葛根及川芎合用对缺血再灌注大鼠保护作用的研究

黄安安，高 丽

（遵义医学院附属医院，贵州遵义563000）

葛根及川芎合用对缺血再灌注大鼠保护作用的研究

黄安安，高 丽

（遵义医学院附属医院，贵州遵义563000）

目的研究葛根及川芎合用对缺血再灌注大鼠的保护作用，为临床提供数据参考。方法 选取120只SD大鼠分为正常对照组，假手术组，模型组，葛根联合川芎高、中、低剂量组，葛根组，川芎组。正常对照组、假手术组、模型组均给予等体积生理盐水灌胃；葛根联合川芎高、中、低剂量组分别给予8、4、2g／kg葛根及川芎灌胃；葛根组给予4g／kg葛根灌胃；川芎组给予4g／kg川芎灌胃。灌胃时间为再灌注0、6h时。测定脑组织含水量，神经功能缺损评分及脑组织肿瘤坏死因子（TNF－α）、白细胞介素－6（IL－6）的含量。结果模型组与正常对照组比较大鼠脑组织含水量、神经功能缺损评分及TNF－α、IL－6的含量明显增加，差异有统计学意义（P＜0.01）。葛根联合川芎高、中剂量组及葛根组、川芎组与模型组比较大鼠脑含水量及TNF－α、IL－6的含量明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结论葛根及川芎合用对缺血再灌注大鼠可起到保护作用，其机制可能与降低脑组织含水量、改善神经功能以及降低脑炎症因子含量有关。

葛根；川芎；脑缺血；再灌注损伤

葛根为豆科植物野葛的干燥根，习称野葛。其化学成分主要包括有葛根素、黄豆苷和黄豆苷元。川芎为伞形科植物川芎的干燥根茎，其化学成分主要包括川芎嗪、阿魏酸和藁本内酯类化合物。二者在临床上常联合用于治疗心脑血管疾病，本研究建立大鼠脑缺血再灌注模型，采用两药联用探讨其对心脑血管的保护作用，为临床用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料 选取清洁级SD大鼠，雌雄合用，体质量（200±20）g，购自重庆医科大学动物实验中心。葛根及川芎购自遵义医学院附属医院中药房，经鉴定为豆科植物野葛的干燥根及形科植物川芎的干燥根茎。葛根及川芎水提液由本实验室自制，即将药材分别粉碎后加水浸润1h，然后分别加水8倍、6倍煎煮2次，第1次2h，第2次1h，抽滤，合并滤液，浓缩到500 mL，相当于原药材0.4／mL，0～5℃冷藏备用。

1.2 仪器与试剂 采用全自动酶标仪MK3（美国THERMO公司）；低温离心机3K15（德国SIGMA公司）；烘箱Z91－2290－81［艾普瑞（上海）精密光电有限公司］；天平FA1004N（上海天普分析仪器有限公司）。肿瘤坏死因子（TNF－α），白细胞介素－6（IL－6）酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒购自南京建成生物工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 复制模型 根据Borti等［7］方法制作大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）型，腹腔注射10% 水合氯醛（350mg／kg）以麻醉大鼠，分离、结扎并切断右侧颈外动脉，由颈外动脉残端沿颈总和颈内动脉缓慢插入头端膨大的尼龙鱼线约18mm，阻塞大脑中动脉入口造成缺血。缺血3h后拔出栓线进行24h再灌注。假手术组仅分离颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉但不插线。

1.3.2 分组与给药 选取120只SD大鼠分为正常对照组（等容生理盐水）、假手术组（等容生理盐水）、模型组（等容生理盐水）、葛根联合川芎高、中、低剂量组（8、4、2g／kg）、葛根组（44g／kg）、川芎组（4g／kg）。灌胃给药，灌胃时间为再灌注0、6h时。

1.3.3 脑组织含水量的测定 灌注24h后，分别腹腔注射10% 水合氯醛（350mg／kg）麻醉大鼠，迅速断头取脑，称质量，记录。将脑组织置于80℃烘箱内烘烤48h，称干质量，记录，按EIIis公式计算含水量:脑组织含水量＝（湿质量－干质量）／湿质量×100%。

1.3.4 神经功能评分 灌注24h后，参照Bederson等［3］分级方法观察大鼠神经行为学变化，进行行为学评分。0级:无神经功能缺失症状；1级:提尾时病灶对侧肢体屈曲；2级:除1级征象外伴有向病灶对侧的侧推阻力下降；3级:除1、2级征象外伴有活动时向瘫痪侧旋转征象。

1.3.5 脑组织中TNF－α及IL－6的测定 灌注24h后，取大鼠脑组织，准确称质量，按质量（g）与体积（mL）为1∶9的比例加9倍体积的PBS，冰水中匀浆，3 000r／min离心后取上清液待测。酶标仪分别在492nm及450nm波长下测定TNF－α及IL－6的含量。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行t检验，数据资料以±s表示，组间采用t检验，用Spearman等级相关分析相关性，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 葛根及川芎合用对模型大鼠脑组织含水量的影响 模型组与正常对照组比较大鼠脑组织含水量明显增加（P＜0.01）。葛根联合川芎高、中剂量组及葛根组、川芎组与模型组比较大鼠脑组织含水量明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。4g／kg葛根联合川芎降低模型大鼠脑组织含水量的功效等同与4g／kg葛根或川芎单一用药时的功效；8g／kg葛根联合川芎降低模型大鼠脑组织含水量的功效优于与4g／kg葛根或川芎单一用药时的功效（P＜0.05），结果见表1。

表1 葛根及川芎合用对模型大鼠脑组织含水量的影响

2.2 葛根及川芎合用对模型大鼠神经功能评分的影响 模型组与正常对照组比较大鼠神经功能缺损评分明显上升（P＜0.01）。葛根联合川芎高、中剂量组及葛根组、川芎组与模型组比较大鼠脑组织含水量明显下降（P＜0.05或P＜0.01）。4 g／kg葛根联合川芎改善模型大鼠神经功能缺损状态的功效等同于4g／kg葛根或川芎单一用药时的功效；8g／kg葛根联合川芎改善模型大鼠神经功能缺损状态的功效优于4g／kg葛根或川芎单一用药时的功效（P＜0.05），结果见表2。

2.3 葛根及川芎合用对TNF－α及IL－6的影响 模型组与正常对照组比较，TNF－α及IL－6含量明显增加，差异有统计学意义（P＜0.01）。葛根联合川芎高、中剂量组及葛根组、川芎组与模型组比较，TNF－α及IL－6含量明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。4g／kg葛根联合川芎改善 TNF－α及IL－6水平等同于4g／kg葛根或川芎单一用药时的效果；8 g／kg葛根联合川芎改善TNF－α及IL－6水平明显优于4g／kg葛根或川芎单一用药时的效果，差异有统计学意义（P＜0.05），结果见表3。

表2 葛根及川芎合用对模型大鼠神经功能评分的影响

表3 葛根及川芎合用对TNF－α及IL－6的影响

3 讨 论

缺血性脑血管病在缺血和再灌注早期伴随着细胞因子、黏附分子表达并促使缺血性损伤向炎性损伤转变及脂质过氧化、神经细胞凋亡［4－12］。本实验中大鼠缺血再灌注24h后，TNF－α及IL－6含量明显较正常对照组增加，用药后有所改善，单用葛根或川芎（4g／kg）降低模型大鼠TNF－α及IL－6水平的效果与葛根（2g／kg）联合川芎（2g／kg）合用相同，但弱于相同剂量下两药合用的效果。

有研究表明，葛根与川芎均能改善缺血再灌注大鼠神经功能状态［13］。本研究发现，在缺血再灌注24h后，大鼠出现神经功能障碍，模型大鼠神经功能缺损评分明显升高，脑组织水含量明显增加，经药物干预后情况有所改善，单用葛根或川芎（4g／kg）降低模型大鼠神经功能缺损评分及脑组织含水量的效果与葛根（2g／kg）联合川芎（2g／kg）合用相同，但弱于相同剂量下两药合用的效果。

本研究显示，经药物干预的模型大鼠，TNF－α、IL－6含量明显减低，神经功能缺损评分及脑含水量降低。说明改善缺血再灌注大鼠状态以葛根及川芎合用为好，且效果好于单一味药的使用。

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The proective effect of Puerarialobata and rhizoma Chuanxiong on ischemia reperfusion rats

Huang An＇an，Gao Li
（The Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Zunyi，Guizhou563000，China）

ObjectiveTo study Puerarialobata and Rhizoma Chuanxiong combination on ischemia reperfusion in rats and the protective effect，and provide reference data for clinical.Methods120SD male rats were divided into normal control group，sham operation group，model group，Puerarialobata and Chuanxiong in high，medium and low dose group，Puerarialobata group and Chuanxiong group.Normal control group，sham operation group，model group were given equal volumes of saline lavage；Puerarialobata and Chuanxiong high，medium and low dose group were given 8g／kg，4g／kg，2g／kg kudzuvine root and Rhizoma Chuanxiong gavage；Puerarialobata group was given 4g／kg kudzu gavage；Chuanxiong group was given 4g／kg Chuanxiong gastric perfusion.Gastric lavage for reperfusion 0h，6h.Detecting the water content of brain，neural function defect score and brain tumor necrosis factor，interleukin6content.ResultsIn the model group and normal control group comparison of rat brain water content，neural function defect score and tumor necrosis factor，interleukin 6were significantly increased（P＜0.01）.Puerarialobata＋ Rhizoma Chuanxiong high and medium dose group and Puerarialobata group，Chuanxiong group compared with the model group rats brain water content and tumor necrosis factor，interleukin 6were significantly reduced（P＜0.05or P＜0.01）.ConclusionThe root and Rhizoma Chuanxiong combination on ischemia reperfusion rats may play aprotective role，its mechanism may be associated with brain water content，improve the nerve function and reduces brain inflammation factor content.

puerarialobata；rhizoma Chuanxiong；brain ischemia；reperfusion injury

10.3969／j.issn.1671－8348.2012.34.019

A

1671－8348（2012）34－3621－02

2012－06－09

2012－08－22）

·技术与方法·