幽门螺杆菌对脑梗死患者血小板活化及凝血功能的影响

吴海琴 ，汤 燕，张 欣，魏玄辉，王虎清，张文婷，张桂莲

(1.西安交通大学医学院第二附属医院神经内科，陕西 西安 710004;2.西北工业大学校医院，陕西 西安 710072;3.陕西省人民医院，陕西 西安 710032)

近年来，人们发现慢性感染可能对脑梗死的发生与发展有一定影响，在众多造成慢性感染的病原体中，多数人认为幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染与脑梗死有关［1-4］，尤其与大动脉粥样硬化型脑梗死的相关性较强［5］。但对于Hp 感染导致脑梗死的发病机制尚未完全明确。凝血系统在脑梗死的发生发展中发挥重要作用，高凝状态是动脉粥样硬化性血栓性脑梗死发生的重要因素之一［6］。既往研究发现，血小板异常活化参与了脑梗死的发生发展，CD62p 是存在于血小板α 颗粒膜上的糖蛋白，它在血小板膜上的表达反映了血小板的活化水平，因而目前多用静脉血液中CD62p 阳性血小板百分率代表血小板活化的整体水平［7-8］。Hp 感染是否通过增强急性脑梗死患者的血小板活化水平，进而参与脑梗死的发生发展，目前尚不清楚。本研究拟通过观察Hp感染对急性脑梗死患者静脉血液中CD62p 阳性血小板百分率和凝血指标的影响，以证明Hp感染是否通过影响血小板活化水平和凝血功能参与急性脑梗死的发生发展。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2008年5月～2009年10月在西安交通大学医学院第二附属医院神经内科住院的发病1 周内的初发脑梗死患者，共66 例(脑梗死组)。入选病例均符合改良的TOAST 分型［9］大动脉粥样硬化型和小动脉闭塞型的诊断标准，采用头颅CT 和/或MRI 检查，部分患者行DSA 检查。其中，男性37 例，女性29 例，年龄44～80岁，平均(60.37±11.69)岁。入选病例既往无脑梗死、脑出血、蛛网膜下腔出血及心房纤颤病史。选择同期在神经内科住院的非脑血管病患者50 例为对照组，其中，男性28 例，女性22 例，年龄40～76岁，平均(58.83±10.14)岁。所有研究对象在入选前2 周内未服用过阿司匹林、氯吡格雷、潘生丁等影响血小板功能的药物。

1.2 方法

1.2.1 Hp 抗体浓度检测 所有患者于入院次日清晨空腹采肘静脉血(3.8% 枸橼酸钠抗凝)，血Hp 抗体检测采用生物微矩阵(芯片)分析法，试剂盒购自西安联尔科技有限公司，严格按照说明书操作。

1.2.2 Hp 感染状态的判定 Hp 的细胞毒素相关蛋白(CagA)、尿素酶(Ure)和空泡毒素(VacA)3 种抗体中任意一项抗体结果阳性即判断为Hp-IgG 阳性，如3 种抗体均为阴性，则为Hp-IgG 阴性;3 种抗体中只要CagA 抗体阳性，即为Hp-CagA 阳性，反之，CagA 抗体阴性，即为Hp-CagA 阴性。对于Hp 抗体阳性的患者，进一步划分为Hp-IgG 阳性及阴性组、Hp-CagA 阳性组及阴性组。

1.2.3 CD62p 阳性血小板百分率的检测 采用美国Becton-Dickinso 公司生产的流式细胞仪(型号:FACS Calibur)进行检测。取2 支Faclon试管，一管为阴性对照，加入CD61-FITC、IgGPE 各10μl;另一为测定管，加入CD61-FITC、D62p-PE 各10μl(Falcon 管、荧光抗体均购自美国BD 公司)。并分别在上述2 管中加入5μl 全血，轻轻混匀于暗处反应20 min，加500μl PBS 悬浮立即上机检测。用CD61 表达量和侧向散射光(SSC)设门来选定血小板，每个样本获取30 000个血小板，测对照管，调节阳性区的假阳性率为1%～2%;测标本管，得出CD62p 阳性血小板百分率。

1.2.4 凝血功能测定 所有患者入院第2天清晨空腹采肘静脉血2 ml(枸橼酸抗凝)，采用全自动血凝仪(sysmexCA 2500)测定，按说明书操作。校对后正常值:PT(凝血酶原时间)10～14 s，PTR(凝血酶原时间比值)0.82～1.15，INR(国际标准化比值)0.8～1.5，APTT(活化的部分凝血活酶时间)23～35 s，TT(凝血酶时间)16～18 s，FIB(血浆纤维蛋白原)2～4 g/L。

1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0 统计软件进行数据管理和分析。计量资料以(x¯±s)表示，两组间均数比较采用独立样本t 检验;多组间均数比较采用单因素方差分析，两两比较采用q 检验;计数资料及率的比较采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者一般情况 两组患者的年龄、性别构成比，入院时血压、血糖、低密度脂蛋白水平及吸烟、饮酒等因素差异均无统计学意义(P＞0.05，表1)。

表1 脑梗死组与对照组患者一般资料Table 1 The general information of acute cerebral infarction group and controls

2.2 脑梗死组与对照组Hp 感染率的比较脑梗死组中Hp-IgG 阳性患者占78.8%，而对照组占54.0%，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05，表2)。脑梗死组Hp-CagA 阳性患者占66.7%，而对照组占48.0%，两者比较差异也有统计学意义(P＜0.05，表3)。

表2 脑梗死组与对照组患者Hp-IgG 阳性率比较Table 2 Comparision of positive rate of Hp-IgG between acute cerebral infarction group and controls ［n(%)］

表3 脑梗死组与对照组患者Hp-CagA 阳性率比较Table 3 Comparision of positive rate of Hp-CagA between acute cerebral infarction group and controls ［n(%)］

2.3 Hp 感染对急性脑梗死患者血液中CD62p阳性血小板百分率的影响 脑梗死组CD62p阳性血小板百分率高于对照组(P＜0.05)，且Hp-IgG 阳性患者CD62p 阳性血小板百分率高于Hp-IgG 阴性患者(P＜0.05，表4)。

表4 各组间CD62p 阳性血小板百分率的比较Table 4 Comparision of percentage of CD62ppositive platelets between groups(，%)

表4 各组间CD62p 阳性血小板百分率的比较Table 4 Comparision of percentage of CD62ppositive platelets between groups(，%)

与对照组比较，* P＜0.05;与脑梗死Hp-IgG -组比较，△P＜0.05.

脑梗死患者不管Hp-CagA 是否阳性，CD62p 阳性血小板百分率均明显高于对照组(P＜0.05)，且Hp-CagA 阳性患者CD62p 阳性血小板百分率高于Hp-CagA 阴性患者(P＜0.05，表5)。

表5 各组间CD62p 阳性血小板百分率的比较Table 5 Comparision of percentage of CD62ppositive platelets between groups(，%)

表5 各组间CD62p 阳性血小板百分率的比较Table 5 Comparision of percentage of CD62ppositive platelets between groups(，%)

与对照组比较，* P＜0.05;与脑梗死Hp-IgG -组比较，△P＜0.05.

2.4 Hp 感染对急性脑梗死患者凝血功能的影响 脑梗死组Hp-IgG 和Hp-CagA 阳性患者PT、PTR 和INR 3个指标与Hp-IgG 和Hp-CagA阴性患者比较差异无统计学意义(P ＞0.05)，而Hp-IgG 和Hp-CagA 阳性患者APTT、TT 较Hp-IgG 和Hp-CagA 阴性患者缩短，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05)，Hp-IgG 和Hp-CagA 阳性患者FIB 含量较Hp-IgG 和Hp-CagA阴性患者增加，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05，表6)。

3 讨论

本研究采用生物微矩阵(芯片)分析法检测大动脉粥样硬化型和小动脉闭塞型脑梗死患者Hp-IgG 及Hp-CagA 水平，在排除年龄、性别、高血压、糖尿病、吸烟、饮酒、血脂异常等危险因素后，脑梗死组患者的Hp-IgG 及Hp-CagA 阳性率均高于对照组，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05)。这与Bastiani［10］和Diomedi［5］等的研究结果一致，提示Hp 感染可能是脑梗死的危险因素。既往研究认为，Hp 感染通过全身炎性反应、代谢紊乱、直接作用、高凝状态、自身免疫、高同型半胱氨酸血症、血管内皮功能障碍、氧化应激、T 细胞激活等机制而促进脑梗死的发生［11-14］。当Hp 定植于胃黏膜后，一方面诱导宿主产生白介素、肿瘤坏死因子、γ 干扰素等细胞因子加重系统性炎症，另一方面Hp 分泌空泡毒素及细胞毒素相关蛋白A，直接作用于血管壁导致内皮细胞受损及功能紊乱。

表6 脑梗死各组间凝血功能的比较Table 6 Comparision of blood clotting between groups in acute cerebral infarction patients ()

表6 脑梗死各组间凝血功能的比较Table 6 Comparision of blood clotting between groups in acute cerebral infarction patients ()

与IgG-组比较，* P＜0.05;与CagA-组比较，△P＜0.05.

本研究发现，急性脑梗死患者CD62p 阳性血小板率水平明显高于对照组，而脑梗死Hp-IgG 和Hp-CagA 阳性组CD62p 阳性血小板率水平高于脑梗死Hp-IgG 和Hp-CagA 阴性组，两者比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)。血小板活化是促进脑梗死发生的因素之一，Hp感染可能提高了急性脑梗死患者的血小板活化水平，进而参与脑梗死的发生发展。关于Hp感染导致血小板活化的机制可能是:Hp 所产生的CagA 蛋白直接作用于血小板并引起血小板活化，且Hp 所产生的VacA 与血小板的相互作用部位主要是在细胞膜脂质筏(GEMs)［15-16］;Hp 所产生的ureB 与人血小板GPⅢa 具有交叉的抗原识别表位，引起血小板活化［17］。

凝血指标中APTT 反映血浆中凝血因子V、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ及纤维蛋白原水平，是监测内源性凝血系统的常用指标;TT 主要反映血液中是否存在异常抗凝物质，时间延长，说明血液中有微小凝块等异常促凝物存在;FIB 的升高，病理状态下出现在血栓前状态、急性心肌梗死、动脉粥样硬化、自身免疫性疾病、糖尿病及某些恶性肿瘤等。本研究发现在脑梗死患者中Hp 感染对PT、PTR 和INR 影响较小，说明HP 感染对患者外源性凝血系统影响较小。但反映内源性凝血系统功能的APTT 较非HP 感染患者明显缩短，提示Hp 感染严重影响了内源性凝血功能。推测其原因:HP 感染可能通过各种炎症反应或自身免疫反应致血管内皮受损，内皮下组织暴露，激活内源性凝血系统。本研究发现，Hp 感染患者TT 较非Hp 感染患者明显缩短，推测Hp 感染后体内形成的各种炎性物质及免疫复合物是作为异常促凝物质存在于血液内。除此之外，本研究还发现在Hp 感染患者中FIB含量较非Hp 感染患者明显增加，这与前人研究结论一致［18］。但Hp 感染如何增加了血液中FIB 的含量，目前尚不清楚，推测可能与慢性炎症反应及高同型半胱氨酸有关。

综上所述，Hp 感染可能通过增强了脑梗死患者血小板的活化水平、影响内源性凝血功能，进而参与脑梗死的发生和发展，提示早期根治HP 感染及对脑梗死患者尽早应用抗血小板、抗凝、降纤治疗，有可能减少脑梗死的发病和发展。但Hp 感染造成血小板活化和凝血功能改变的机制仍需进一步研究。

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