90例强直性脊柱炎活动期患者单核细胞中CD28、CD80、CD86表达的临床意义

刘广州

90例强直性脊柱炎活动期患者单核细胞中CD28、CD80、CD86表达的临床意义

刘广州

目的探讨CD28、CD80、CD86在90例强直性脊柱炎患者外周血单核细胞中表达的临床意义。方法选择我院骨伤科2011年6月至2012年6月经相关检查确诊的强直性脊柱炎患者180例，其中活动期患者90例，稳定期患者90例，另选90例体健正常的人群做为对照组，提取外周血单核细胞，采用Taqman探针实时荧光定量PCR方法检测CD28、CD80、CD86的表达。结果强直性脊柱炎患者单核细胞CD28、CD80、CD86表达明显高于对照组，且活动期组患者高于稳定期组患者(P＜0.01)。结论

CD28、CD80、CD86表达升高可增加强直性脊柱炎的发病率。

强直性脊柱炎;CD28、CD80、CD86;表达

强直性脊柱炎(AS)是一种原因不明的全身慢性结缔组织疾病，发病诱因不太明确，目前认为可能与遗传、慢性感染、内分泌紊乱有关［1］。病变主要累及骶髂关节、髋关节、椎间关节等。临床分为三期，即早期、活动期、稳定期。研究发现AS患者骨、关节、滑膜组织内有大量炎性T细胞、单核巨噬细胞侵润。本研究测定了180例强直性脊柱炎患者的外周血单核细胞中表达水平，并探讨了其与强直性脊柱炎的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院骨伤科2011年6月至2012年6月经相关检查确诊的强直性脊柱炎住院患者180例，分为，Ⅰ组:活动期组90例(男45例，女45例);Ⅱ组:稳定期组90例(男45例，女45例);另选90例体健正常的人群做为对照组(男45例，女45例)。排除标准:急、慢性肝肾疾病及感染性疾病;恶性肿瘤及血液系统疾病;正在使用激素类药物。

1.2 方法

1.2.1 RNA的提取 取患者和正常对照组患者外周血5 m l，EDTA-Na2抗凝，1 h内提取外周血单核细胞，PBS洗涤一次，所提取的总RNA以1∶50稀释，用紫外分光密度仪监测其在OD260nm，OD260nm处比值为1.9，在1.8和2.0之间。在含量为1.5%琼脂糖凝胶的平板上进行电泳，完整性良好。

1.2.2 逆转录 以mRNA为模板逆转录.

1.2.3 引物及Taqman探针的设计及合成，由上海捷瑞公司设计提供。见表1。

1.2.4 标准中的CD28、CD80、CD86 mRNA的测定使用Real-MasterMix Probe试剂盒，，用本实验室已构建的内参基因ABL质粒标准品倍比稀释做标准曲线。采用相对定量的方法，将目的基因(CD28、CD80、CD86)与内参基因ABL拷贝数的比值取对数值为最终有效数据来进行统计分析。

1.2.5 统计学方法 利用SPSS 17.0统计软件，采用独立样本资料的t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

采用相对定量方法，AS活动组患者共刺激分子CD28、CD80、CD86表达均高于对照组(P＜0.05)，AS活动期患者。见表2。

表1

表2

3 讨论

AS是脊柱关节病的一种类型，主要累及骶髂关节、髋关节、椎间关节等，特征是持续性炎症，炎症严重程度不等。AS好发于青少年，男女比例约为2.5∶1。此病的病因及发病机制尚不明确，从流行病学调查发现，基因和环境因素在本病的发病中发挥作用，目前认为其发生与遗传、慢性感染、自身免疫功能紊乱和内分泌失调等有关［2］。免疫调节以及免疫功能紊乱在粤杂患者的发病过程中起着重要作用。国内外免疫功能紊乱方面的主要发现是AS患者骨、关节及滑膜组织内有大量炎性T细胞、单核原巨噬细胞浸润，存在T细胞应答和Th1/Th2细胞因子平衡偏移等。AS患者外周血淋巴细胞以Th1型细胞为主，随着炎症的活动，Th1细胞的分化能力似Th2细胞下降。推测其发病与Th1型细胞因子增多、Th2型细胞因子减少有关［3］。本研究通过检测AS活动期患者外周血单个核细胞上的共刺激分子mRNA的表达，探讨AS的免疫学机制。

T细胞的激活需来自细胞外的信号刺激，第一信号(抗原特异的识别信号)和第二信号(表达于T细胞表面的膜蛋白分子及其配体介导的共刺激信号)，T细胞被这两个信号激活后才能发挥其免疫功能，共刺激分子中最重要的是T细胞表面的CD28及其相应配体CD80和CD86，CD28与CD80结合可促进Th1细胞增殖，CD28与CD86结合Th2细胞增殖［4］。本室建立了采用荧光定量PCR的方法监测CD28、CD80、CD86及ABLm-RNA的新方法。研究发现AS活动组患者共刺激分子CD28、CD80、CD86表达均高于对照组，提示CD28、CD80、CD86的异常表达可能引起与AS相关的免疫功能的紊乱。

综上所述，AS患者共刺激分子异常表达，可能与AS的发生发展有密切联系，在临床上监测患者刺激分子异常表达水平有助于AS诊断和治疗。

［1］HOWARD L.M.KOHM A P.CASTANEDA C L，etal.Therapeutic blockade of TCR signal trasduction and co-stimulation in autoim mune disease.Curr Drug Targets Inflamm Allergy.

［2］王斌，王萍萍.援强直性脊柱炎发病机制的研究进展.四川医学，2008，29(10):409-412.

［3］董青，杨达人，刘华.HLA-B27阳性强直性脊柱炎患者免疫功能和血液流变性的检测.中国血液流变学杂志，2006，16(2): 273-275.

［4］翟士军，苏成海.B7-CD28家族分子的免疫调节功能及临床应用.放射免疫学杂志，2008，21(6):575-578.

467500 河南省汝州市第一人民医院骨伤科

刘广州 E-mail:569629808@qq.com