豨莶草活性炭洗脱水溶部位的急性毒性研究

关建红，刘炳辰，裴香萍，程艳婷

（山西中医学院，山西太原030024）

豨莶草为菊科植物，它的地上部分作为中药入药，为传统的祛风类中药之一。以往我们对于豨莶草水煎剂的毒性进行了研究，但对豨莶草水煎剂中有毒成分的进一步研究尚未见报道。本实验用活性炭柱，采用不同洗脱液进行洗脱，收集洗脱液部分对小鼠进行急性毒性实验筛选，筛选出毒性成分的洗脱液部分，为进一步实验研究奠定基础。

1 材料材料

1.1 实验药材 经我院中药鉴定室牛艳珍副教授对该药形态、质地、髓部、柔毛、气味的性状鉴别，表皮细胞、直径、腺毛长度的显微鉴别，鉴定为菊科植物豨莶草（Siegesbeckia pubescens Makino）。

1.2 实验动物 取昆明种小鼠70只，体重20 g～22 g，雌雄各半，随机分为7组，每组10只。实验动物质量合格证：医动字第070201号。正常饲养3 d后供试，实验室温度为20℃～22℃，相对湿度50%～70%，具排气通风设备，自然光照大约12 h，明暗周期。

2 方法与结果

2.1 药品制备 供试品溶液配制：豨莶草水煎粉剂2.133 g（每克豨莶草水煎粉剂相当于7.4 g生药），加水30 mL溶解，搅拌均匀，备用。采用处理好的不同型号的大孔树脂（D101、D3520、AB-8、S-8）各 0.5 g、活性炭0.4 g，分别放入具塞试管中，各加入供试品溶液6 mL，振摇10 min，观察颜色变化。结果放入活性炭的试管中供试品溶液变为无色，初步推断活性炭可将样品中的有色成分吸附，故选择了活性炭柱分离的方法。活性炭柱制备：2/3活性炭加水湿法装柱，1/3活性炭与样品液混合均匀后加于柱上，将水、50%乙醇、70%乙醇的活性炭洗脱液浓缩成外观为棕红色的黏稠浸膏，分别相当于生药含量：17.2 g（生药）/mL、27.4 g（生药）/mL、74.5 g（生药）/mL。原膏以生理盐水配制成不同浓度应用。

2.2 豨莶草活性炭柱水洗脱液部位LD50与其他部位的最大耐受量测定［1］通过预试测出D100（100%死亡剂量）为活性炭水洗脱液部位344 g（生药）/kg，测出D0（0%死亡剂量）活性炭水洗脱液部位为90.4 g（生药）/kg，分别以 1∶0.8的等比配制系列浓度；小鼠给药前禁食不禁水16 h，灌胃给药，给药体积为20 mL/kg，连续观察14 d，记录动物所出现的毒性反应及死亡情况，以改良寇氏法计算LD50及95%可信限。

豨莶草活性炭水洗脱液部位灌胃给药后，动物均在给药后立即出现竖毛、蜷伏、竖尾、跳跃、抽搐，然后出现终尿而死，大多数动物在10 min之内死亡，少数在6 h之内死亡，24 h后存活动物不再死亡；在以后14 d的观察期内，动物一般情况正常，活动、进食、排便均无异常，观察期间，动物均无死亡。14 d后解剖动物，无肉眼可见的病理改变。豨莶草活性炭水洗脱液部位小鼠死亡情况及急性毒性实验结果见表1、表2。

表1 豨莶草活性炭水洗脱液部位小鼠死亡情况记录表 （只）

表2 豨莶草活性炭水洗脱液部位小鼠急性毒性实验（LD50）

根据表1，以改良寇氏法计算LD50及95%可信限。豨莶草活性炭水洗脱液部位的LD50为157.56 g/kg，95%可信限为 123.6 g/kg～200.79 g/kg，平均可信限为（157.56±38.58）g/kg。50%乙醇活性炭洗脱液部位小鼠口服的最大耐受量为344 g（生药）/kg，70%乙醇活性炭洗脱液部位在同等剂量灌胃给药后均无死亡。

2.3 判断豨莶草毒级 豨莶草活性炭水洗脱液部位按中药毒性分级指标［2］，有毒中药的七项指标中豨莶草水洗脱液部位符合3项指标，属有毒中药。结果见表3。

表3 豨莶草水洗脱液部位毒性分级指标观察结果

3 讨论

1次口服给药豨莶草水洗脱液部位测得小鼠LD50为（157.56± 38.58）g（生药）/kg，95%可信限为 123.63 g/kg～200.79 g/kg，与豨莶草水煎粉剂的 LD50一致［3］。50%乙醇活性炭洗脱液部位小鼠口服的最大耐受量为 411 g（生药）/kg，最小致死量约在 411 g/kg～548 g/kg之间，与豨莶草水煎醇沉粉剂的LD50结果一致［2］。在实验中采用活性炭柱，对豨莶草水煎液分别用水、50%乙醇及70%乙醇、95%乙醇洗脱，收集洗脱液，不同洗脱液的急性毒性实验结果与豨莶草水煎粉剂筛选的结果相一致［4］，提示豨莶草活性炭柱洗脱液部位为豨莶草毒性成分所在部位，经豨莶草工艺初探推测其毒性成分可能在水溶部位。因此采用活性炭柱对豨莶草水煎液进行洗脱是可行的，保留了豨莶草中的毒性成分，为进一步对有毒成分的分离研究奠定了基础。

豨莶草是临床常用祛风湿药物，随着近年来中草药研究的深入，该药的临床应用范围更为广泛。我们已经报道了豨莶草水煎粉剂和豨莶草水煎醇沉粉剂的LD50以及豨莶草水煎粉剂亚毒实验出现的肺毒性［4-6］。按有毒中药的分级七项指标中豨莶草水煎粉剂符合五项指标，豨莶草水洗脱液部位符合三项指标，介于大毒与小毒之间，属有毒中药，与《药典》所载豨莶草无毒不相符。实验进一步证明豨莶草水煎液的毒性在临床应用时是不容忽视的，其毒性成分到底为何种物质，有待进一步研究。

［1］陈奇.中药药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1994：112.

［2］关建红.豨莶草水煎醇沉物口服小鼠急性毒性［J］.中国中药杂志，2005，30（21）：1564.

［3］关建红，薛征，任晋斌.豨莶草水煎剂小鼠急性毒性及亚急性毒性的实验研究［J］.中国实验方剂学杂志，2007，13（11）：49.

［4］关建红，裴香萍，刘炳辰.豨莶草不同提取部位毒性比较研究［J］山西中医学院学报，2009，10（1）：15.

［5］翁维良.临床中药不良反应的探讨［J］.中药新药与临床药理，1996，7（2）：4.

［6］关建红，薛征，刘炳辰.豨莶草水煎粉剂对小鼠肺毒性研究［J］中国中药杂志，2008，33（23）：2820-2821.