流通池法测定尼古丁缓释贴剂的释放度

孙 悦，唐素芳（天津市药品检验所，天津 3 0 0 0 7 0）

流通池法测定尼古丁缓释贴剂的释放度

孙 悦＊，唐素芳（天津市药品检验所，天津 3 0 0 0 7 0）

目的：建立测定尼古丁缓释贴剂中尼古丁释放度的方法。方法：采用流通池法，并与原研厂采用的碟上桨法进行结果比较。流通池法测定条件：释放介质为0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液，流速为4 mL·min－1，层流流动方式；采用高效液相色谱法测定尼古丁的释放度；用模型法零级、一级、Higuchi方程等和相似因子法分别对不同释放介质的释放曲线进行拟合，提取释放参数并进行统计学分析。结果：建立的流通池法与碟上桨法测定结果无显著性差异（P＞0.0 5）。结论：所建立的方法简便、可行，为缓释贴剂释放度测定方法提供了一种新的选择，并可用于相关制剂的质量控制。

流通池法；尼古丁；缓释贴剂；释放度；模型法；相似因子法

流通池法（Flow-through cell method）也曾被称为流池法[1]（Flow-cell method），是有别于桨法、篮法等传统溶出度测定的一种新的溶出测定方法，在《美国药典》（USP）（3 4）、《英国药典》（BP）（2 0 1 1）、《日本药局方》（第十五版）的附录中的溶出度测定方法项下均有收载。目前，透皮缓释贴剂的应用越来越多，而其体外测定方法是在近年来才出现的，方法尚不成熟。《中国药典》[2]现采用碟上桨法，但其在应用上受很大限制，如果溶出介质的量低于5 0 0 mL，就无法应用该法，因为桨的上沿会从溶媒中露出。特别是对于目前的溶出度仪来说，采用碟上桨法后无法自动取样，操作非常复杂。因此，开发一种适合贴剂释放度测定的新方法就显得格外重要。本试验以用于缓解烟瘾的尼古丁缓释贴剂为研究对象，建立了对其进行体外释放度测定的流通池法，与原研厂方法（碟上桨法）测定结果经模型法和相似因子（f2）法[3]比较，结果均一致。

1 仪器与材料

1.1 仪器

CE7 Offline流通池法溶出度仪，包括SOTAX CE7主机、CY7-5 0活塞泵（瑞士Sotax公司）；1 1 0 0型高效液相色谱（HPLC）仪（美国Agilent公司）。

1.2 试药

尼古丁缓释贴剂（批号：0 6 1 9 3 4 5 1 B，规格：每片1 4 mg）、酒石酸尼古丁对照品（批号：0 8 1 1 0 2 6，纯度：1 0 0.0%，以酒石酸尼古丁计）均由中美天津史克制药有限公司提供；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

生物半透膜（上海绿岛生物科技有限公司，截留分子量：1 0 0 0）。

1.3 流通池法溶出度仪试验装置

流通池法溶出度仪有7个流通池；试验中，溶媒贮放瓶中的释放介质经活塞泵从每个流通池的底部注入，与流通池中的样品接触后，从流通池顶端滤过系统回到溶媒贮放瓶中，滤过系统由1个筛网和1片玻璃纤维过滤膜组成。在流通池底部的锥形部中可加入一定量直径1 mm的玻璃珠以改变释放介质的流动状态。流通池结构图见图1。

图1 流通池结构图Fig 1 Structure of flow-through cell

图2 贴剂测定池示图Fig 2 Diagrammatic sketch of patch cell

由于流通池法还没有应用于贴剂测定，所以目前还没有专用的贴剂测定池。本文将用于软膏测定的膏剂测定池略作改动，将圆形池身的直径加大改制，作为贴剂测定池，见图2。

试验时将贴剂剪成直径略小于贴剂测定池直径大小的样品，置于池中，上面用生物半透膜罩住，用箍将其固定，放入流通池片夹位置，即完成。

2 方法与结果

2.1 溶出度的测定

2.1.1 色谱条件。色谱柱为Rainin C18（5 0 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温为4 0℃；流动相为乙腈-水（含0.0 5 5%（W/V）十二烷基磺酸钠、0.0 2%（V/V）二甲基辛胺、0.0 2%（V/V）冰醋酸、0.0 2%（W/V）无水醋酸钠）（2 2∶7 8），流速为1 mL·min－1；检测波长为2 5 4 nm；进样量为5 0 μL。在此色谱条件下，取“2.1.4”项下对照品溶液（1 1 2 μg·mL－1）和“2.1.8”项下2 4 h的溶出液进样分析。结果，尼古丁峰的保留时间为2 min，理论板数约为1 5 6 3，溶媒与贴剂中其他物质不干扰测定，色谱图见图3。

图3 高效液相色谱图A.对照品溶液；B.2 4 h的溶出液；1.尼古丁Fig 3 HPLC chromatograms A.substance control；B.released solution at 2 4 h；1.nicotine

2.1.2 释放介质的选择。原研厂采用的释放介质是0.0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液（pH 2.0），而根据文献[4]显示，皮肤的pH值在5.0左右，呈微酸性，因此本试验先后尝试了水、0.0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液、0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH4.0醋酸盐缓冲液、pH6.8 PBS这6种介质。其中后2种介质使贴剂的背衬层溶解，干扰了测定，故不予考虑。其余4种介质所得结果经方差分析及相似因子计算，结果以0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液为介质所得结果与碟上桨法一致，故选取其作为释放介质。5种释放介质中的溶出曲线见图4。

图4 5种释放介质中尼古丁溶出曲线Fig 4 Release curves of nicotine in 5kinds of medium

2.1.3 贮备液制备。精密称取酒石酸尼古丁对照品适量，置于5 0 mL量瓶中，用0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液（pH 5.0）溶解并稀释定容至刻度，制成1.4 mg·mL－1对照品贮备液。

2.1.4 标准曲线制备。精密量取“2.1.3”项下贮备液适量，置于5 0 mL量瓶中，用0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液稀释至刻度，分别制备成浓度为2 8、5 6、8 4、1 1 2、1 4 0、2 8 0 μg·mL－1的系列对照品溶液，进样5 0 μL。以峰面积（A）对浓度（c）进行回归，结果，标准曲线方程为 A＝5.7 6 33 c－1.5 5 74（r＝0.9 9 99，n＝6）。尼古丁检测浓度线性范围为2 8～2 8 0 μg·mL－1。

2.1.5 加样回收率试验。取尼古丁缓释贴剂，剪碎，称取适量（约含尼古丁2.2 5 mg），共9份，精密称定，分别置于5 0 mL量瓶中，精密加入对照品贮备液3.0、4.0、5.0 mL各3份，加0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液溶解稀释至刻度，摇匀，制备成含对照品相当于检查限度6 0%、8 0%、1 0 0%的样品溶液。用0.4 5 μm微孔滤膜过滤，进样分析，按标准曲线方程测定尼古丁含量，计算上述3个浓度点的平均回收率（n＝3）。结果分别为9 8.9%、9 9.7%、9 9.2%，RSD分别为0.4 9%、0.2 2%、0.3 0%。

2.1.6 稳定性和重复性试验。取“2.1.4”项下浓度为1 4 0 μg·mL－1对照品溶液5 0 μL，分别于0、4、8、1 6、2 4 h进样，测定尼古丁峰的峰面积，计算RSD（n＝5），结果为0.3 8%；再取此对照品溶液，连续进样6次，结果，RSD＝0.1 2%。表明此方法具有良好稳定性和重复性。

2.1.7 释放度测定。采用流通池法闭合系统装置，每次试验取样品6片，置于锥形部装满1 mm玻璃珠（约6.3 g）的流通池内，使溶出介质在流通池内以层流方式流动，释放介质经脱气处理，体积为1 0 0mL，活塞泵流速4mL·min－1，温度3 2.0℃（与皮肤温度接近），启动活塞泵，自释放介质浸过样品时开始计时，分别于0、2、4、8、1 2、2 4 h（与碟上桨法取样时间对应）各取样2 mL，同时补充等温等体积的释放介质，取滤液5 0 μL进行色谱分析。

2.1.8 测定结果。分别采用原研厂碟上桨法（介质是0.0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液）及本文所建立的流通池法对尼古丁缓释贴剂进行测定，其中流通池法采用pH 7.4 PBS、0.0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液、水及0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液（分别用A、B、C、D、E代表上述5种释放介质对应的方法）。累积释放度结果见表1。

表15种方法尼古丁释放度测定结果（%%，n＝6）Tab 1Release rates of nicotine by 5 kinds of methods（%%，n＝6）

2.2 数据拟合

对上述结果分别采用模型法[5]和f2法进行分析，其中，模型法分别采用了缓释制剂常用的零级、一级及Higuchi方程进行拟合，此外，也用Weibull分布方程进行了拟合。结果，拟合优度的顺序由高到低依次为Higuchi方程（r＝0.9 8 0 5）、零级方程（r＝0.9 7 65）、一级方程（r＝0.9 5 73）、Weibull分布方程（r＝0.9 3 2 1）。因此选择Higuchi方程作为模型法使用的方程，Higuchi方程可简化为：F（t）/F∞＝kt1/2。通过Higuchi方程提取参数Td、T50进行方差分析和多重比较检验，结果显示，A、E与B、C、D方法间有极显著性差异（P＜0.0 1），其中原研厂碟上桨法（A）与E法之间无显著性差异（P＞0.0 5），这与f2法的计算结果一致。2种分析方法比较结果见表2（自由度：组间＝4，组内＝2 5）。

3 讨论

目前，进行缓释制剂的释放度评价一般采用2种方法，一是模型法，二是非模型依赖法。缓释制剂的模型有一级方程和Higuchi方程，但当需要计算的量比较小时，使用模型法提取释放参数在进行统计学分析时比较烦琐，可采用非模型依赖法中的相似因子法进行替代。相似因子法计算相对简便，而且结果可靠，是美国FDA推荐使用的方法[6]。其基本原理是基于生物等效性的基本假设进行体外释放度的等效性评价。相似因子法计算的基本假设是试验药品与对照药品的累积释放度差的平方和最小，如果5 0≤f2≤1 0 0，则表示2种制剂的释放度相似。

随着制剂技术的飞速发展、大量新剂型的诞生以及目前对于溶出度测定方法体内外相关性（IVIVC）的要求，传统的释放度测定方法（桨法、篮法等）在进行制剂质量控制时遇到了许多新的问题和难题，比如说微量药物制剂的测定，贴剂、微球剂等新剂型的测定以及如何解决速释制剂体内外相关性等。而流通池法作为一种新型的释放度检查方法，不仅在传统剂型片剂、胶囊剂中有着广阔的应用前景，而且在贴剂、药物释放支架、混悬剂、植入剂及微球、脂质体等新剂型中更是具有很大的实用价值，可以很好地弥补传统释放度方法的不足。

表2 不同分析方法拟合后的释放度参数Tab 2 Release parameters fitted by different methods analysis

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Determination of Release Rate of Nicotine Sustained-release Patches by Flow-through Cell Method

SUN Yue，TANG Su-fang
（Tianjin Institute for Drug Control，Tianjin 3 0 0 0 7 0，China）

OBJECTIVE：To develop a method for the determination of the release rate of Nicotine sustained-release patches.METHODS：Flow-through cell method was compared with paddle plate method of the originator.0.0 0 15mol·L－1phosphoric acid solution was used as the medium at the flow rate of 4mL·min－1in laminar flow mode.HPLC method was used to determine the release rate of nicotine.Model method such as zero-order，one-order，Higuchi equations and similarity factor method were used to fit the release curves of nicotine in different medium.The main parameters were calculated and analyzed statistically.RESULTS：The results of flow-through cell method was consistent with that of paddle plate method（P＞0.0 5）.CONCLUSION：The established method is simple and convenient，and it can be used as a new choice to determine the release rate of sustained-release patch and quality control of those dosage forms.

Flow-through cell method；Nicotine；Sustained-release patch；Release rate；Model method；Similarity factor method

R9 2 7.1

A

1 0 0 1-0 4 0 8（2 0 1 2）3 3-3 1 3 3-0 3

DOI1 0.6 0 3 9/j.issn.1 0 0 1-0 4 0 8.2 0 1 2.3 3.2 4

2 0 1 2-0 2-1 3

2 0 1 2-0 4-1 0）