自制复方中药汤剂灌胃对小鼠淋巴细胞转化率和巨噬细胞吞噬功能的影响

罗 夏 孙树青 陶格斯 杨丽敏

近年来，中药对免疫功能的作用受到普遍重视，并取得了很大进展。研究认为一些疾病的发生与机体免疫抑制关系密切，很多药物可以纠正机体免疫抑制状态。中药以其独特的疗效和较少的副作用逐渐被人们接受和认可，并得到广泛应用［1］。目前，国内外对中药免疫调节剂的研究，多为单味药和其所含的单体成分［2，3］，复方研究较少且不深入。复方制剂具有单味药和单体成分所不具备的协同互补作用，使疗效增强、毒副作用减少，在实际应用中更具优势。本文采用自制复方中药汤剂灌胃实验小鼠，观察其对淋巴细胞转化率和免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 药材及试剂

复方中药（含茵陈、栀子、蛇床子、苦参、蒲公英、天花粉、大黄、黄芩、黄柏、大青叶、黄连、丹参、连翘）药材由内蒙古医学院药学院提供，植物血凝素、瑞氏染色液购自美国Sigma公司。

1.2 实验动物

80只清洁级昆明小鼠，购自内蒙古大学动物中心，合格证号：SCXK（蒙）2002～001，体重18～22g，雌雄各半。

1.3 实验方法

1.3.1 中药汤剂的制备：取每一味药材单独醇提，即取药材1kg，粉碎，加入70%乙醇5 000ml，醇提两次，每次2h，两次提取液合并；药渣再水煮两次，每次2h，过滤。将所有药液混合后置于60℃鼓风干燥箱中烘干，制成干粉。实验时称取各味药物混合物，蒸馏水溶解，配制成所需浓度后，灭菌，4℃保存备用。

1.3.2 1%鸡红细胞悬液的制备［4，5］：无菌操作自鸡心采血，加相当于血液量5倍的阿氏液，摇匀，4℃贮存。用时吸取红细胞并加入2倍量灭菌生理盐水洗涤，1 500r／min离心5min，弃上清，再加入灭菌生理盐水悬浮血球，2 000r／min离心5min，然后用生理盐水配制成浓度为1%红细胞悬液备用。

1.3.3 淋巴细胞转化实验：取实验小鼠40只，雌雄各半，随机分为对照组、低剂量中药组（2.5mg／kg／天）、中剂量中药组（12.5mg／kg／天）和高剂量中药组（50mg／kg·天），每组10只。各药物组小鼠均灌胃给药，早晚各一次，连续15天；对照组等量蒸馏水灌胃。各组小鼠自由进食。实验第16天各组小鼠肌肉注射植物血凝素0.4mg／只／天，连续2天。实验第18天分别取各组小鼠尾静脉血制备细胞涂片，瑞氏染色，油镜下观察200个淋巴细胞，计算淋巴细胞转化率（%）。

1.3.4 巨噬细胞吞噬实验：取实验小鼠40只，按1.3.3的方法分组和给药。实验第16天，灌胃后每只小鼠腹腔注射6%的淀粉肉汤0.5ml，24h后腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml，40min后颈椎脱臼处死，并在腹腔注入3ml无Ca2＋、Mg2＋的 Hank’s液3ml，按摩腹部数分钟后，注射器吸取腹腔液于小试管内，500r／min离心5min，取上清涂片、晾干［6］，瑞氏染色后，油镜观察，计数100个巨噬细胞，计算吞噬率。吞噬率＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数／100个巨噬细胞×100%。

1.4 统计学处理

采用SPSS13.0软件进行统计学分析，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 复方中药对小鼠淋巴细胞转化率的影响

各中药组与对照组淋巴细胞转化率比较，差异显著（P＜0.01），中剂量中药组淋巴细胞转化率高于低、高剂量组（P＜0.05或P＜0.01），见表1。

表1 复方中药对小鼠淋巴细胞转化率的影响（s，n均＝10）

表1 复方中药对小鼠淋巴细胞转化率的影响（s，n均＝10）

注：与对照组比较，1）P＜0.01；与低剂量中药组比较，2）P＜0.05；与高剂量中药组比较，3）P＜0.01

组 别 淋巴细胞转化率（%）3.81低剂量中药组 32.34士6.731）中剂量中药组 36.21士6.611）2）3）高剂量中药组 29.17士9.111）对照组 21.11士

2.2 复方中药对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

各中药组与对照组比较巨噬细胞吞噬功能显著增强（P＜0.01），中剂量组作用最大，明显高于低、高剂量组（P 均＜0.05），见表2。

表2 复方中药对小鼠巨噬细胞吞噬率的影响（s，n均＝10）

表2 复方中药对小鼠巨噬细胞吞噬率的影响（s，n均＝10）

注：与对照组比较，1）P＜0.01；与低剂量中药组比较，2）P＜0.05；与高剂量中药组比较，3）P＜0.05

组 别 巨噬细胞吞噬率（%）3.23低剂量中药组 33.22士4.711）中剂量中药组 38.27士7.911）2）3）高剂量中药组 26.40士4.811）对照组 19.78士

3 讨 论

脾脏为外周免疫器官，是T、B等淋巴细胞成熟、分化及发生免疫应答的主要场所［7，8］。其中，T细胞在受到非特异性有丝分裂原如刀豆蛋白（ConA）等刺激后，能转化为淋巴母细胞，继而分裂增殖。T淋巴细胞的功能状态在很大程度上反应机体的细胞免疫功能水平，在机体早期抗感染和细胞内寄生菌感染的免疫功能中起重要作用。T细胞的转化率可反映机体的细胞免疫功能状态。本研究结果表明，不同剂量中药组均可显著提高实验小鼠淋巴细胞转化率，且在一定浓度范围内随药物浓度的升高而逐渐增加。

巨噬细胞不仅参与机体的非特异性和特异性免疫反应，而且是两种免疫反应的“桥梁细胞”，在人体生理和病理过程中都发挥重要作用［5］，是机体防御功能的重要组成部分。在炎症反应中，巨噬细胞是参与非特异性免疫反应和特异性免疫反应的主要细胞，通过多种途径对体内的“非己”异物进行识别和清除；在特异性免疫反应中承担着加工、处理抗原，传递抗原信息的职能。而巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的指标之一，常用于评价药物对细胞免疫功能的影响。复方中药含有多种有效成分，具有清热解毒，消炎止痒，调节机体免疫功能优点［9］。本实验结果也表明，作者所拟复方中药能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬率，且在一定范围内随药物浓度的升高而增强巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力。表明复方中药能增加巨噬细胞的免疫反应，提高机体免疫力。因此认为该复方中药对小鼠免疫功能有显著的调节和促进作用。对其吞噬功能及增强免疫机能的机理有待进一步研究。

1 孙 燕.中医中药在肿瘤综合治疗中的应用［J］.中西医结合志，1997，6（6）：323～324.

2 张 群，雷林生，吴曙光.多糖类药物作用的受体及信号转导机制的研究进展［J］.中草药，2005，36（4）：614～616.

3 张其威，张楚瑜.抗病毒中药研究的最新进展［J］.中成药，2005，27（1）：116～119.

4 徐淑云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1 833～1 836.

5 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1992：315～317.

6 蒋红丽，曹雨辰.复方中药注射液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响［J］.中兽医医药杂志，2006，25（4）：33～34.

7 Nyati KK，Prasad KK，Rizwan A，et al.Lymphocyte transformation test detects a response to campylobacter jejuni antigens in patients with guillain－barrésyndrome［J］.Med Microbiol Immunol，2010，199（2）：109～116.

8 Iwasaki A，Medzhitov R.Regulation of adaptive immunity by the innate immune system［J］.Science，2010，327（5 963）：291～295.

9 呙爱秀，黄兴国，雷黎明.苦参碱对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响［J］.中国现代药物杂志，2008，2（11）：7～9.