荆州周边地区猪场饲料真菌及霉菌毒素的检测

余云雷，温凌子 (长江大学动物科学学院,湖北 荆州 434025)

荆州周边地区猪场饲料真菌及霉菌毒素的检测

余云雷，温凌子 (长江大学动物科学学院,湖北 荆州 434025)

以湖北荆州周边地区3个猪场所使用的饲料为研究对象，采用吸水纸检测法对饲料中的真菌种类进行了调查，并采用真菌毒素ELISA试剂盒对饲料样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、呕吐毒素和伏马毒素进行了检测，分析了饲料被污染的程度。结果表明，所检测的配合饲料、全价饲料、玉米和豆粕普遍受到了以上6种霉菌毒素的污染。饲料样品中玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的检出率高达100％，黄曲霉毒素B1和T-2毒素的检出率平均在80％以上。

饲料；霉菌；霉菌毒素

真菌对饲料的污染常常引起饲料霉腐变质。据美国食品和药物管理局调查，全球每年至少有25％的饲料及饲料原料受到真菌毒素的污染，造成饲料业和畜牧业巨大的经济损失。其中，大多数饲料原料和混合饲料的霉变是由于在收获、运输过程或贮藏期间操作不当引起。

真菌的种类很多，其中能够污染食品和饲料的真菌约有30余种，主要有黄曲霉、赭曲霉、橘青霉、展开青霉、黄绿青霉和串珠镰刀菌等[1]。这些真菌在一定温度和湿度条件下能在饲料中大量繁殖。有些真菌(如黄曲霉素、赭曲霉等)还会产生具有细胞毒性或神经毒性的真菌毒素[2]。真菌污染饲料不仅使饲料质量、营养方面的效用降低，还会在动物食用后引起动物机体的急慢性中毒，使动物免疫机能受到抑制，严重的甚至引起死亡[3]。此外，饲料中真菌毒素对动物的影响还会直接或间接进入食物链，从而危害到人类健康[4]。对猪场饲料中的真菌种类进行调查，可以有针对性地采取相应措施避免饲料真菌污染，对预防动物真菌中毒和危及人类具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 样品

来自湖北省荆州周边的3个猪场，主要采集饲料和原料。共抽取样品44份，其中配合饲料12份，玉米8份，豆粕10份，全价饲料14份。

1.2 主要试剂

黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、呕吐毒素和伏马毒素ELISA试剂盒系北京翔远同创科技有限公司产品。

1.3 真菌种类的检测

参照王建华等[5]的方法采用吸水纸检测法进行。将用无菌水浸透的3层无菌滤纸放于直径9cm的能透近紫外光的玻璃培养皿中，每皿多点点植样品，每个样品检测2皿。在22℃下，采取12h近紫外光/12h黑暗培养，光照距离为40cm，7～10d后在显微镜和解剖镜下观察真菌，并记录每个样品所携带真菌的种类。

1.4 真菌毒素的测定

(1)样品处理 将粉碎好的配合饲料、全价饲料、玉米和豆粕样品过20目筛后，每个样品称取20g分别置于带塞锥形瓶中，并加入100ml 70％的甲醇水溶液，摇匀后静置2～3min，自然沉淀。然后用玻璃纤维滤纸过滤水相萃取物，收集萃取物待测。

(2)毒素的检测 采用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA)按照试剂盒使用说明进行检测。向预先包被霉菌毒素试剂盒抗体的酶标孔中分别加入标准品、待测样本和HRP标记的霉菌毒素抗体，经过温育和洗涤，再加入底物，在酶联免疫检测仪上读取光密度D450nm值，参照标准品判定结果。

2 结果与分析

2.1 饲料中真菌的种类

经检测，配合饲料、全价饲料、玉米和豆粕4种饲料的44个样品中主要存在的真菌有6种：黄曲霉、镰孢菌、梭霉菌、赭曲霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌。

2.2 配合饲料样品中6种真菌毒素的检测

表1 配合饲料样品中6种真菌毒素的检测结果

表2 玉米样品中6种真菌毒素的检测结果

表3 豆粕样品中6种真茵毒素的检测结果

表4 全价料样品中6种真菌毒素的检测结果

在被检测的12份配合饲料样品中均检测到玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A，检出率为100％。12份中被检出含有伏马毒素的有11份，含有黄曲霉毒素B1、T-2毒素的分别有10份，含有呕吐毒素的有9份(表1)。

2.3玉米样品中6种真菌毒素的检测结果

在被检测的8份玉米样品中均含有伏马毒素、赭曲霉毒素，含有黄曲霉毒素B1的有7份，含有T-2毒素的有6份，含有呕吐毒素的有5份，含有玉米赤霉烯酮的有5份(表2)。

2.4豆粕样品中6种真菌毒素的检测结果

所检10份豆粕样品中均检测出含有玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素，而含有T-2毒素的有9份，含有伏马毒素、呕吐毒素、黄曲霉毒素的分别有7份、6份、8份(表3)。

2.5全价料样品中6种真菌毒素的检测结果

在被检测的14份全价料饲料样品中均含有玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A，含有伏马毒素的有13份，含有黄曲霉毒素B1、T-2毒素、呕吐毒素的分别有12份(表4)。说明饲料受到6种霉菌毒素的污染比较普遍。

3 讨论

本调查结果表明，所检4类样品(配合饲料、玉米、豆粕和全价料)普遍受到黄曲霉毒素B1、T-2毒素、呕吐毒素、伏马毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素6种霉菌毒素的污染，污染率均在60％以上。其中黄曲霉毒素B1污染最为严重，在配合饲料、全价饲料和玉米中达到严重污染的程度。由于测定是在12月到4月之间进行，这段时间潮湿度较高，降雨量大，雨季恰好与热季重叠，容易形成高温高湿的气候而适合霉菌生长和产生真菌毒素，推测这是造成霉变和产生毒素的主要原因。

同时，本调查中发现，黄曲霉毒素B1和T-2毒素对饲料的污染比较严重，而受到伏马毒素和呕吐毒素的污染较轻，原因可能在于镰刀菌属于田间霉菌，在作物生长和收获期间比较容易滋生和产生毒素(主要包括伏马毒索、呕吐毒素、T-2毒素和玉米赤霉烯酮)。而曲霉菌属于仓储性霉菌，主要在粮食和谷物的储存阶段生长和产生毒素(主要包括黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素)。近几年的暴雨导致了一些原料含水量超标，加上高温天气造成真菌毒素超标，特别是黄曲霉毒素B1的超标。温度、O2和CO2浓度及湿度之间的相互作用决定了霉菌定殖的程度。在众多的饲料发生霉变的地区来看，我国南方地区都要高于北方，这是因为南方的气温、湿度更适合于黄曲霉的生长繁殖，特别是梅雨季节，黄曲霉更容易生长。

调查分析到的6种主要真菌几乎存在于所检测的所有原料和动物的饲料中。由于这些霉菌和毒素能够引起动物中毒等多种危害，也是动物饲料污染而且引起霉腐变质的常见菌类。真菌污染饲料不仅造成经济上的损失，而更加严重的是真菌在饲料中的生长代谢过程中产生的各种真菌毒素，会引起动物慢性和急性中毒，因而应更加注意饲料的卫生。真菌污染饲料，主要有以下的2个原因：原料运输和加工过程中污染了霉菌孢子；在储藏、销售期间管理不善，悬浮于空气中的霉菌孢子随尘埃落到饲料上。防止饲料的真菌污染，除了应该在生产管理和运输卫生方面加强外，更应该注意饲料的储藏。

[1]王希春，何成华，刘海明．真菌毒素的污染、危害及其检测技术[J].畜牧与兽医,2009,(8):23-34.

[2]陈小有，张卫东.饲料中霉菌及真菌毒素的危害及控制措施[J].河南水产,2011,(2):15-16.

[3]王代强，陈 岩.谷物、饲料中霉菌毒素的特点及检测方法[J].饲料与种植,2009,(11):49-50.

[4]鲍 营，梁成珠，刘学惠．出入境农产品中真菌毒素的污染、检测及控制[J].食品安全与检测,2005,(1):60-61.

[5]王建华,Tylkowska K.22份菜豆(PhaseolusvulgarisL.)种质健康研究[J].中国农业大学学报,2003,8(5):55-60.

[6]朱立平，陈学清．免疫学常用实验方法[J]．北京：人民军医出版社,2000:23-74.

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2012.03.008

S816.3

A

1673-1409(2012)03-S027-03

2012-03-10

余云雷(1970-)，男，湖北江陵人，硕士生，高级兽医师，主要从事重大动物疾病的防控研究。