nm23-H1基因与非小细胞肺癌转移的关系

周 霖

深圳市光明新区人民医院外科，广东深圳 518106

nm23-H1基因与非小细胞肺癌转移的关系

周 霖

深圳市光明新区人民医院外科，广东深圳 518106

目的探讨nm23-H1基因表达与非小细胞肺癌转移的关系。方法选择笔者所在医院2006年2月～2011年10月收治的肺癌手术患者46例，应用免疫组织化学SABC方法对46例NSCLC组织标本进行nm23-H1表达的检测。结果46例NSCLC中nm23-H1过度表达为50%（23/46），其中鳞癌nm23-H1过度表达为47.62%（10/21），腺癌为58.33%（7/12），两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）；nm23-H1的阳性表达与淋巴结转移呈负相关（P＜0.01）。结论nm23-H1可作为预测NSCLC淋巴结转移及预后的指标。

非小细胞肺癌；nm23-H1；免疫组织化学；转移

nm23基因是目前研究较多的转移抑制基因，包括nm23-H1和nm23-H2。nm23编码的产物具有抑制肿瘤转移的功能，nm23在分化良好的肿瘤中成高水平表达，且nm23基因表达与淋巴转移成负相关，与无病生存期、整个生存期呈正相关。所以临床检测nm23基因表达高低可作为判断有无肿瘤转移的一个重要目标。

1 材料与方法

1.1 组织标本

选取笔者所在医院2006年2月～2011年10月收治的肺癌手术标本、临床及随访资料齐备的患者46例，其中，男34例，女12例；年龄33～84岁，平均（62.5±3.2）岁；其中鳞癌21例，腺癌12例，大细胞癌5例，小细胞癌8例。标本以10%福尔马林固定，石蜡包埋，肺癌组织学类型按WHO标准分类[1]，组织病理学分级按国际抗癌联合会（UICC）标准[2]。

1.2 PCR引物

根据 Gen Bank Database（ACCESSION X75598）提供的nm23-H1基因全序列，组织DNA根据常规的方法进行提取并有所改进。参考Duenas等[3]的方案，设计扩增nm23-H1基因5个外显子的引物。见表1。

表1 扩增nm23-H1基因外显子的PCR引物

1.3 PCR扩增

PCR反应系统组成为：5 μL 10×反应缓冲液，5 μL 2 mmol/L 4×dNTP（Sigma产品），2 μL 2 mmol/L 上游及下游引物，100 ng模板DNA，2.5 UTaq酶（华美生物工程公司），加超纯水至50 μL。循环条件为：94℃变性1 min，60～64℃退火1 min，72℃延伸1 min，循环30次。

2 结果

2.1 nm23-H1基因缺失与肺癌病理生理的关系

46例肺癌组织标本中14例占30.43%，存在nm23-H1等位基因缺失，均为杂合性缺失，未见纯合性缺失。14例中12例为EcoRⅠ和BglⅡ酶切杂交带均有缺失，2例仅有BglⅡ酶切杂交带缺失，46例癌旁肺组织标本未检测到nm23-H1基因缺失。nm23-H1阳性颗粒主要位于胞浆中。见图1。

46例NSCLC中nm23-H1过度表达为50%（23/46），其中鳞癌nm23-H1过度表达为47.62%（10/21），腺癌为58.33%（7/12），两者比较差异有统计学意义（P＜0.05），在SCLC中未见有nm23-H1表达。本研究中nm23-H1等位基因缺失与肺癌原发肿瘤大小、部位、病理类型、细胞分化程度、TNM分期以及患者性别和年龄均无明显关系（P＞0.05）。nm23-H1等位基因缺失与肺癌病理生理特征的关系见表2。

图1 nm23-H1在肺中分化腺癌胞浆、核膜中呈阳性表达（ABC×200）

2.2 nm23-H1等位基因缺失与肺癌转移的关系

46例中16例伴有淋巴结转移，其中10例占62.5%存在nm23-H1等位基因缺失；不伴淋巴结转移的30例中，仅4例占13.3%存在等位基因缺失。两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。见表3。

表2 nm23-H1基因缺失与肺癌病理生理的关系

表3 nm23-H1基因缺失与肺癌转移的关系

3 讨论

nm23-H1等位基因缺失在不同的肿瘤存在较大差异。相关报道[4]在人乳腺癌、非小细胞肺癌（NSCLC）、肾癌和大肠癌中nm23-H1等位基因缺失率为33.3%、25%、8%和12.5%。本研究中46例NSCLC癌中14例检测出nm23-H1等位基因缺失，缺失率为30.43%，略高于Leone等的报道。这可能是经两种酶切后检测到的nm23-H1等位基因缺失率较用一种酶切的缺失率高的结果。nm23-H1常由于等位基因缺失，低表达及突变而失活，功能或（和）结构异常的nm23-H1基因常与肿瘤的转移表型有关，如乳腺癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤和卵巢癌等[5]。笔者检测46例NSCLC标本，共检测到14例占30.43%存在nm23-H1等位基因缺失，观察到nm23-H1等位基因缺失与肺癌转移有密切关系。

[1]洪雷，崔雅静，姜达，等.胸苷酸合成酶多态性与非小细胞肺癌易感性及淋巴结转移的关联性研究[J].河北医药，2011，33（24）：3744-3746.

[2]郑海霞，申东兰，周清华，等.nm23-H1基因逆转肺癌细胞转移表型的功能鉴定 [J].北京大学学报（医学版），2005，V37（3）：335-336.

[3]Duenas Gonzalez A，Abad Hernandez MM，Garria Mata J，et al.Analysis of nm23-H1 expression in breast cancer. Correlation with p53 expression and clinicopathologic findings[J].Cancer Lett，1996，101（2）：137-142.

[4]黄宗海，苏国强，毛乾国，等.血管内皮生长因子与nm23-H1基因在青年女性乳腺癌组织中的表达及其与预后之间的关系[J].第一军医大学学报，2004，24（12）：1398-1401.

[5]梅同华，李长毅，黄爱龙.非小细胞肺癌nm23-H1等位基因缺失与淋巴结转移关系的研究[J].第三军医大学学报，2005，6（12）：1266-1268.

R734.2

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2095-0616（2012）12-36-02

2012-04-17）