猴头菌片高产菌株的优选

庄意丽，顾慧芬

（上海市中药研究所，上海 201401）

猴头菌片高产菌株的优选

庄意丽，顾慧芬*

（上海市中药研究所，上海 201401）

目的：分离筛选优质猴头菌菌株。方法：通过组织分离法获得猴头菌的纯培养菌株，对12种不同菌株的猴头菇菌丝长速长势进行评价，并用HPLC法测定腺苷含量作为辅助方法，筛选优质猴头菌菌株。结果与结论：从9个猴头菌株中筛选出优质菌株，其中C-12菌株菌丝日生长速度最快，腺苷含量较高。

猴头菌；优良菌株；腺苷

猴头菇（Hericium erinaceus），味甘、性平、能利五脏、助消化、滋补，对消化不良、神经衰退与十二指肠溃疡及胃溃疡有良好的功效。是一种珍贵药用真菌，随着药用真菌产品的开发，猴头菇质量的好坏，对提高产品质量及产品稳定有着直接影响。猴头菌片是由单味药猴头菌菌丝体组成，为了筛选具有较高稳定性的猴头菌菌株，我们于2010年采集吉林长白山天然鲜野生猴头菇进行组织分离，通过纯化培养［1-5］，筛选出菌丝生长速度快、颜色洁白、菌丝密度大的猴头菌菌株。

根据文献报道猴头菇其有效成分为多糖类和多肽类物质及蛋白质、氨基酸等，还含有相当含量的腺苷成分［6-8］。本试验以腺苷含量测定可作为一种辅助方法对菌丝进行优良鉴别。现将试验结果报道如下。

1 原材料

供试猴头菇均采自吉林长白山天然鲜野生猴头菇。

2 方法

2.1 培养基的制作

PDA培养基：马铃薯200 g，琼脂20 g、葡萄糖20 g，水1 000 mL，自然pH值。

2.2 菌种分离和纯化

以长白山天然鲜野生猴头菇子实体作为多孢分离培养物。选取成熟度50%～60%的幼嫩子实体，择优良种菇，去杂，用75%酒精冲洗种菇表面，再用无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干，通过紫外照射进行表面消毒。切取菇体中间3 mm×3 mm左右菌块接入培养基斜面中央，每种各接种10支试管，然后置于25℃培养箱中培养，每天定时观察记录菌丝体生长状况，从中初筛出猴头菌母种，再进行2次复筛。

2.3 菌丝生长速度比较

平板接种法用于菌丝生长速度的测定。将筛选出的菌株接种于（PDA）平面培养基中，每个猴头菇菌株设5个重复。每平板中心接一块2 mm×2 mm左右的菌种块，于25℃恒温下培养10 d，每日观察记录菌丝生长状况，筛选出生长速度快、长势好、色泽白的优良菌株。

2.4 腺苷含量比较

HPLC法用于测定猴头菌丝体的腺苷含量［9］。

2.4.1 仪器与试药 Agilent-1100高效液相色谱仪系统，VWD检测器，腺苷对照品（中国药品生物制品检定所110879-200202），甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水。

2.4.2 标准品溶液的制备 精密称取恒重的腺苷对照品适量，置25 mL量瓶中，加15%甲醇溶解并稀释至刻度，配置成浓度为0.016 mg·mL－1的腺苷对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备 精密称取猴头菌丝体干粉0.1 g，加入25 mL 15%甲醇超声提取30 min，过滤即得。上样前用0.45μm微孔滤膜过滤。

2.4.4 色谱条件与系统的适用性 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇 －0.01%乙酸 （9∶91）；流速：1.0 mL·min－1；柱温：25℃；检测波长：260 nm；进样量：10μL。在以上色谱条件下测定并记录图谱。

3 结果与分析

3.1 菌株分离培养结果

从12个多孢分离培养物中分离出9株猴头菌株。

3.2 菌丝体生长比较结果

对9个猴头菇菌丝体生长速度的测定及其菌丝长势的观察，筛选出菌丝生长均匀整齐、洁白、生长快、长势好的优良菌株。根据表1数据以及方差分析显示，猴头菇C-12菌丝生长速度与其他菌株菌丝生长速度之间差异达极显著水平，C-3与C-11，C-2与C-9、C-1，C-4与C-6、C-10之间差异均不显著。C-12生长速度为（4.8±0.32）cm／10 d是长势最好的菌株；其次是C-3和C-11；生长较慢的菌株是C-4、C-6和C-10，长势也最差。

表1 菌丝体生长结果（n＝5）

3.3 腺苷含量比较结果

精密称取9个猴头菇菌丝0.1 g，按2.4.3供试品溶液的制备方法，制备成供试品溶液。以浓度为0.003 2 mg·mL－1的腺苷为对照品溶液，按2.4.4项下色谱条件进样10μL，测定腺苷峰面积，计算含量。结果见表2。

液相色谱结果表明，样品色谱图中，在与标准品色谱峰相应的位置上有相同的色谱峰，主峰与其他色谱峰之间分离关系良好。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，标准品浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得到回归方程为：Y＝10.324X－1.244 7，r＝0.999 9。结果表明：腺苷在0.006 4～0.096μg吸收峰的面积与进样量呈良好的线性关系。从表2可以看出C-12号菌株的腺苷含量相对较高。

表2 样品含量测定结果（n＝3）

4 讨论

猴头菇营养价值和药用价值得到广大消费者的认可。为了使猴头菌达到高产、优质、抗逆性强、适应性强的育种目的，本试验采用组织分离法获得猴头菌母种，通过纯化培养，筛选出菌丝生长速度快、色白、菌丝密度大的优质猴头菌菌株，从实验结果可以看出，猴头菌C-12菌株无论从菌丝长势、腺苷含量都是极显著好于其他菌株，可供推广应用。

本试验以腺苷含量可作为一种辅助标准对菌丝进行优良鉴别，采用高效液相色谱法对猴头菌菌丝体中的腺苷进行了含量测定，获得了满意的结果，对判断菌株的优劣提供辅助参考方法。

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［3］胡建伟，龚明福，贾岩峰.猴头菌优良菌株筛选研究初报［J］.食用菌学报，2002，9（4）：44-46.

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Screen the high yielding producing strains for Hericium tablets

ZHUANG Yi-li，GU Hui-fen*
（Shanghai Institute of Chinese Materia Medica，Shanghai201401，China）

Objective：Study on screening of the high qualityHericium erinaceusstrains.M ethodsPure culture strains ofHericium erinaceuswere isolated from its body tissue.Screening of the high quality strains through evaluating the growth of12 kinds of differentHericium erinaceusstrains.Meanwhile，analyzing the contentof adenosine by HPLC was helpful for the screening.Results and ConclusionA pure culture strain named C-12 was selected out as it the highest one in growth and the content of adenosine.

Hericium erinaceus；High quality strains；Adenosine

*［通讯作者］顾慧芬，Tel：（021）37565589，E-mail：ghuif＠126.com

2012-03-22）