胞磷胆碱钠片的稳定性研究

赵先亮，王士立

(1.济南利民制药有限责任公司，山东 济南250200;2.山东省医药生物技术研究中心，山东济南250200)

胞磷胆碱钠片中有效成分胞磷胆碱(cytidine diphosphate choline)为胞嘧啶核苷二磷酸胆的碱简称，为核酸类衍生物，对各种脑损伤引起的意识障碍，包括精神、行为、记忆、学习有明显改善，所以胞磷胆碱在中风药物中列为神经保护剂。除改善中风后症状及患者各项中枢神经功能外，对帕金森综合征［1］、痴呆症［2］、青光眼［3］亦有一定疗效。目前国内生产厂家仅有两家，为满足市场需要，我公司对胞磷胆碱钠片进行了研发，通过对胞磷胆碱片的光照试验、加速试验及长期室温留样试验观察，以含量作为考察指标，为药品储存、有效期的确定提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SeriesIII Laballiance型高效液相色谱仪，WD－B恒温加速试验箱(天津药典标准仪器厂)，GZX－250光照箱(北京中兴伟业仪器有限公司)。

1.2 药品与试药 胞磷胆碱片(济南利民制药有限责任公司生产，批号090406、090407、090408)，乙腈(色谱纯;美国天地)，磷酸(分析纯;莱阳康德化工有限公司)。

2 试验方法与结果

2.1.1 检测方法 色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液－甲醇(95∶5)为流动相，流速1 mL·min－1;柱温30℃，检测波长为276 nm。取5'－胞苷酸25 mg，置100 mL的量瓶中，加水稀释制成每1 mL中含0.25 mg的溶液，取上述溶液适量，与胞磷胆碱钠对照品溶液等量混合，摇匀，取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，胞磷胆碱钠与5'－胞苷酸的分离度应符合要求。

2.1.2 测定法 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于胞磷胆碱25 mg)，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液;另取105℃干燥4 h的胞磷胆碱钠对照品适量，用水制成每1 mL中约含胞磷胆碱0.25 mg的溶液，作为对照品溶液。取上述溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算即得。

2.1.3 线性试验 精密称取105℃干燥4 h的胞磷胆碱钠对照品21.70 mg(中检所提供，含量以胞磷胆碱计95.69%)置25 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别取1、2、3、4、5 mL至10 mL的容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。进样10 μL，记录色谱图。得回归方程:A=9.61 ×103C －5.71×104，r=0.999 6，结果表明胞磷胆碱在 83.06 ～415.29 μg·mL－1范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2 胞磷胆碱片的稳定性研究

2.2.1 光照试验 取本品(批号:090406)，除去外包装，开口置玻璃平皿中，放于GZX－250光照箱，照度为(4 500±500)lx中，分别于第5、10天取样，依上述方法测定含量，并与0 d的结果进行比较，观察样品在强光照射下的稳定性，结果见表1。

表1 胞磷胆碱钠片强光照射试验结果(批号090406)

2.2.2 高温试验 取本品(批号:090406)，除去外包装，置玻璃平皿中，于60℃恒温箱中放置，分别于第5、10天取样，按考察项目检查和测定，并与0 d的结果进行比较，观察样品在高温条件下的稳定性，结果见表2。

表2 胞磷胆碱钠片高温试验结果(批号090406)

2.2.3 高湿试验 取本品(批号:090406)，除去外包装，开口置玻璃平皿中，于25℃、相对湿度RH(90±5)%的密闭容器中放置，分别于第5、10天取样，按考察项目检查和测定，并与0天的结果进行比较，观察样品在高湿条件下的稳定性，结果见表3。

表3 胞磷胆碱钠片高湿试验结果(批号090406)

2.2.4 经典恒温加速试验 取胞磷胆碱钠片三批(批号090406、090407、090408)在市售包装条件下，于温度(40±2)℃、(50±2)℃、(60±2)℃和 RH(75±5)%的条件下，放置6个月，分别于 0、1、2、3、6个月各取样，依法测定含量。以lgC和时间t作回归曲线，根据一级动力学公式:

当前，国内城市地铁大多采用110/35kV的两级电压集中供电方式。这种供电方式主要由外部电源、主变电所、中压环网、牵引变电所和降压变电所构成。每个主变电所从城市电网引入2路110kV电源互为备用，降压至地铁所需的35kV中压系统，然后通过中压环网向牵引变电所和降压变电所供电。中压环网采用分区供电，几个相邻的牵引变电所通过串接的方式构成一个供电分区。主变电所向每个供电分区的一个变电所供电，分区的其他变电所则通过串接的方式获得电源。各个牵引变电所之间通过交流电缆连接，这样就构成了地铁的集中供电系统，如图2所示。

V=KC，即 dC/dt=KC

K=dC/C×1/dt

积分得:K=(1/t)×ln(Ct/C0)

即:lnCt=lnC0+Kt

分别计算出40、50、60℃的K值，结果见表4。

表4 胞磷胆碱钠片加速试验结果(批号090406)

2.2.5 有效期估算 经典恒温加速试验的理论依据是arrhenius方程:K=Ze－E/RT，经推导换算得通式为:lnK=A+B/T，K 为负数则为 ln(－ K)=A+B/T［4］。

式中:T为绝对温度;R为气体常数;E为活化能，对某一具体反应为常数;K为速度常数，是化学反应的一个特征数值，与浓度无关。

根据上式及一级动力学公式lnCt=lnC0+Kt计算得出K25℃的值，再依据t=(1/K)×ln(Ct/C0)估算有效期，其中C0为每批的初始含量，Ct为本品规定的最低含量限度，根据表4至表6数据可以看出，随着胞磷胆碱钠的分解含量降低，有关物质增加，为保证有效期内有关物质符合规定，确定Ct为 95.0%，结果见表 5、表 6。

表5 三批胞磷胆碱钠片动力学数据

表6 K25℃及有效期

根据090407批、090409批加速试验结果，同法计算，其回归方程分别为:ln(－K)= －8 172.4/T+20.03、ln(－K)=－9 764.3/T+24.90，得出其估算有效期分别为83个月、135个月。

2.2.6 长期稳定性试验 样品批号:090406，090407，090408。按上市包装，置温度(25±2)℃、相对湿度(60±10)%的条件下放置36个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、36个月末取样，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较，结果见表7。

3 讨论

本研究重点考察了胞磷胆碱钠片的化学稳定性，主要采用了光照试验、60℃高温试验、高湿试验、经典恒温热加速试验、长期试验。加速试验是在超常条件下进行的，其目的在于通过加速药物的化学或物理变化，观察药物的稳定性，预测其有效期，为药品储存、有效期的确定提供实验依据。

3.1 光照试验 本品在强光条件下考察10 d，外观、有关物质、溶出度、含量等各项理化指标基本无明显改变，表明本品在强光条件下性质基本稳定。

3.2 高温试验 本品在60℃高温条件下考察10 d，外观、有关物质、溶出度、含量等各项理化指标基本没有明显改变，表明本品在高温条件下性质基本稳定。

3.3 高湿试验 本品在高湿条件下考察10 d，外观、有关物质、溶出度、含量等各项理化指标基本没有明显改变，表明本品在高湿条件下性质基本稳定。

3.4 经典恒温热加速试验 由经典恒温热加速试验结果表明，三批样品的回归方程分别是ln(－K)=－8 533.4/T+21.14、ln(－K)= －8 172.4/T+20.03、ln(－K)= －9 764.3/T+24.90，分解5%的时间分别是100个月，83个月，135个月，说明胞磷胆碱钠片具有非常好的稳定性，考虑到产品市场消耗周期及销售后的环境变动等因素，可将本产品有效期定为36个月。

3.5 长期试验 通过对三批样品长期试验考察，在36个月内样品质量同0月相比基本没有变化，与经典恒温热加速试验预测有效期吻合。

［1］Ross BM，Mamalias N，Moszczynska A，et al.Elevated activity of phospholipid biosynthetic enzymes in substantia nigra of patients with Parkinson's disease［J］.Neuroscience，2001，102(4):899 －904.

［2］王晓燕.胞磷胆碱钠的临床应用［J］.华夏医药，2003，7(3):73－75。

［3］Rejda R，Toezolowski J，Kurkowski J，et al.Oral citicoline treatment improves visual pathway function in glaucoma［J］.Med Sci Monit，2003，9(3):124 －128.

［4］赵先亮，周曰玲，张翠娟.酪酸梭菌二联活菌散及胶囊的加速稳定性试验［J］.齐鲁药事，2009，28(4):241－244.