XT-4000i血液分析仪血小板两种测定方法与血涂片复检的对比

王晓贤 刘洁 周永红

XT-4000i血液分析仪血小板两种测定方法与血涂片复检的对比

王晓贤 刘洁 周永红

目的分析血液分析仪XT-4000i血小板两种测定方法的准确性和血涂片复检的关系。方法选取50例电阻抗法(PLT-I)计数正常无提示有血小板直方图异常的标本，50例PLT-I计数大于100 ×109/L并提示有血小板直方图异常(小红细胞和红细胞碎片)的标本和50例PLT-I计数小于100× 109/L并提示有血小板直方图异常(大血小板和血小板聚集)的标本，用光学法(PLT-O)计数血小板和涂片镜检观察血小板数量和形态分布并间接计数血小板的数量，以镜检法为参考方法，评价电阻抗法和光学法的准确性。结果50例电阻抗法(PLT-I)计数正常无提示有血小板直方图异常的标本用阻抗法和光学法检测血小板与显微镜法对比差异无统计学意义(P＞0.05)。在小红细胞组、红细胞碎片组和大血小板组中，电阻抗法和镜检法的计数结果差异有统计学意义(P＜0.05)，光学法和镜检法的计数结果差异无统计学意义(P＞0.05)，光学法的准确性优于电阻抗法。但在血小板聚集组中，电阻抗法和镜检法的计数结果差异有统计学意义(P＜0.05)光学法和镜检法的计数结果差异有统计学意义(P＜0.05)。结论光学法能较好地消除小红细胞、红细胞碎片和大血小板等因素对血小板计数的影响，但无法消除血小板聚集对计数血小板的影响，应与显微镜法复核，使结果更准确、可靠。

血小板计数;电阻抗法;光学法;显微镜间接计数法

目前，全自动血液分析仪对血小板的计数方法有电阻抗法和光学法。由于血小板特殊的生理特点，血小板计数易受大血小板、血小板聚集和红细胞等因素的干扰而影响计数结果。本文使用电阻抗法与光学法同时进行血小板计数并与人工镜检法进行对比，评价电阻抗法和光学法的差异性及临床应用。

1 材料与方法

1.1 仪器 日本Sysmex XT-4000i全自动血液分析仪，湖北武汉致远的EDTA-K2抗凝管，奥林巴斯双目光学显微镜。

1.2 试剂 采用Sysemx XT-4000i全自动血液分析仪及原装配套试剂。定期开展质控和较准，严格按照仪器操作作业指导书的要求执行进行检测，检测前仪器状态良好，血涂片染色液采用瑞氏染色。

1.3 方法 从我院住院和门诊患者用Sysemx XT-4000i检测血常规的标本中遵循不重复的原则选取50例电阻抗法(PLTI)计数正常无提示有血小板直方图异常的标本为A组，50例PLT-I计数大于100×109/L并提示有血小板直方图异常(小红细胞和红细胞碎片)的标本为B组和50例PLT-I计数小于100×109/L并提示有血小板直方图异常(大血小板和血小板聚集)的标本为C组，用光学(PLT-O)计数血小板和涂片镜检观察血小板数量和形态分布并间接计数血小板的数量。血涂片的制作参照《临床检验基础》第4版的标准，要求厚薄适宜，头体尾分明，边缘整齐。血涂片自然干燥后用瑞氏染液染色后镜检，观察区域从约50% 的红细胞互相重叠区域开始，并向红细胞完全散开的区域推移，用油镜观察血小板的形态和数量［1］。正常情况下，在血片厚薄适中区域(每个红细胞彼此相互接触但不重叠)，每个油镜视野，约有血小板8～15个［2］;少于8个/油镜视野可初步认为血小板减少，大于30个/油镜视野则可初步认为血小板增加。油镜下的细胞形态异常判断标准:①小红细胞:直径小于6 um。②红细胞碎片:各种不完整形状的细胞碎片。③血小板聚集:血小板5个以上成堆。④巨、大血小板:直径6 um以上或直径4～6 um［3］。显微镜间接计数血小板:按照Sutor AH等［4］人推荐的方法，在血片体尾交界处区，采取城垛式计数方式无重复的计数100个血小板(N目测血小板数)和所涉及的视野中所有的白细胞的总数(N目测白细胞数)，对于血小板严重减少的患者，计数不少于50个血小板;以仪器计数的白细胞数(N仪器×109/L)为参考，计算出血小板的总数，血小板数量N=(N目测血小板数/N目测白细胞数)×N仪器×109/L［1］。以镜检法为参考方法，评价电阻抗法和光学法的准确性。

2 结果

2.1 3种方法血小板计数结果及直方图异常标本中存在的干扰因素见表1。

涂片显示小红细胞、红细胞碎片、大血小板、血小板聚集是病理标本中常见的干扰物质。以镜检法为参考方法，在A组中分别与电阻抗法比较P＞0.05，与光学法比较P＞0.05，因此电阻抗法被大部分仪器应用。

2.2 干扰因素对光学法和阻抗法PLT计数结果的影响分析见表2。

在小红细胞、红细胞碎片和大血小板组中，电阻抗法和镜检法的计数结果差异有统计学意义(P＜0.05)，光学法和镜检法的计数结果差异无统计学意义(P＞0.05)，光学法的准确性优于电阻抗法。但在血小板聚集组中，电阻抗法和镜检法的计数结果差异有统计学意义(P＜0.05)光学法和镜检法的计数结果差异有统计学意义(P＜0.05)，光学法也存在局限性。

3 讨论

血小板计数是止血凝血检查最常用的试验之一。传统的电阻抗检测技术，单纯靠细胞体积一个检测参数，无法有效区分其他干扰物质，特别是无法区分病理样本中的大血小板、小红细胞以及细胞碎片。为了提高血小板计数结果的准确性，近年来光学法血小板计数被逐渐应用到自动血液分析中。本文观察光学法能较好地消除小红细胞、红细胞碎片和大血小板等因素对计数血小板影响，但无法消除血小板聚集对计数血小板的影响。与仪器自动计数血小板相比，血涂片观察血小板有其显著的优点。在显微镜下，通过肉眼能直观地区分血小板、红细胞、细胞碎片，观察血小板聚集情况，能直接排出大血小板、小红细胞、细胞碎片和血小板凝集对血小板的干扰，并能直接计数各种细胞的比例，这就是显微镜镜检间接计数血小板可行性的理论基础［1］。临床实际工作中可用PLT-I法作为常规标本检测，当遇到某些特殊标本(如混有大型血小板或小球性红细胞时或细胞碎片等)，提示PLT-I结果可信度低(血小板异常)，建议使用PLT-O法再次检测，使血小板结果更加可信，这样可节约试剂成本、降低复查次数，但在一些特殊病例如EDTA依赖性的血小板聚集时应与显微镜法复核，使结果更准确、可靠。

［1］刘善凤，王利民，曾筱倩，胡丽华.涂片镜检对初步纠正血小板假性降低的意义.临床血液学杂志，2010，23(4):193-195.

［2］朱忠勇.应用血液分析仪后复查血片的内容和方法及程序.中华医学检验杂志，2003，26(12):785-787.

［3］朱忠勇.准确计数血小板方法学研究进展.国外医学临床生物化学与检验分册，2002，23:121-125.

［4］ANTON H SUTOR，M D.ASTRIDGROH MANN，etal.Problems with platelet counting in thrombocytopenia.A rapidmanualmethodtomeasur e lowplatelet counts.Seminar s in thrombosis and hemostasis，2001，27(3):237-243.

350009 福建省福州市第一医院检验科

1.4 统计学方法 以镜检法为参考方法，分别与电阻抗法和光学法进行配对t检验和分析。所有数据使用SPSS 10.0软件进行统计分析。

表1 3种方法血小板计数结果及标本中存在的干扰因素(x±s，×109/L)

干扰因素组别 例数 电阻抗法 光学法 镜检法 小红细胞 红细胞碎片 大血小板 血小板聚集A组 50 191±49.2 195±47.3 197±49.8无 无 无 无B组 50 249±82.9 200±83.2 203±85.4 15 35 无 无C组 50 66.8±13.4 92.3±15.6 94.7±16.1 无 无30 20

表2 干扰因素对光学法和阻抗法PLT计数结果的影响分析(x±s，×109/L)

注:与镜检法比较，［1］P＜0.05;［2］P＜0.05

例数 电阻抗法 光学法 镜检102±8.6 203±97.5 200±99.4红细胞碎片 35 257±101［1］237±103 240±106大血小板 30 75.4±8.3［1］94.6±7.9 96.0±8.5血小板聚集 20 53.9±8.1［2］58.4±8.4［2］组别法小红细胞 15 229±99.0［1］