蓝萼香茶菜不同部位蓝萼甲素的含量测定及采收期考察

王强，郎轶咏，任常顺，朱晓红，于晓黎

(解放军第202医院，辽宁 沈阳 110003)

*

郎轶咏，E-mail：langyiyong0452@126.com

蓝萼香茶菜不同部位蓝萼甲素的含量测定及采收期考察

王强，郎轶咏*，任常顺，朱晓红，于晓黎

(解放军第202医院，辽宁 沈阳 110003)

目的考察蓝萼香茶菜不同部位蓝萼甲素的含量及最适采收期。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为岛津C18ODS，流动相为甲醇-水(60∶40)，流速为0.9 mL·min-1，柱温为25 ℃，于波长234 nm条件下对样品中蓝萼甲素的含量进行测定。结果以叶中蓝萼甲素含量最高，且7、8月份采集的叶中蓝萼甲素含量较高。结论蓝萼香茶菜应在夏季采收，并以叶入药为宜。

蓝萼香茶菜；蓝萼甲素；高效液相色谱法

唇形科香茶菜属植物在我国资源丰富，蓝萼香茶菜Rabdosiajaponica(Burm.f.)Hara var.glaucocalyx(Maxim.)Hara有较好的心血管作用，系我国首先发现[1-3]，从该植物中分离得到的二萜单体蓝萼甲素glycocalyxin A具有显著的增加小鼠心肌营养性血流量作用和抗血小板凝集作用。蓝萼甲素是该植物的有效成分之一[4-5]。为了了解该成分在植物体内的分布及不同生长期的消长情况，确定正确的采摘期及最佳入药部位，以便更好地利用植物资源，我们研究建立了蓝萼香茶菜中蓝萼甲素含量测定方法，考察蓝萼香茶菜不同部位及不同采收时间的蓝萼甲素含量。

1 仪器与试剂

高效液相色谱仪LC-20AT(日本岛津)。蓝萼甲素对照品(解放军第二军医大学天然药化教研室提供，高效液相色谱归一化法测定纯度为99.3%)，蓝萼香茶菜根、茎、叶分别于2010年7～9月采自辽宁千山、沈阳、丹东、本溪、抚顺，采样信息见表1。经第二军医大学药学院郑汉臣教授鉴定为蓝萼香茶菜Rabdosiajaponica(Burm.f.)Hara var.glaucocalyx(Maxim.)Hara的根、茎、叶。流动相为色谱用甲醇，其余试剂均为分析纯。

表1 蓝萼香茶菜样品信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱为岛津C18ODS；柱温为25 ℃；流动相为甲醇-水(60∶40)；流速为0.9 mL·min-1；检测波长为234 nm；进样量为20 μL。理论板数按蓝萼甲素峰计应不低于3 000，与相邻峰的分离度不小于1.5。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取100 mg蓝萼甲素对照品，置100 mL容量瓶中加适量甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。HPLC图见图1。

2.3 样品溶液的制备

分别精密称取样品粗粉10 g，以乙醚150 mL提取，以甲醇5 mL溶解残留物，滤液加入150 mg活性炭脱色，过滤，溶液挥干，干法上硅胶柱(8.0 cm×150 cm，200～300目，5 g)，分别以三氯甲烷-丙酮(15∶1，7∶1)100 mL洗脱，以TLC[硅胶G板，三氯甲烷-丙酮(10∶1)展开，硫酸-甲醇为显色剂，蓝萼甲素为对照]检查，收集含蓝萼甲素各段，水浴蒸干，以甲醇10 mL溶解，微孔滤膜(0.45 μm)过滤，移至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，备用。HPLC图见图2。

图1 蓝萼甲素对照品的HPLC图

图2 蓝萼香茶菜提取物HPLC图

2.4 线性关系考察

精密吸取以上蓝萼甲素贮备液0.1，0.2，0.4，0.5，0.6 mL置于25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL，以峰面积与对应浓度(μg·mL-1)绘制标准曲线，得回归方程：Y=11 301X+33 708，r=0.996 4。结果表明蓝萼甲素浓度在4～24 μg·mL-1与峰面积呈良好线性关系。

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度试验 取浓度为12 μg·mL-1的蓝萼甲素对照品溶液，重复进样5次，测得峰面积的RSD=0.43%。结果表明精密度良好。

2.5.2 稳定性试验 取蓝萼香茶菜叶(千山样品，7月份采集)，按2.3项下方法制备，分别于制备后0，1，3，5，7 h依法测定，结果峰面积的RSD=1.47%。

2.5.3 重现性试验 取蓝萼香茶菜叶(千山样品，7月份采集)5份，分别按2.3项下方法制备，测定其蓝萼甲素的峰面积，计算RSD=2.09%。

2.5.4 回收率试验 取已知含量的蓝萼香茶菜叶(千山样品，7月份采集)150 mg，精密加入蓝萼甲素对照品(1.25 mg·mL-1)溶液1 mL，按2.3项下方法制成供试液，每次进样20 μL，测定蓝萼甲素的含量，计算加样回收率，结果见表2。

2.6 样品测定结果

取样品溶液，每批样品5份，用甲醇适当稀释后取20 μL注入液相色谱仪测定，结果见表3、4。

表2 蓝萼香茶菜中蓝萼甲素加样回收率试验

注：蓝萼甲素对照品加入量均为1.250 mg

表3 不同地区7月采摘的蓝萼香茶菜根、茎、叶中蓝萼甲素的含量(n=5) /%

表4 不同地区不同采摘时间蓝萼香茶菜叶中蓝萼甲素的含量(n=5) /%

3 讨论

将同一批蓝萼香茶菜均匀样品粉末分别用水、乙醇和乙醚提取，结果表明，乙醚提取的效率最佳，水的提取效率最差。因此采用乙醚回流提取，将提取物用甲醇溶解后上硅胶柱可对提取物中蓝萼甲素进行富集，去除不必要杂质，提高含量测定的准确度。

经测定分析发现，不同部位中蓝萼甲素的含量以叶中最高；不同采集期以7、8月份含量较高，9月末含量下降，这可能和植物的生长周期有关，抚顺、千山的蓝萼香茶菜中蓝萼甲素含量较高。实验结果表明，蓝萼香茶菜应在夏季采收，并以叶入药为宜。

[1] 任常顺，叶丽卡.香茶菜属植物研究进展[J].辽宁药物与临床，2002，5(2)：91.

[2] 桂明玉，金永日，刘松艳，等.蓝萼香茶菜化学成分研究Ⅱ[J].中国药学杂志，2000，35(6)：374-375.

[3] 金永日，桂明玉，王宝珍.蓝萼香茶菜根化学成分研究[J].中国中药杂志，2000，25(11)：678-679.

[4] 杨秀伟，赵静.蓝萼香茶菜化学成分的研究[J].天然产物研究与开发，2003，15(6)：490-493.

[5] 项昭保，徐一新，陈海生，等.蓝萼香茶菜化学成分研究[J].中成药，2009，31(5)：763-764.

DetectContentsofGlaucocalyxinAinRabdosiajaponicavar.GlaucocalyxDifferentPartatDifferentCollectedTime

WANG Qiang,LANG Yi-yong, REN Chang-shun,YU Xiao-li

(No202thhospitalofPLA,Shenyang110003,China)

Objective:To study content of glaucocalyxin A in different part ofRabdosiajaponicavar.Glaucocalyxat different collected time and select the perfect time.MethodsHPLC was used to detect the content of glaucocalyxin A. HPLC separation was performed on Symmetry C18column with a solvent system of methanol-water(60∶40). The detection wavelength was 234 nm. The flow rate was 1 mL·min-1. The column temperature was 25 ℃.ResultsThe content was the highest in leaves of Rabdosia japonica var which was collected in July and August.ConclusionRabdosiajaponicavar.Glaucocalyx’s leaves should be collected at summer.

Rabdosiajaponicavar.Glaucocalyx; Glaucocalyxin A; HPLC

2011-12-09)