河豚毒素软胶囊的制备工艺及其药效学研究

周芙琼 赵继红 李 伟 卞慧敏 陈 军 孟庆海

1.南京中医药大学，江苏南京 210029；2.江苏京甲药业有限公司，江苏泰州 225300

河豚毒素软胶囊的制备工艺及其药效学研究

周芙琼1赵继红2李 伟1卞慧敏1陈 军1孟庆海1

1.南京中医药大学，江苏南京 210029；2.江苏京甲药业有限公司，江苏泰州 225300

目的研究河豚毒素软胶囊的制备工艺。 方法通过单因素考察确定河豚毒素软胶囊的处方及工艺，并通过小鼠热板法考察河豚毒素软胶囊的镇痛作用。 结果 最佳制备条件：司盘80为增溶剂，维生素E为抗氧化剂，尼泊金乙酯为防腐剂，搅拌时间为90 min，明胶∶甘油∶水=1.0∶0.3∶1.0。 结论 制备的TTX软胶囊具有良好的镇痛作用。

河豚毒素；软胶囊；热板法；制备

河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）是一种钠离子通道阻断剂，其毒性虽强，但具有良好的镇痛作用，可以缓解多种钝痛及锐痛，且不产生依赖性，还可用于晚期癌症止痛[1]。软胶囊是现代化新剂型，可提高药物稳定性，相对用药剂量准确，吸收速度优于传统剂型，药物的生物利用度较高[2]。因此，本实验对TTX软胶囊的处方及制备工艺进行单因素考察，并对其药效进行了初步考察。

1 仪器与试药

1.1 仪器

YLS-6A智能热板仪（山东省医学科学院设备站），DF-101K磁力搅拌器（南京科尔仪器设备有限公司）。

1.2 试药

TTX（江苏泰州市康特生物工程有限公司，批号：000426），司盘（司盘20、司盘60、司盘80，国药集团化学试剂有限公司），紫苏籽油（大连圣基生物制品有限公司），柠檬酸（国药集团化学试剂有限公司），柠檬酸钠 （昆山金城试剂有限公司），尼泊金乙酯（上海凌峰化学试剂有限公司），维生素E（南京立业制药有限公司），吲哚美辛（山西云鹏制药有限公司，批号：H14020771）。

1.3 动物

雌性ICR小鼠，清洁级，体重18～22 g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物质量合格证号：SCXK（沪）2007-0005。

2 方法与结果

2.1 制备工艺的研究

2.1.1 增溶剂的选择及用量 选用3种增溶剂（司盘20、司盘60、司盘80），每种增溶剂配制5份，其体积按照软胶囊内容物体积的0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%配制，置于磁力搅拌器中在60℃条件下搅拌，向其中加入蒸馏水，直至搅拌1 h水滴仍无法消失为止，记录此时加入水的体积。由于司盘60所制得的油溶液流动性较差，故只考察司盘20与司盘80的增溶效果。结果表明，司盘80的增溶效果较好，故选择司盘80作为增溶剂，用量为内容物体积的0.20%。见图1。

图1 不同增溶剂对水的增溶曲线

2.1.2 抗氧化剂、防腐剂的选择及用量 配制软胶囊内容物，每个处方含有不同量的维生素E（VE）和尼泊金乙酯，平行两份样品，按照《中国药典》2010版附录ⅪⅩC“原料药稳定性试验指导原则”，将各样品置于密封具塞试管，并置于恒温箱，在60℃条件下放置10 d，于第0天、第5天和第10天取样，测定过氧化值。结果表明，未加抗氧化剂和防腐剂的处方，过氧化值增幅明显；当VE用量为1.0%、尼泊金乙酯用量为0.2%时，过氧化值较低，故最终确定VE用量为1%，尼泊金乙酯用量为0.2%。见表1。

表1 维生素E、尼泊金乙酯的用量对软胶囊内容物过氧化值的影响

2.1.3 搅拌时间的选择 配制3份TTX酸水溶液，方法为精密称取1 mg TTX，用0.2 mL柠檬酸缓冲液（pH=5）溶解，得TTX酸水溶液。分别加入到3个装有1 mL司盘80的烧杯中，在60℃条件下搅拌，经过不同时间后加入一定体积的紫苏籽油，即得TTX紫苏籽油溶液，静置过夜，观察油溶液是否分层。结果显示，当搅拌时间为90 min时，所得的TTX紫苏籽油溶液澄清，未出现分层，故确定搅拌时间为90 min。

2.1.4 囊壳处方选择 囊壳处方采用软胶囊常用的明胶-甘油-纯化水配方，明胶、甘油与水的用量比为 1.0∶0.3∶1.0[3-6]。

2.2 小鼠热板法镇痛试验

调节热板仪温度，使其恒定在（53±0.5）℃，每次取雌性小鼠1只，放入热板仪，记录自放入热板仪至出现舔后足所需时间，作为该鼠的痛阈值，凡少于6 s或超过60 s出现舔后足者弃之不用。取预选合格的小鼠50只，随机分为5组，每组10只：溶媒对照组、吲哚美辛组（20 mg/kg）、TTX软胶囊高剂量组（32 μg/kg）、TTX 软胶囊中剂量组（16 μg/kg）和 TTX 软胶囊低剂量组（8 μg/kg），测定每只小鼠灌胃2 h后的痛阈值，计算痛阈提高率。见表2。

表2 各剂量组的痛阈值变化情况（，n=10）

表2 各剂量组的痛阈值变化情况（，n=10）

注：与溶媒对照组比较，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01，“-”表示无数据

组别 给药剂量 灌胃前痛阈值（s）灌胃后痛阈值（s）痛阈提高率（%）溶媒对照组吲哚美辛组TTX软胶囊高剂量组TTX软胶囊中剂量组TTX软胶囊低剂量组-20 mg/kg 32 μg/kg 16 μg/kg 8 μg/kg 16.4±4.5 17.0±4.3 17.1±2.9 16.9±5.3 16.7±5.0 16.9±4.2 22.9±3.1 25.3±8.3 22.8±5.6 21.6±3.0 3.05 34.71**47.95**34.91**29.34*

3 讨论

TTX易溶于稀酸水溶液，本实验选用常用的柠檬酸缓冲液（柠檬酸、柠檬酸钠）作为TTX的溶剂。当溶剂pH值小于3时，TTX容易降解为脱水TTX[7]，因此pH值定为4～6较为合适，本实验选用pH值为5的柠檬酸缓冲液溶解TTX，结果显示效果良好。

由小鼠热板法镇痛试验结果显示，本方法制得的TTX软胶囊具有良好的镇痛效果，且随着剂量的增加，痛阈提高率越大，镇痛效果越好。

[1]Asakawa M，Totoshima T，Shida Y，et al.Paralytic toxins in a ribbon worm Cephalothrix species （Nemertean） adherent to cultured oysters in Hiroshima Bay，Hiroshima Prefecture，Japan[J].Toxicon，2000，38（6）：763-773.

[2]杨旭，孙颖，郭军.浅谈中药软胶囊制剂的研究[J].黑龙江医药，2010，3（4）：590-592.

[3]毕殿洲.药剂学[M].北京：人民卫生出版社，2000：303.

[4]李泓.中药软胶囊质量控制及发展方向[J].中医药学刊，2006，24（6）：1144.

[5]时军，程怡.辅料在软胶囊剂型中的应用[J].中医药学刊，2003,21（9）：1429-1430.

[6]刘泰，胡玉英.血塞通软胶囊对偏头痛的临床疗效研究[J].广西医学，2006，28（9）：1334-1336.

[7]洪专，陈伟珠，陈晖，等.7种有机酸溶液中河豚毒素的稳定性研究[J].中国卫生检验杂志，2008，18（7）：1286-1287.

Study on preparation procedure and pharmacodynamics of Tetrodotoxin Soft Capsule

ZHOU Fuqiong1ZHAO Jihong2LI Wei1BIAN Huimin1CHEN Jun1MENG Qinghai1
1.Nanjing University of Chinese Medicine,Jiangsu Province,Nanjing 210029,China;2.Jiangsu Jingjia Pharmaceutical Co.Ltd.,Jiangsu Province,Taizhou 225300,China

Objective To study on the preparation of Tetrodotoxin Soft Capsule.Methods Single-factor was studied to optimize the formulation and technology.Hot plate experiment in mice was used to evaluate the analgesic activities of tetrodotoxin soft capsule.Results The best preparation conditions contained that,solubilizer was Span 80,antioxidant was Vitamin E,and preservative was Ethylparaben.The stirring time was 90 minutes,and gelatin ∶glycerol∶water=1.0 ∶0.3 ∶1.0.Conclusion Tetrodotoxin Soft Capsule is prepared successfully with good analgesic activities.

Tetrodotoxin;Soft Capsule;Hot plate experiment;Preparation

TQ460.6

A

1673-7210（2012）01（b）-122-02

周芙琼（1986-），女，江苏江阴人，硕士研究生；研究方向：中药化学。

李伟，男，教授，博士生导师；研究方向：天然药物化学。

2011-09-27）