左旋泮托拉唑钠有关物质测定方法研究

陶亚成，朱思思，韩继永

(江苏奥赛康药业股份有限公司，江苏南京211112)

泮托拉唑钠为H+－K+－ATP酶泵抑制剂，直接作用于胃壁内质子泵，用于治疗胃及十二指肠溃疡和反流性食管炎等。左旋泮托拉唑钠为泮托拉唑钠的左旋体，具有比泮托拉唑钠消旋体更强的药理作用。本文主要根据不同药典标准中泮托拉唑钠的有关物质测定方法对左旋泮托拉唑钠进行研究，并对方法和结果进行比较和分析。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC－20AT高效液相色谱仪、LC－Solution色谱工作站(日本岛津制作所);BP211D电子天平(塞多利斯公司);雷磁PHS－3C精密pH计(上海精密科学仪器有限公司)。

1.2 试药 乙腈，HPLC 级，Tedia Company，Inc.;磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾，分析纯，南京化学试剂有限公司;磷酸，分析纯，北京益利精细化学品有限公司;超纯水，自制。左 旋 泮 托 拉 唑 钠 (批 号:S20081001、S20081101、S20081102，江苏奥赛康药业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 泮托拉唑钠有关物质检查法及限度比较，结果见表1(见下页)。

2.2 系统适用性试验溶液制备 取左旋泮托拉唑钠、杂质B、杂质C适量，照各标准下方法用适宜溶剂稀释制成适宜浓度，量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表2。

表2 各版药典有关物质系统适用性试验比较

结果表明，采用上述条件左旋泮托拉唑钠与杂质B、C分离度均符合要求，CP2005版的杂质B出峰较迟，但基线稳定;BP2009版和USP32版的条件相同，由于梯度变化较快，基线不稳定，且主峰拖尾，可见有杂质峰分离度不理想。CP2010版的梯度程序变化较BP2009版和USP32版缓和，主峰理论板数较高，各杂质间的分离度良好，基线在45 min内较为稳定。

表1 泮托拉唑钠有关物质检查法及限度比较

2.3 样品测定 取本品适量，照各标准测定有关物质，结果见表3。

表3 左旋泮托拉唑钠有关物质检查结果对比(单位:%)

采用以上四版药典收载的有关物质测定法进行测定，结果基本一致。综合考虑各条件的优劣，我们分别采用CP2005版条件和CP2010版条件，并适当调整后，进行方法学对比研究。

2.4 已知杂质定位及分离度考察 取左旋泮托拉唑钠适量，用溶剂制成每1 mL约含0.4 mg的溶液;另取杂质A、B、C、D+F、E适量分别用溶剂溶解并稀释成每1 mL约含40 μg的溶液，滤过。

量取上述溶液各1 mL置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为混合溶液，精密量取上述溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。

结果表明，在上述两种有关物质测定方法中，左旋泮托拉唑钠峰与各杂质峰及各杂质峰之间均分离良好。

2.5 溶液稳定性试验溶液制备 精密称取左旋泮托拉唑钠适量，分别按《中国药典》2005年版和2010年版泮托拉唑钠有关物质项下方法试验，分别于0、2、4、6、8 h取样测定，考察左旋泮托拉唑钠在溶液中的稳定性。在《中国药典》2005年版条件下，样品溶液0 h杂质1个(相对保留时间为0.59)，8 h 杂质5 个(相对保留时间分别为 0.21、0.22、0.30、0.59、0.77)，且各杂质的峰面积逐渐增大。而《中国药典》2010年版条件下，样品溶液0～8 h内，杂质仅1个，且峰面积无明显变化(杂质平均含量0.014%，RSD为9.18%)。

结果表明，在《中国药典》2005年版条件下，左旋泮托拉唑钠在流动相中稳定性较差，配制6 h，杂质个数和杂质量明显增加，溶液配制后应在4 h内使用。在《中国药典》2010年版条件下，样品在溶液中8 h内基本稳定。

2.6 破坏性试验 分别取左旋泮托拉唑钠适量(约10 mg，CP2005版置50 mL量瓶中;CP2010版置25mL量瓶中)，进行如下试验:①酸破坏:加 0.1 mol·L－1盐酸溶液 5 mL，摇匀，置室温下放置 5 min，用 0.1 mol·L－1氢氧化钠溶液中和;②碱破坏:加1 mol·L－1氢氧化钠溶液5 mL，摇匀，置室温下放置2.5 h;用1 mol·L－1盐酸溶液中和;③氧化破坏:加0.9%过氧化氢5 mL，摇匀，置室温放置5 h;④高温破坏:加流动相或溶剂使溶解，置80℃水浴上，加热1 h后，放冷;⑤日光破坏:加流动相或溶剂使溶解，置日光条件下放置4 h，见图 2。

结果表明，在《中国药典》2005年版和2010年版两种有关物质测定条件下，左旋泮托拉唑钠在酸、高温、氧化条件下均有不同程度的破坏，在日光条件下不稳定，在碱性条件下基本稳定。各条件下产生的降解产物峰与主峰分离良好，各杂质峰的保留时间均在主峰保留时间的4倍以内。

对各破坏性试验下的色谱峰进行峰纯度分析，结果表明，在本条件下，主峰的色谱峰纯度值均大于999.0，提示主峰为单一色谱峰。

图1 已知杂质定位及分离度考察

图2 破坏性试验

2.7 定量限及检测限 《中国药典》2005年版:取左旋泮托拉唑钠适量，用流动相溶解并逐步稀释测定，进样体积20 μL，S/N 约为10时，即定量限为1.28 ng，S/N 约为3时，即检测限为0.38 ng。2010年版:取左旋泮托拉唑钠适量，用溶剂溶解并逐步稀释测定，进样体积20 μL，S/N约为10时，即定量限为4.22 ng，S/N 约为3 时，即检测限为 1.26 ng。

2.8 重复性试验 同一批样品测定6份，计算杂质A含量0.013%，RSD=5.72%;其他杂质未检出。

2.9 校正因子试验 按《中国药典》2010年版取左旋泮托拉唑钠和杂质A、杂质B(起始原料)、杂质C、杂质D+F、杂质E适量，精密称定，置同一量瓶中，加溶剂溶解并制成每1 mL中各约含0.4 mg的溶液，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。连续测定5次，结果以左旋泮托拉唑钠为参照，杂质A的校正因子为1.03(RSD 为0.27%，相对保留时间约0.94)，杂质 B 的校正因子为0.96(RSD为0.51%，相对保留时间约1.32)，杂质C的校正因子为0.30(RSD为0.34%，相对保留时间约0.72)，杂质D+F的校正因子为1.10(RSD为0.57%，相对保留时间约1.10)，杂质E的校正因子为1.09(RSD为0.32%，相对保留时间约1.14)。

2.10 加样回收率试验 取杂质A、杂质B(起始原料)、杂质C、杂质D+F、杂质E适量，精密称定，置同一量瓶中，用溶剂溶解并稀释制成每1 mL约含各杂质0.4 mg的溶液，摇匀，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，作为对照品贮备液;另取左旋泮托拉唑钠约10 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，平行9份，分成3组，分别精密加入对照品贮备液 2.0、2.5、3.0 mL，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。再精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。按加校正因子的自身对照法计算各杂质含量，结果表明，杂质A、杂质B(起始原料)、杂质C、杂质D+F、杂质E的回收率结果均在90% ～110%之间，均符合规定。

2.11 耐用性试验 左旋泮托拉唑钠在柱温、流速、色谱柱型号、流动相pH等色谱条件产生微小变化时对有关物质的测定基本无影响，理论板数以左旋泮托拉唑钠计均在2 500以上，各杂质与左旋泮托拉唑钠的分离度及各杂质之间的分离度均符合要求，表明本方法的耐用性良好。

3 讨论

综上所述，《中国药典》2010年版、《英国药典》2009年版及《美国药典》32版泮托拉唑钠的有关物质方法中流动相组成、溶剂、检测波长及柱温条件一致，在梯度程序方面略有不同，《中国药典》2010年版的梯度程序相比较为平缓，试验结果显示《中国药典》2010年版中左旋泮托拉唑钠峰的理论板数最高。而通过比较《中国药典》2005年版和2010年版两种方法，结果显示2005年版条件与2010年版条件相比，左旋泮托拉唑钠溶液的稳定性较低，已知杂质岀峰时间较长，且峰形也较差。而有关物质限度要求，《英国药典》2009版最高，美国药典32版次之，《中国药典》2005年版的限度要求最低。采用《中国药典》2010年版的有关物质条件进行的方法学试验说明本方法适用于左旋泮托拉唑钠的有关物质检测。

为保证临床用药安全，故在左旋泮托拉唑钠的质量控制过程中，有关物质检测方法采用《中国药典》2010年版条件下泮托拉唑钠的有关物质方法进行检测，而杂质限度参照《英国药典》2009版进行严格控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版(二部)［S］.北京:化学工业出版社，2005:367－368.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:504－505.

［3］British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia［S］.London:The Statimary Office，2009:4536 －4540.

［4］United States Pharmacopoeia Committee.United States Pharmacopoeia［S］.32th edition.Washington DC:The U-nited States Pharmacopeial Convention Inc，2009:3200.