黄曲霉毒素B1对肉鸡实验性肝损伤的影响研究

， *，

(1.浙江大学动物科学学院，浙江杭州 310013；2.杭州唐天科技有限公司)

亚太地区，饲料原料和配合饲料中以黄曲霉毒素、赭曲霉素、橘霉素、T-2毒素、呕吐毒素(DON)、串珠镰孢菌毒素和玉米赤霉烯酮等的危害最为严重。Sway等(2005)分析了配合饲料样品中的黄曲霉毒素、烟曲霉毒素、赭曲霉毒素、T-2毒素、DON和玉米赤霉烯酮，超过90%的样品中都含有以上6种霉菌毒素[1]。

长期饲用含有霉菌及霉菌毒素的饲料可导致畜禽生长受阻，生产性能下降,畜禽处于亚健康或弱体质状态，给养殖业带来严重危害和经济损失，尤以黄曲霉毒素B1(AFB1)的毒性最强，长期采食含有此类毒素的饲料可使动物发生肝癌等病变，是目前发现的最强致癌物[2]。本试验的目的是探究AFB1导致肉鸡肝损伤模型，并确定其剂量与作用时间，为生产实践提供理论支持和今后研究提供依据。

1 材料与方法

1.1试验材料

试验动物：1日龄罗斯308肉鸡96羽，由浙大正大种禽公司提供。

黄曲霉毒素B1(AFB1)：购自FERMENTEK公司，纯度≥98%。批号：AF022a。

二甲基亚砜(DMSO)：购自国药集团化学试剂有限公司。批号：20100528。

1.2试验设计 建立肝脏损伤模型，试验分3组，每组32羽。详见表1。

表1 试验设计及分组

试验在浙江大学动物科学学院抗生素替代物实验室饲养基地进行，木屑垫料平地饲养，自由采食，充足饮水。

对照及试验Ⅰ～Ⅱ组肉鸡从8日龄开始连续6 d分别嗉囊注射DMSO 0.1 mg/kg体重，AFB10.1 mg/kg体重和AFB10.2 mg/kg体重。

饲养期14 d。育雏期间按常规方法饲养管理。日粮组成及营养成分，详见表2。

1.3样品采集 在注射DMSO及AFB1后第3 d和第6 d空腹称重、抽血，每组剖杀6羽，采集肝脏、十二指肠组织，福尔马林保存用于HE染色制作切片。

1.4观察指标 测定短期内注射AFB1对肉鸡生长性能的影响及肉眼观察临床症状与肝脏组织、十二指肠组织病理变化情况。

表2 日粮组成及主要营养成分

2 结果与分析

2.1短期内注射AFB1对肉鸡生长性能的影响 详见图1。

图1 短期内连续注射AFB1对肉鸡生长性能的影响

由图1可见，短期内注射AFB1(0.1 mg/kg体重和0.2 mg/kg体重)与对照组(注射DMSO 0.1 mg/kg体重)，对肉鸡生长性能无明显影响。在试验期内各组肉鸡均无死亡。

2.2短期内注射AFB1临床症状和肉眼观察 试验组与对照组相比，注射AFB1组肉鸡饮水采食情况正常，但精神略显萎靡，表现略见虚弱。注射第5 d后，试验鸡出现腿软，很少站立；皮肤发紫，体躯有多处出血部位。且注射AFB10.2 mg/kg体重比AFB10.1 mg/kg体重组，情况更为严重。

2.3注射AFB1后对肉鸡肝脏组织损伤的病理切片比较 详见表3、图2。

表3 注射AFB1后对肉鸡肝脏损伤程度的肉眼观察

由图2可见，注射AFB1后肉鸡肝脏出现明显的颗粒变性、水泡变性和脂肪变性。

2.4注射AFB1后肉鸡十二指肠组织损伤的病理切片比较 详见图3。

由图3可见，注射AFB1后肉鸡十二指肠黏膜上皮细胞绒毛有明显的断裂和逐渐脱落现象。

3 讨论与结论

3.1本试验采用嗉囊注射AFB1的肉鸡，人工诱发肉鸡肝脏损伤模型。注射5 d后，试验鸡出现腿软，很少站立；皮肤发紫，体躯有多处出血部位，这与丁伯良(1991)[3]报道基本一致。

试验表明，肝脏病理组织学变化为严重的颗粒变性，水泡变性和脂肪变性[4]。AFB1在肠道吸收，经门静脉入肝，由于肝组织具有细胞膜通透性高、内皮细胞不完整等特点，因而可使血液中大部分毒物，包括分子和离子状态甚至与蛋白结合的毒物进入肝组织，与肝组织结合的速度非常迅速；且肝细胞内还含有特殊的结合蛋白，与毒物的亲和力较强。

图2 注射AFB1后对肉鸡肝脏组织损伤的病理切片比较

另外，由于肝细胞的膜孔较一般细胞的大，是毒物在体内进行生物转化和排泄的主要器官，AFB1在肝组织中通过羟化和去甲基生成的物质也有毒性，所以AFB1侵入肝组织的量大于侵入其他器官的量，受AFB1的毒害也最严重。

图3 注射AFB1后肉鸡十二指肠组织损伤的病理切片比较

3.2试验可见十二指肠黏膜上皮细胞绒毛有断裂和逐渐脱落现象。随着注射AFB1时间持续，十二指肠黏膜受到的破坏逐渐加重，表现为线粒体肿胀，部分线粒体充满球形致密物质，是蛋白性酶的复合物，或嵴内腔某些变性产物的贮集，是细胞不可逆病变的标志[5]。

试验证明，线粒体是与细胞合成和分泌等功能密切相关的细胞器，其结构的破坏可使细胞的分裂、分泌功能受到破坏，加剧畜禽的发病和死亡。

3.3AFB1系剧毒物质，实际生产中畜禽多为长期摄入导致慢性中毒，尤其是幼龄畜禽比成年畜禽对黄曲霉毒素的易感性更强，造成的危害也更严重[6]。症状主要表现为：影响动物的生长、繁殖，抑制动物的生长速度，降低饲料转化效率，降低产仔数，影响禽类的产蛋率和孵化率等[7-8]。

侯然然等(2008)[9]报道，采食含AFB1日粮后肉鸡羽毛蓬乱、精神萎靡、食欲不振，体重、平均日增重、平均日采食量显著下降，料重比升高。据王勇(2010)[10]报道，AFB10.1 mg/kg体重可使肉仔鸡平均日增重显著降低，料重比显著升高，平均日采食量下降。以上报道与本试验结果短期内注射AFB1对肉鸡饮水采食情况正常，体重无明显变化的情况基本不符，表明AFB1对肉鸡肝脏和十二指肠的受损影响是个渐进过程。其具体受损机理及影响程度有待进一步研究探讨。

[1]H.V.L.N.Sway. 亚太地区霉菌毒素：普遍性、负面影响、经济后果及其控制策略(上)[J].饲料广角,2005(9):46-48.

[2]冯梅菊.霉玉米对畜禽的危害及防范措施[J].今日畜牧兽医,2008(3):6-63.

[3]丁伯良.畜禽黄曲霉毒素中毒病理学研究概况[J].国外兽医学-畜禽疾病,1991(12):6-9.

[4]刘艳丽，汪铭书，程安春,等.人工感染黄曲霉毒素雏鸭的病理学动态变化[J].中国兽医科学,2006,36(5):396-400.

[5]王春梅，黄晓峰，杨家骥.细胞超微结构与超微结构病理基础[M].西安：第四军医大学出版社，2004:72-77.

[6]Klein P J,Van-Vleet T R,Hall J O,et al.Biochemical factors underlying the age-related sensitivity of turkeys to aflatoxin B1[J].Comparative Biochemistry and Physiology.Part C,2002,132:193-201.

[7]Lindemann M D,Blodgett D J,Komegay E T,et al.Potential ameliorator of alfatoxicosis inweaning/growing swine[J].Journal of Animal Science,1993,71:171-178.

[8]Verma J,Swain B K,Johri T S.Effect of various levels of aflatoxin and combinations thereof on protein and energy utilization in broilers[J].Journal of the Science of Food and Agriculture,2002,82:1412-1417.

[9]侯然然,郑姗姗,张敏红,等．葡甘露聚糖对饲喂黄曲霉毒素B1日粮肉仔鸡生长性能、血清指标及器官指数的影响[J]．动物营养学报,2008a,20(2):146-151．

[10]王勇.黄曲霉毒素降解酶对饲喂含AFB1日粮肉仔鸡生长性能及健康的影响[D].保定:河北农业大学,2010.