目的条带单一清晰。扩增产物经特异性限制性内切酶酶切后电泳结果表明：基因型有C/C型，C/G型和G/G型3种。TNF-α －238A/A基因PCR产物长度为147 bp，扩增产物经特异性限制性内切酶酶切后电泳结果表明：基因型有G/A型，G/G型和A/A型3种。

2.2 IL-6－572C/G基因位点多态性与脑梗死的相关性 脑梗死组IL-6－572C/G基因型分布频率和等位基因频率均与对照组有显著性差异(χ2=5.31，P＜0.05)。见表1。

2.3 TNF-α－238A/A基因位点多态性与脑梗死的相关性脑梗死组TNF-α－238A/A基因型分布频率和等位基因频率均与对照组有显著性差异(χ2=4.88，P＜0.05)。见表2。

表1 两组IL-6－572C/G基因型和等位基因频率的比较〔n(%)〕

表2 两组TNF-α基因型和等位基因频率的比较〔n(%)〕

3 讨论

脑梗死是神经内科常见疾病，Catto〔3〕研究认为基因变异是脑梗死发病的重要因素之一。IL-6是机体重要抗炎因子，可促进其他细胞因子的合成与释放，促进动脉粥样硬化的发生发展。国外研究表明IL-6基因启动子存在基因位点多态性，其基因的变异将导致后续的基因转录和蛋白表达水平存在个体差异，直接影响血清IL-6的浓度;同时也影响不同人群对某种疾病的易感性〔4，5〕。IL-6基因的多态性，将促进IL-6相关疾病的发生发展及转归，但其与脑梗死的相关性目前尚无大量报道。本研究结果表明IL-6基因位点的多态性与脑梗死的发病存在有一定的相关性。

早在2005年，Karahan等〔6〕即报道了 TNF-α －308G/A 基因位点多态性与土耳其人群中脑梗死的发病具有相关性，当TNF-α基因启动子区内308位点的G/A存在多态性变异时，将影响TNF-α的基因转录和蛋白表达，影响血清TNF-α的水平，促进了TNF-α相关性疾病的发生发展。本研究结果亦表明，TNF-α－238A/A基因位点存在多态性，唐山地区人群中TNF-α基因多态性与脑梗死的发生存在一定的相关性。

综上所述，IL-6和TNF-α基因多态性与唐山地区人群脑梗死的发病存在有一定的相关性，但其相关的发病机制尚不清楚，有待进一步深入研究。

1 Zhang Y，Hayes AT Pritchard A，et al.Interleukin-6 promoter polymorphism;risk and pathology of Alzheimer disease〔J〕.Neurosci Lett，2008;362(11)：99-102.

2 张 虹，李彦玲.急性脑梗死患者血清T淋巴细胞亚群、白介素-6及肿瘤坏死因子-α 的研究〔J〕. 实用医学，2004;20(4)：394-5.

3 Catto AJ.Genetic aspects of the hemostatic system in cerebrovascular disease〔J〕.Neurology，2001;57(1)：24-30.

4 Ota N，Nakajima T，Nakszawa I，et al.A nucleotide variant in the promoter region of the interleukin-6 gene associated with decreased bone mineral density〔J〕.J Hum Genet，2001;46(2)：267-72.

5 尤劲松，黄培新，刘茂才，等.脑梗死患者ICAM-1基因K469E及IL-6基因-174G/C多态性研究〔J〕.中国老年学杂志，2007;8(27)：1580-2.

6 Karahan ZC，Deda G，Sopahit T，et al.TNF-α － 309G/A and IL-6－174G/C polymorphisms in the Turkish pediatric stroke patients〔J〕.Thromb Res，2005;115(5)：393-8.