反相高效液相法测定氯唑沙宗片含量及溶出度

北京市房山区药品检验所（102400）李灵 刘德江 张宁

氯唑沙宗片为中枢性肌肉松弛剂，临床上用于各种急、慢性软组织扭伤、挫伤，运动后肌肉酸痛，肌肉劳损所引起的疼痛，由中枢神经病变引起的肌肉痉挛以及慢性筋膜炎等。中国药典尚未收载该药，目前，氯唑沙宗片的检验标准为国家食品药品监督管理局发布的国家药品标准WS1-（X009）-2005Z[1]。此标准中依然采用紫外分光光度法测定含量和溶出度。本文建立了反相高效液相色谱法测定氯唑沙宗片含量及溶出度，该方法操作简便，测定结果准确，重复性好。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20A高效液相色谱仪，SPD-20A紫外检测器，多赛利斯CP225D电子天平。氯唑沙宗片6批，规格为0.2g，厂家及批号见附表1。氯唑沙宗对照品购于中国药品生物制品检定所（批号100364-200301，100.0%）。甲醇为进口色谱纯试剂，水为重蒸水。

2 溶液的制备

2.1 对照品储备液 取氯唑沙宗对照品约10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。

2.2 对照品溶液 取氯唑沙宗对照品约10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5mL，置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10μg/mL的对照品溶液。

2.3 供试品溶液 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氯唑沙宗10mg），置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，即得浓度为10μg/mL的供试品溶液。

3 色谱条件

岛津LC-20A高效液相色谱仪，SPD-20A检测器，GL inertsil DOS-SP色谱柱（5020-02745，4.6mm×15cm，5μm），流动相为甲醇-水（60∶40），检测波长为280nm，流速为1.0mL/min，进样量为20μL。

4 方法与结果

4.1 耐用性和系统适用性 取对照品溶液，在不同品牌色谱柱和不同的流动相比例下分别进样，比较分析，考察方法的耐用性，测定结果见附表2。在上述色谱条件下，氯唑沙宗理论塔板数为7438，色谱图见附图所示。

4.2 线性关系考察 精密量取对照品储备液1、2、5、10、15、20mL，分别置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按照“2.2”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，以峰面积对浓度进行线性回归，得到回归方程为：Y=375.76X+23.15（R2=1）。

试验结果表明，在2～40μg/mL范围内氯唑沙宗浓度与峰面积之间有良好的线性关系。

4.3 精密度试验 取“2.2”项下氯唑沙宗对照品溶液，按照“3”项下色谱条件重复进样5次，求得峰面积的RSD为0.0068%。

4.4 重复性试验 取氯唑沙宗对照品，按“2.2”项方法制成含氯唑沙宗10μg/mL的溶液5份，分别按“3”项下色谱条件测定，求得含量均值为9.95μg/mL，RSD为0.18%，试验结果表明该方法有较高的重复性。

附图 氯唑沙宗对照品色谱图

附表1 供试药品厂家、批号及规格

附表2 不同色谱柱及流动相比例下的保留时间

附表3 加样回收率

附表4 新方法与原方法含量测定结果

附表5 新方法与原方法溶出度测定结果

4.5 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的氯唑沙宗片（批号20110101，含量93.1%）共9份，分别精密添加一定量的对照品，按“2.3”项下方法操作，分别精密量取20μL，注入色谱仪并记录色谱图，结果见附表3，平均回收率为100.2%，试验结果表明该方法的回收率良好。

4.6 稳定性试验 取含量测定项下溶液置于室温放置，分别于2，4，6，8，24，48小时进样分析，同时记录色谱图，求得峰面积的RSD为0.076%，试验结果表明含量测定用溶液室温放置至少可稳定48小时。

4.7 含量测定 取氯唑沙宗对照品及片剂，分别按照“2.2”和“2.3”项下方法，制备对照品溶液和供试品溶液，精密量取20μL，注入色谱仪并记录色谱图，供试品图谱与对照品图谱一致，按外标法以峰面积计算供试品的含量，并同时按原标准测定含量，结果见附表4。

4.8 溶出度测定 按国家药品标准WS1-（X009）-2005Z溶出方法取样，用流动相配制成含氯唑沙宗10μg/mL的供试品溶液，按照“2.2”项下方法制备对照品溶液，分别精密量取20μL，注入色谱仪并记录色谱图，供试品图谱与对照品图谱一致，按外标法以峰面积计算供试品的溶出度，并同时按原标准测定溶出度，试验结果见附表5。

5 讨论

5.1 测定波长的选择 分别扫描了以60%甲醇，0.1mol/L的NaOH溶液和0.1mol/L的HCl溶液为溶剂时氯唑沙宗的紫外光谱图，确定测定波长为280nm，在此波长下无杂质干扰，专属性好。

5.2 流动相的选择 根据参考文献[2][3][4][5]，确定流动相为甲醇-水（60∶40），简单易配制，且较为环保。

5.3 供试品溶液处理方法的选择 国家药品标准WS1-（X009）-2005Z中含量测定和溶出度测定分别采用0.1mol/L的NaOH溶液和稀盐酸为溶剂制备供试品和对照品，操作耗时，需要配置多种溶液造成浪费。本方法中采用流动相为溶剂制备含量测定和溶出度供试品及对照品，方法更具有系统性，更适于检验工作人员操作。