结直肠癌组织真核细胞起始因子4E和基质金属蛋白酶－9的表达及临床意义

周 平，徐启革

（淄博市第一医院 病 理科，山东 淄 博255200）

真核细胞起始因子4E（eIF4E）为蛋白生物合成的始动因子，在翻译控制中发挥着重要作用，参与细胞生长调节，并具有抗凋亡作用［1－3］。新近多项研究发现eIF4E与多种恶性肿瘤有密切联系，多种恶性肿瘤中有高表达的eIF4E，可作为一些肿瘤恶性进展的分子标记及预后指标［4－6］。基质金属蛋白酶（MMPs）可以降解基底膜，被认为在肿瘤的侵袭和转移中起到重要作用。eIF4E在结直肠癌中的表达与其临床特征的研究甚少，而在结直肠癌中eIF4E与基质金属蛋白酶－9（MMP－9）的表达的关系如何目前相关的研究缺如。本研究拟探讨结直肠癌患者组织eIF4E和各项临床特征以及MMP－9的表达及两者的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2008年1月至2011年12月在我院收治的确诊结直肠癌的患者80例，所有患者经过手术切除标本或大结肠镜活检组织的病理检查确诊。男52例，女28例，平均年龄51.2（35±63）岁。有淋巴结转移34例，未转移46例。Dukes分期：A期22例，B期35例，C期23例。低分化腺癌45例，高中分化腺癌35例。根治性切除65例，姑息性切除15例。根治术后出现复发转移10例。所有患者术前均未接受、放化疗。

1.2 eIF4E及 MMP－9的免疫组化

取上述入选的结直肠癌患者的癌组织和癌旁正常组织（距癌组织5 cm以上）制成石蜡标本。eIF4E及MMP－9兔抗人多克隆抗体购于sctacruz公司，DAB及兔源组化试剂盒购自丹麦Dako公司。石蜡标本连续切片3μm，高压修复抗原和过氧化氢酶灭活处理后，分别加对应的一抗4℃过夜。PBS冲洗3次，每次5 min后加入二抗，室温孵育30 min，DAB显色，显微镜下观察显色情况，掌握染色时间，苏木素复染，脱水，中性树胶封片。阴性对照采用PBS代替一抗，阳性对照采用已知的肺癌组织切片。

1.3 结果判定

eIF4E及 MMP－9均主要定位于细胞浆，阳性结果以背景清晰并在细胞浆中出现棕黄色颗粒者判断为阳性。根据文献报道的方法，结合阳性细胞所占百分百和染色强度进行半定量分析，在高倍镜下随机选10个不同视野，每个视野计算100个细胞，取平均值。染色强度按下列标准评分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为黄色，3分为棕黄色。染色的阳性细胞所占百分比评分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤25%，2分为26%－50%，3分为51－75%，4分为＞75%。结合染色细胞百分比和染色强度分为：染色强度与阳性细胞所占百分比乘积大于3分为（＋），6－9分为（＋＋），大于9分为（＋＋＋），低于3分为（—）。

1.4 统计学分析

应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。计量资料用均数± 标准差表示，两组比较采用t检验。相关性分析采用Spearman等级相关分析方法。P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 结直肠癌患者组织eIF4E和MMP－9的表达

免疫组化结果显示结直肠癌患者癌组织EIF4E和MMP－9的表达较癌旁正常组织明显升高，其表达主要定位于胞浆。本组资料，EIF4E表达的阳性率为100%，MMP－9表达的阳性率为81.25%。

2.2 结直肠癌患者eIF4E和各项临床特征和MMP－9的关系

结直肠癌患者eIF4E的表达与年龄、肿瘤部位、大小、分化程度、临床分期等无关，与浸润深度和有无转移差异有显著性（P＜0.05）。见表1。

结直肠癌患者eIF4E和MMP－9表达的关系见表2，相关分析结果显示eIF4E和MMP－9表达呈正相关（r＝0.358，P＝0.042）。

3 讨论

eIF4E是一分子量为25KD的多肽，即m RNA帽结合蛋白，在蛋白的起始合成阶段起着重要的作用，与多种恶性肿瘤的发生发展和侵袭转移有关。发现在甲状腺乳头状癌中存在高表达的eIF4E，明显高于癌旁的正常组织和良性腺瘤病变，并且高表达的eIF4E与是否发生甲状腺外侵润和淋巴结转移有关［7］。另一项有关于胆管癌组织的研究则发现胆管癌组织中的eIF4E的表达是与肿瘤组织分化程度、手术方式和有无浸润转移明显相关的［8］。有关大肠癌方面的研究证实了大肠癌组织eIF4E的高表达是发生于癌症的早期［9］。国内外研究证实eIF4E在大肠癌组织的表达明显高于癌旁组织和良性病变组织，并且其表达的阳性率与侵润深度有关，与年龄、性别、肿瘤位置、大小等均无关［9］。本研究结果类似，本组资料显示结直肠癌患者eIF4E的表达与年龄、肿瘤部位、大小、分化程度、临床分期等无关，与浸润深度和有无转移差异有显著性。虽然在本组资料eIF4E的表达与临床分期统计学上无关，但是不同的临床分期eIF4E的表达差异具有一定的趋势，这可能与本组资料的样本数少有关。提示了结直肠癌患者eIF4E的表达与肿瘤的恶性程度有关，可以作为结肠癌恶性程度的一个评价指标，在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。

表1 结直肠癌患者eIF4E和各项临床特征的关系

表2 结直肠癌患者eIF4E和MMP－9表达的关系

基底膜和细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）对肿瘤的转移起着屏障功能。MMP在肿瘤的扩散与转移中起重要作用。目前普遍认为MMP－9在恶性肿瘤的浸润和转移中起着重要作用。MMP－9属于MMPs家族，是一种金属离子依赖的蛋白酶，并且是一种IV型胶原酶，可降解ECM的IV型胶原，除了参与体内多种生理及病理过程，还对肿瘤侵袭及血管形成具有促进作用，研究已经证实它的异常高表达与多种恶性肿瘤的转移和预后密切相关［10－12］。MMP－9参与肿瘤的侵袭和转移主要与下面几方面作用有关：降解ECM，破坏ECM的完整性；促进肿瘤的新生血管形成；调节细胞粘附和生长。既往的研究已经证大肠癌患者癌组织MMP－9的表达水平与其临床分期、是否发生淋巴结转移和肿瘤的侵润深度有关。MMP－9可以作为反映大肠癌侵袭能力的一个指标［13－16］。

肿瘤的发生和发展是多基因、多因素共同作用的结果，是由于肿瘤细胞生长失控以及凋亡基因、凋亡抑制基因功能的改变等多种原因引起的。目前在大肠癌患者中eIF4E与MMP－9表达的关系如何并不清楚。本研究结果显示了结直肠癌患者癌组织eIF4E和 MMP－9的表达较癌旁正常组织明显升高。本组资料，eIF4E表达的阳性率为100%，MMP－9表 达 的 阳 性 率 为 81.25%。eIF4E 和MMP－9表达呈正相关。即eIF4E的高表达会导致MMP－9表达的升高，提示了如果通过有效的措施抑制或降低大肠癌患者eIF4E的表达可能可以降低MMP－9的表达，从而减少肿瘤血管的形成和减少基质降解导致的肿瘤侵袭和转移。最终可以降低肿瘤的生长速度和减少转移率，有利于提高患者的生存率。本研究的意义在于可以为大肠癌的治疗提供新的治疗方向和理论依据。

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