核桃楸皮甲醇提取物的急性毒理研究

雷 涛 梁启超 林 峰 吴宜艳

牡丹江医学院药学院，黑龙江牡丹江 157011

核桃楸皮（Cortex Juglandis Mandshuricae）为胡桃科核桃属植物核桃楸（Juglans mandshurica Maxim.）的树皮[1]。 原植物核桃楸又名山核桃、胡桃、胡桃楸、小核桃等，为胡桃科胡桃属落叶乔木，主要分布于我国东北地区（小兴安岭及张广才岭），河北、北京、内蒙古、山西等地有少量分布，俄罗斯远东地区、朝鲜、日本也有分布[2]，其树皮及未成熟果实或果皮可用药，树皮又名楸树皮，味苦性寒，具有清热解毒、止痢明目的功效，主治泄泻、痢疾、白带、目赤[3]。现代研究表明，核桃楸具有抗氧化[4]、抗菌、消炎、抗癌等作用[5]。近几年核桃楸皮化学成分的分离提取和抗癌作用机制研究成为热点，经过现代对胡桃楸化学成分分析证明胡桃楸含有萘醌、胡桃醌、黄铜苷、鞣花酸及没食子酸等化学物质[6]。现为观察其甲醇提取液的毒性及安全性，进行急性毒性的实验研究。直接用SPSS软件计算LD50，具有简单、快速、直观和方便的特点[7]。

1 仪器与试药

核桃楸皮（核桃揪皮采自黑龙江省牡丹江市牡丹峰）；灌胃器、烧杯、量筒、旋转蒸发仪、电子天平等。

昆明种小鼠（牡丹江医学院实验动物中心提供），体重18～22 g，雌雄各半。实验前动物置于室内适应环境1周，室温20～28℃，采用架式笼养，标准饲料，饮水为自来水。

2 方法与结果

2.1 中药提取液的制备

核桃楸皮粉碎后，用索氏提取器乙醚回流至无色，再经甲醇提取48 h至无色，蒸干甲醇、转水溶解、过滤、浓缩，形成最大浓度的混悬液0.181 1 mg/ml（以不堵塞灌胃器为限度），放入冰箱保存备用。

2.2 预实验

实验前动物禁食不禁水12 h。随机将昆明种小鼠分为5组，每组4只。①0.10 mL/10 g药液，每日1次。②0.15 mL/10 g药液，每日1次。③0.20mL/10 g药液，每日1次。 ④0.15 mL/10 g药液，每日2次，每次灌胃间隔8 h。⑤0.20 mL/10 g药液，每日2次，每次灌胃间隔8 h。连续观察7 d，每2 天称一次体重，记录死亡情况。结果：①无死亡，体态正常；②无死亡；③死亡1只；④、⑤全部死亡。将存活小鼠处死，解剖观察内脏器官，心、肝、脾、胃、肾未见异常。

2.3 急性毒性实验

选用昆明种小鼠40只，雌、雄各半，体重18～22 g，分为4组，每组10只，实验前动物禁食不禁水12 h。①0.1 mL/10 g药液，每日1次。②0.1 mL/10 g药液，每日2次，每次灌胃间隔8 h。③0.1 mL/10 g药液，每日3次，每次灌胃间隔8 h。④0.1 mL/10 g蒸馏水，每日3次，每次灌胃间隔8 h。连续观察7 d，每2 天称一次体重，记录死亡情况。结果：①无死亡；②死亡5只；③全部死亡。将①、④存活小鼠摘眼取血，测血液指标备用，处死，解剖观察内脏器官，心、肝、脾、胃、肾未见异常。

2.4 结果分析

2.4.1 软件SPSS 13.0 计算LD50 输入表1 数据的过程如下：运行SPSS 13.0 for Windows，进入SPSS数据编辑器后，首先激活变量表（VariableView）定义变量，在变量名（name）下输入“剂量”、“动物数”和“死亡数”，并将“剂量”的小数点位数（Decimal）设为“2”，“动物数”和“死亡数”的小数点位数设为“0”。然后进入数据表（Data View），根据表头提示，依次输入各组数据。在数据表主菜单中，选择Analyze——Regression——Probit，调出Probit Analyze对话框，只需将“剂量”选入“Covariates”栏中，“死亡数”选入“Response frequency”栏中，“动物总数”选入“Total observed”栏中，在“Transform”栏中，选择“log base 10”（以10为底的对数转换），其他保持默认选项。然后单击“OK”钮即完成整个操作过程。测定结果LD50为2.622 mg/kg，其 95%可信范围为1.811 mg/kg≤ LD50≤5.433 mg/kg。

2.4.2 血液分析 各组数据采用SPSS 13.0 for Windows，LSD-t方差分析，结果显示，①、④各项血液指标数据差异均无统计学意义（均P ＞0.05）。

表1 各项血液指标（±s，U/L）

表1 各项血液指标（±s，U/L）

④①39.70±11.05 41.50±12.94 178.70±25.42 182.10±40.05 245.30±25.37 270.85±32.12 6.75±0.09 6.80±0.51 0.42±0.25 0.45±0.32 30.85±1.80 30.94±1.50 2.65±1.14 2.50±1.10组别 谷丙转氨酶 谷草转氨酶 碱性磷酸酶 血尿素氮 直接胆红素 肌酐 谷酰转肽酶

3 讨论

有文献报道，胡桃醌小鼠灌胃给药的LD50为2.5 mg/kg，腹腔注射的 LD50为 25 mg/kg，大鼠灌胃给药的 LD50为112 mg/kg[8]。胡桃醌溶于乙醚，经过乙醚回流后的核桃楸皮甲醇提取液仍然有很大毒性，说明还含有其他脂溶性毒性物质。

核桃楸皮甲醇提取液富集了极性比较大的脂溶性成分，其LD50为临床科学、安全用药提供了一定依据。SPSS统计软件具有数据整理、分析和统计和结果输出等多种功能，将其用于LD50的计算，直接在视窗系统中输入数据，不需查表和编程，步骤简单，不易出错。

[1] 石建辉，王金辉，袁征，等.核桃楸皮的化学成分[J].沈阳药科大学学报，2006，23（8）：501-504.

[2] 魏丽丽.核桃楸的药理作用研究[J].黑龙江医药，2009，22（4）：532-534.

[3] 吴静娟.核桃楸皮等有效成分的药理与临床应用[J].中成药，2004，3（26）：230-231.

[4] 司传领，刘忠，惠岚峰，等.核桃楸树皮提取物的化学成分及其抗氧化活性研究[J].林产化学与工业，2008，28（1）：29-32.

[5] 张野平，杨志博，肃静洲，等.胡桃醌抗肿瘤作用研究[J].沈阳药学院学报，1987，4（3）：166-169.

[6] 崔哲.胡桃楸的研究进展[J].现代医药卫生，2008，24（20）：3061-3062.

[7] 周一平．用 SPSS 软件计算新药的 LD50[J]．药学进展，2003，27（5）：314-316．

[8] 季宇彬，严琴琴，曲中原，等．正交试验法优选青龙衣中胡桃醌的提取工艺[J].现代药物与临床，2009，24（3）：151-154.