HPLC-ELSD 测定归芪洋参丸中人参皂苷Rb1的含量

孟 霜，裴妙荣，李慧峰

（1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040；2.山西中医学院，山西 太原 030024）

归芪洋参丸为山西中医学院附属医院制剂，由西洋参、黄芪、山药、生地黄、当归、苍术、丹参等多味药组成，具有补脾益肺、活血祛瘀等功效，用于脾胃虚弱，气短咳嗽，气滞血瘀等。该方中西洋参为君药，因此选用西洋参作为质量控制指标。本制剂所含药味比较多，成分复杂，通过实验发现HPLC-ELSD 法对人参皂苷类成分能达到很好的分离，所以本实验选用HPLC-ELSD 法作为本制剂中人参皂苷Rb1含量测定的方法。

1 实验材料

Waters2695（美国）高效液相色谱仪；Alltech 2000ES 蒸发光散射检测器；十万分之一天平（梅特勒公司）；EL204 万分之一天平（上海精密仪器有限公司）；人参皂苷Rb1对照品（批号110704-200318）购于中国药品生物制品鉴定所；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈-水（30∶70）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；ELSD 参数：漂移管温度110 ℃，载气流量2.1 L/min。理论塔板数按人参皂苷Rb1计算不低于5 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成0.916 g/L 的溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和正丁醇50 mL，称定重量，超声处理（150 W，40 KHz）45 min，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，滤过，精密量取25 mL 至分液漏斗中，用氨试液充分洗涤2 次，每次25 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定量转移至5 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得［1］。

2.4 线性关系考察

精密量取人参皂苷Rb1对照品溶液（0.916 g/L）0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL 于2 mL 容量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，摇匀，得不同浓度对照品溶液，按照2.1 色谱条件，分别进样20 μL 进行测定。以人参皂苷Rb1进样量的对数为横坐标（X），峰面积积分值的对数为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程：Y=1.452 9X+6.036 2，r=0.999 8。结果表明人参皂苷Rb1在1.832 μg～18.32 μg 范围内线性关系良好。

2.5 专属性试验

取西洋参以外的其余药味，按照制备工艺制成不含西洋参的空白制剂，然后按照供试品溶液的制备方法制得阴性对照。按照2.1 色谱条件进行测定，进样量20 μL，结果在人参皂苷Rb1对照品相同保留时间处无干扰峰，表明其余药味对人参皂苷Rb1的测定无干扰，结果见图1。

2.6 精密度试验

精密吸取人参皂苷Rb1对照品溶液（0.916 g/L），按照2.1 色谱条件进行测定，重复测定6 次，进样量10 μL。结果人参皂苷Rb1峰面积积分值RSD 2.18%（n=6）。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液，分别于配制后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h 测定人参皂苷Rb1峰面积，进样量20 μL。结果人参皂苷Rb1峰面积积分值RSD 1.63%（n=6），表明供试品溶液在12 h 内具有良好的稳定性。

2.8 重复性试验

取同一批样品，共6 份，分别按2.3 方法制得供试品溶液，照2.1 色谱条件进行测定，进样量20 μL。结果制剂中人参皂苷Rb1的平均含量为1.08 mg/g，RSD 1.57%（n=6）。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品6 份，分别精密加入人参皂苷Rb1对照品溶液（4.100 g/L）0.5 mL，按2.3方法操作，制得供试品溶液，照2.1 色谱条件测定，进样量20 μL，计算加样回收率，结果见表1。回收率平均值为99.70%，RSD 1.90%。

表1 人参皂苷Rb1加样回收率测定

2.10 样品含量测定

取三批样品分别制得供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液5μL、10 μL，供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，按照2.1 色谱条件进行测定，采用外标两点法对数方程计算人参皂苷Rb1含量。结果见表2。

表2 样品中人参皂苷Rb1含量测定结果 （mg/g）

3 讨论

图1 归芪洋参丸HPLC 色谱图

西洋参为本制剂的君药，人参皂苷Rb1为其特征性有效成分，通过测定其含量可以有效地控制药品的质量。人参皂苷Rb1为四环三萜，作者曾试图应用2010 版《中国药典》所载西洋参含量测定方法，在紫外检测器203 nm 波长下，对人参皂苷Rb1进行测定，但由于该成分为较弱的末端吸收，而本制剂处方大，药味多，成分复杂，干扰严重，难以得到满意的分离效果，故不能选用紫外检测器。蒸发光散射检测器为通用质量型检测器，其响应不依赖样品的光学性质，基线噪音小［2-3］，能够获得较好的峰形，所以本实验采用HPLC-ELSD 法作为制剂中人参皂苷Rb1含量测定的方法。本实验采用HPLC-ELSD 法测定西洋参中皂苷的含量，简便、准确、灵敏度高、重现性好。

［1］李永国，王峥涛.人参、西洋参质量标准研究进展［J］.中国药品标准，2005，10（5）：10.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2010：122.

［3］赵宇新，李曼玲.蒸发光散射检测器在中药成分分析中的应用［J］.中国中药杂志，2003，28（10）：913.