黔产钩藤药材不同采收期及不同加工方法有效成分含量对比研究

王克英郭思妤祝晶姜洪旭欧恒熙兰才武

1、贵州省食品药品检验所，贵州贵阳550004;2、贵州省职业技术学院，贵州金阳550081;3、贵阳医学院硕士研究生，贵州贵阳550004;4、贵州省昌昊发展有限公司，贵州凯里556000

黔产钩藤药材不同采收期及不同加工方法有效成分含量对比研究

王克英1郭思妤2祝晶3姜洪旭3欧恒熙3兰才武4

1、贵州省食品药品检验所，贵州贵阳550004;2、贵州省职业技术学院，贵州金阳550081;3、贵阳医学院硕士研究生，贵州贵阳550004;4、贵州省昌昊发展有限公司，贵州凯里556000

目的:测定不同采收期及不同加工方法黔产钩藤药材中钩藤碱和异钩藤碱的含量，并考察钩藤碱和异钩藤碱在不同采收期的含量变化。方法:采用RP－HPLC法，KromosilC18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱;流动相以甲醇－0．2%氨水溶液(65:35)，流速:1.0mL/min，柱温35℃，进样器温度5℃，检测波长为245nm，结果:不同采收期钩藤药材中钩藤碱和异钩藤碱含量有显著变化。以10月～1月份，采集的样品中钩藤碱和异钩藤碱含量较高;不同加工方法钩藤碱和异钩藤碱含量也有所不同。结论:1．以10月～1月份采集的样品含量较高，符合中国药典规定钩藤药材在秋、冬二季采收。2．阴干和晒干的药材含量较高。为黔产钩藤药材提供了最佳加工方法。

黔产钩藤;HPLC;不同采收期;不同加工方法;含量测定

钩藤(Rhynchophylla)作为我国的传统中药，其带钩茎枝应用历史悠久，主要分布于我国南方地区，贵州道地药材钩藤也为同科同属植物，作为常用的中药材之一，具有清热平肝，熄风定惊的作用。主要用于头痛眩晕、感冒夹惊、惊痫抽搐、妊娠子痫，以及高血压等症［1］。现代研究表明，钩藤的主要有效成分为钩藤总生物碱(Rhynchophylla total alkaloids，RTA)，其中主要是钩藤碱(rhynchophylline)和异钩藤碱(isorhynchophylline)，分别占总碱的28.9%和14.7%，也是钩藤中含量最大的生物碱成分［7］。具有降血压、抗心律失常以及抗血小板聚集和抗血栓形成的作用［3－5］。目前，随着医药科技的发展，由于钩藤的深入开发研究，钩藤的功能效用在不断扩大，己越来越受到人们关注。目前评价钩藤质量优劣的标准，多以钩藤碱和异钩藤碱的含量为指标。由于钩腾药材使用不断扩大，需求量不断上升，药工们可以随时采收药材上市。为了保证药材质量，我们做了不同采收期及不同加工方法的钩藤药材质量对比研究。本实验采取二种药效成分同时考察的方法，对不同生长季节及不同加工方法的钩藤进行评估，为我省钩藤药材的采收及加工炮制方法提供科学依据。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪;美国Waters2695－2996高效液相色谱仪及二极管阵列检测器;Empowrer色谱数据工作站;KQ－500D A型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);实验所使用试剂试药均为分析纯。钩藤碱(纯度为98%)和异钩藤碱(纯度为98%)对照品购自上海原叶生物科技有限公司(批号2010923－2011)。所用钩藤药材均由贵州省昌昊中药发展有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 谱条件与系统适用性试验色谱柱:十八烷基键和硅胶为填冲剂，KromosilC18柱(4.6 mnl×250 mm，5 μm);流动相:甲醇－0.2%氨水溶液(65:35);流速:1.0mL·min－1;柱温:35℃;进样器温度:5℃;钩藤碱及异钩藤碱的检测波长均为245nm;进样量:10μL;理论塔板数按钩藤碱和异钩藤碱峰面积计算应不底于3000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取钩藤碱和异钩藤碱对照品加甲醇制成每1mL含60μg和每1mL含80μg的混合溶液，即得。

2.3 通过质量标准的研究，钩藤碱、异钩藤碱的线性关系考察、精密度实验、重复性实验、稳定性实验、加样回收率实验均符合药典的要求。见图1～2。

图1 钩藤碱和异钩藤碱HPLC色谱图

图2 黔产钩藤药材HPLC色谱图

2.4 样品测定精密取不同采收期及不同加工方法样品粉末(过三号筛)约0.3g，精密称定，加入氯仿:甲醇(5:1)的混合溶剂20mL，冰箱5℃放置过夜，加0.5mL氨水，低温超声40分钟，过滤，用氯仿:甲醇(5:1)的混合溶剂洗涤容器及滤渣，滤液置蒸发皿中，在65℃水浴上挥干，残渣加甲醇定容置3mL容量瓶中，摇匀，微孔滤膜过滤，既得。分别吸取以上供试品溶液与钩藤碱和异钩藤碱混合对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定峰面积，按外标法计算样品中钩藤碱和异钩藤碱的含量之和。结果见表1及表2，所有测定结果均以干燥品计。

表1 不同采收期钩藤碱和异钩藤碱的含量(μg/g)(n=3)

表2 不同加工方法钩藤碱和异钩藤碱的含量(μg/g)(n=3)

烘干(50－60℃)余庆57050620晒干69868766阴干75030780鲜品81020830烘干(50－60℃)凯里45030485晒干952611010阴干949721021鲜品985691054烘干(50－60℃)锦屏25022292晒干34014350阴干37040410鲜品32020340烘干(50－60℃)荔波56921590晒干61031640阴干59844642鲜品58946635

3 讨论

3.1 本实验以春、夏、秋、冬月份钩藤药材为材料，对不同生长季节钩藤药材中的2种有效成分(钩藤碱和异钩藤碱)含量进行了测定。通过各不同生长期的有效成分含量对比研究，可确定钩藤药材最佳采收期。从表3中可以看出不同采收期钩藤药材中钩藤碱和异钩藤碱含量有显著变化。从每一个产地不同采收期钩藤药材来看，基本上都是以10～1月份采集的样品中钩藤碱和异钩藤碱含量较高。可作为最佳采收期，符合中国药典规定钩藤药材在秋、冬二季采收规定。而以3～7月份采集的样品中钩藤碱和异钩藤碱含量较低。通过本课题的研究证明，为确定钩藤药材最佳采期收期提供了科学的依据。

3.2 我们将剑河、凯里、锦屏、荔波、余庆等产地的样品，通过各种不同的加工方法，对钩藤药材有效成分含量进行了对比研究。可以看出各地的样品中钩藤碱和异钩藤碱含量结果从大到小，为鲜品＞阴干＞晒干＞烘干。通过实验证明，钩藤药材在加工炮制时，加热或温度过高致有效成分钩藤碱和异钩藤碱分解，使含量下降，从而导致药效降低。因此，为了钩藤药材采收后，在加工炮制时药材质量不受到影响，采用合理的加工炮制方法是必要的。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典［S］．2010版一部．北京:化学工业出版社，2010:240．

［2］郭星等．HPLC法测定不同产地钩藤中异钩藤碱和钩藤碱的含量［J］．河南中医，2010，30(1)．

［3］仲崇林等．反相高效液相色谱法测定植物钩藤中钩藤碱含量［J］．应用化学，2008，23(9)．

［4］王英锋等．高效液相色谱测定钩藤中钩藤碱异钩藤碱含量［J］．药物分析杂志，1999，19(1):56－57．

［5］梁勇等．钩藤中总生物碱的提取分离研究［J］．中国热带医学，2006，6(1)．

［6］黄卓谦等．钩藤煎煮过程中化学成分变化的研究［J］．西北大学学报(自然科学版)，2008，38(5)．

［7］王盟等．钩藤总生物碱的研究进展［J］．实用医药杂志，2008，25(3)．

R931.4

A

1007－8517(2012)13－0027－02

贵州省中药现代化科技产业研究开发课题，合同编号:黔产合中药字【2010】5039号。

2012.05.02)