样本前处理对神经元特异性烯醇化酶检测的影响

徐文莉，廖长征，李 康（广东省深圳市龙岗中心医院 518116）

神经元特异性烯醇化酶（NSE）是存在于神经细胞中的一种糖酵解酶，与细胞的分解、成熟有关，参与神经细胞的能量代谢，神经细胞受损后，NSE随细胞的崩解而释放入血液中，成为细胞受损的重要标志［1］。多种神经系统疾病，如脑肿瘤、脑外伤、细菌性脑膜炎、病毒性脑炎、结核性脑膜炎患者中发现血液中NSE浓度升高，并且与脑损伤关系密切［2］，同时NSE又可作为小细胞肺癌的一个诊断［3］。检测结果受溶血、时间以及温度的影响［4－5］，其结果的真实性文献报道和可靠性受到影响。寻找有效的控制方法，对分析质量是十分重要的。本实验旨在探讨样本前处理对NSE检测的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年3月来门诊健康体检者30例，男15例，女15例。

1.2 仪器与试剂 Roche E170全自动电化学发光分析仪，试剂、校准品由该仪器厂家提供，质控品为BIO－RAD质控。

1.3 方法 （1）每例采集静脉血标本2份，并立即送入本科室，标本分为两组，A组将标本左右摇动后离心，B组不摇动直接离心，3 000r／min离心5min，离心完毕后，从B组吸取200 μL血清后，血清组为B1组，在用加样器的枪头将其打匀，然后再对B组离心，此组命名为B2组，所有标本离心在1h内完成。（2）仪器准备及检测：BIO－RAD质控进行室内质控，确定其仪器状态稳定后，再分别检测样本NSE含量，重复检测2次，取均值。

1.4 统计学方法 采用SPSS11.0统计软件进行统计分析。实验结果以表示，采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3组NSE测定结果 3组NSE测定结果分别是：A组（18.533±3.253）ng／mL、B1组（10.360±2.129）ng／mL、B2组（14.223±2.805）ng／mL。A组与B1组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；A组、B1组与B2组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 3种方法NSE测定结果统计图 见图1。

图1 3种方法NSE测定结果统计图

3 讨 论

1965年科学家发现了一种大量存在于脑组织中但并不存在于非神经组织中的可溶性酸性蛋白质，后来人们发现此种蛋白质特异性存在于神经元中，具有烯醇化酶活性，故将其命名为 NSE［6］。

NSE是烯醇化酶基因超家族成员之一，是糖酵解的重要酶，主要参与糖酵解，可催化2－磷酸甘油裂解生成磷酸烯醇式丙酮酸和水，对体内糖代谢和三磷酸腺苷的产生具有重要作用。烯醇化酶由α、β、γ3种亚基以二聚体的形式组成5种同工酶。其同工酶可分为αα、ββ、γγ、αβ、αγ。其中γ亚基主要存在于神经组织中，γγ、αγ组成的同工酶特异的存在于神经元和神经内分泌细胞的胞浆中［7］。NSE是一种重要的肿瘤标志物，在小细胞肺癌、神经母细胞瘤、Whims瘤、乳腺癌、胃癌、淋巴瘤中均可有表达。其中NSE水平升高以小细胞肺癌最为显著［3］，同时血清NSE是脑损伤特异性标志物，其含量对脑细胞及血管损伤程度和预后具有临床实用价值［2］，所以检测结果的准确性对临床诊断非常重要。有关NSE临床意义方面的文章报道较多，但对NSE检测结果影响因素方面的文章较少，文献报道温度、时间、溶血对NSE检测结果有影响。温度和时间这2个方面的因素可以较好地控制，但影响溶血方面的因素往往控制不够。实验室在取到标本离心后，一般通过肉眼观察标本是否有溶血，但较轻的溶血通过肉眼是很难识别的，往往认为合格的标本才进行检测。本研究处理标本时采用了不同的处理方法，采集的血清经肉眼观察，判断不出是否溶血，然后对其上机检测。本实验结果显示，3组间比较差异有统计学意义，A组结果最高，可能原因在于样本左右摇动对细胞损伤较大，细胞中的NSE进入到血清中。由此可见标本的处理对NSE的检测结果具有较大的影响，可导致假阳性，因此在标本处理过程中要注意。本实验中只采集了健康人标本，标本处理方法影响大，但未采集患者标本，处理方法对其影响有多大目前尚不清楚，以后的工作应采集患者标本为临床提供更有效的数据。

在临床工作中，使用普通真空管采集标本较多，血清分离时间较长［8］，但NSE标本要即时分离血清，检验人员取到标本后，往往将标本左右摇动再离心，或者直接离心，但离心后血清中有血凝块，用加样器吸走然后吹打，再离心，有可能导致NSE结果偏高产生假阳。不同人员在处理标本时，摇动的力度可能不同，对细胞的损伤程度也不一，结果可能不同，本实验提示在处理标本时，不要对标本摇动或吹打。在检验实践中，检验结果的准确性除受检验方法灵敏度、精确度和影响外，来自标本自身的影响也是一个不可忽视的因素，同时为标本的处理提供了规范性的操作。

［1］ 李洪智.乙脑患儿血清和脑脊液中NSE含量变化与临床的关系［J］.中国实用神经疾病杂志，2011，14（8）：12－15.

［2］ Dalal I，Tzhhori S.Cytokine profile in celebrospinal fluid in children wit h epidemic encephalitis B［J］.Pediatr Neurol，2010，38 （3）：312－317.

［3］ 杨上英，曹颖平.肺癌肿瘤标志物的研究进展［J］.国际检验医学杂志，2008，29（11）：1010.

［4］ 张林.验证溶血对NSE检测结果的影响［J］.安徽医学，2011，15（10）：1238－1239.

［5］ 张亚松，肖登岩，麦富巨.温度、时间及溶血对全血标本中NSE测定的影响［J］.医学临床研究，2008，25（7）：1193－1197.

［6］ 邱全曜，缪明永.神经元特异性烯醇化酶［J］.生命的化学，2008，28（4）：439－442.

［7］ Tracy MR.Neuron－specific enolase is increased after non con vul sive status epilepticus［J］.Mol Biol，2009，341（4）：1015－1021.

［8］ 杨九华，刘万利，吕礼应.分离胶真空采血管样本保存时间对血糖测定结果的影响［J］.安徽医学，2010，4（5）：550－551.